基蛋生物肌酸激酶同工酶項目性能驗證

吳允鳳，劉玉蘭，劉 展，孫艷艷

（首都醫科大學附屬教學醫院北京市石景山醫院檢驗科，北京100041）

POCT（point of care test），又稱即時檢驗，是檢驗醫學發展的新領域，它的快速發展得益于當今高新技術的發展和綜合應用，也順應了目前高效、快節奏的工作方式，滿足了醫師和患者在時間上的需求，可使患者盡早得到診斷和治療［1］。CK-MB是目前臨床應用較多的POCT項目之一，尤其在急診科和重癥病房的應用非常有意義［2］。我院新進基蛋生物Getein1600熒光免疫定量分析儀一臺，我們實驗室參考EP9-A2、EP15-A、EP6-A對正確度、精密度、線性范圍進行性能驗證。

材料和方法

1 儀器與試劑

待驗證儀器為基蛋生物Getein1600熒光免疫定量分析儀，及其配套CK-MB試劑。參比儀器為雅培I2000全自動免疫分析儀及其配套試劑。雅培ARCHITECT i2000化學發光分析儀性能良好，可以為臨床提供準確、可靠的實驗數據，被廣大臨床醫生所認可。

2 驗證方法

2.1 正確度試驗 參考EP9-A2用患者樣本進行比對，每天選擇8個臨床患者樣本（樣本在具有臨床意義范圍即線性范圍內均勻分布）進行測定。本實驗共化5 d時間，對40個不同的臨床患者樣本，用本科已有的雅培I2000作為參比儀器和Getein 1600全自動免疫層析分析儀分別進行檢測和數據處理。

2.2 精密度驗證 依據EP15-A及樣品濃度參考值范圍，選擇本院3個標本，并對上述3個濃度的樣品每天分析1次，每個濃度重復檢測3次，連續檢測5 d，記錄結果。

2.2 線性驗證 依據EP6-A將高濃度和低濃度血清質控品按比例4H＋0L、3H＋1L、2H＋2L、1H＋3L和0H＋4L配制成5個濃度的測試樣品，在2 h內對每個濃度樣品檢測4次，計算平均值，并與理論值進行回歸分析。

3 統計學處理

利用SPSS17.0軟件、MedCalc 11.4.2.0對所有數據進行統計學處理。

結 果

1 正確度驗證

以雅培I2000檢測結果作為X軸，以Getein 1600全自動免疫層析分析儀檢測結果作為Y軸，結果分析如圖1所示，兩組數據線性回歸曲線為Y＝0.9112X＋0.6655，r＝0.9936＞0.975；根據圖2所示，Bland-Altman分析結果顯示，在一致性界限的上限為1.20，下限為0.85，僅2.5%（1／40）的數據落在95%界限以外；也就是說基蛋生物Getein 1600 CKMB項目測值是雅培I2000測值的0.85～1.20倍；如表1所示，在醫學決定水平處預期相對偏倚為0.22ng／mL，預期相對偏倚為4.40%；從臨床上考慮，這種差異可以滿足本院的臨床需求，因此這兩種方法具有較好的一致性。

圖1 兩種方法測定CK-MB結果散點圖

圖2 兩種方法測定CK-MB結果Bland-Altman圖

表1 在醫學決定水平處預期相對偏倚

2 精密度驗證

如表2所示，低濃度水平樣本（4.58 ng／mL）所測得總不精密度為8.75%；中濃度水平樣本（10.47 ng／mL）所測得總不精密度為9.29%；高濃度水平樣本（14.99ng／mL）所測得總不精密度為6.45%。試劑盒說明書聲明CK-MB批內不精密度≤10%，總不精密度≤15%。精密度驗證結果符合試劑盒說明書要求。

表2 不精密度檢測結果（CK-MB）

3 線性驗證

CK-MB項目線性范圍參考品理論值與測試平均值回歸系數R2＝0.9901，回歸方程為Y＝1.0405X＋0.8205，如圖3所示。說明書聲明的分析測量線性范圍是2.5～80 ng／mL，試驗數據表明，該檢測系統在3.06～72.51ng／mL濃度區間呈線性，該分析測量范圍通過驗證。

圖3 CK-MB檢測結果的線性范圍

討 論

隨著國民經濟水平的提高，社會的進步，人們健康理念的轉變，國家醫療體制的改革，臨床醫療及急救醫學發展的需要，促進了POCT技術的發展。POCT是一類極具潛力的檢測技術，它快速簡便、效率高、成本低，有檢驗周期短、標本用量少等優點。同時，其試劑穩定且便于保存和攜帶，已經被廣泛用于臨床，甚至自我檢測［3］。急性心肌梗死（AMI）屬于急性冠狀動脈綜合征的類型之一，一旦確診，治療的時間越早，預后效果越佳，患者存活率越高［4］。心肌酶譜是用于診斷AMI的最早標志物，連續的酶學檢查可方便了解梗死面積的大小及溶栓的治療效果。CK-MB升高快，清除快，相關文獻報道，CK-MB在未行PCI治療時峰值出現在12～24 h。所以快速準確的用POCT檢測CK-MB，能為AMI的早期診斷提供簡便、快捷、準確的檢測方法，為早期溶栓、急診PCI等有效心肌再灌注治療，改善冠狀動脈供血，提高患者生活質量，降低死亡率，改善預后提供重要的前提條件［5-6］。

正確度、精密度、線性范圍是性能驗證中最為常用的指標。我們參考了EP9-A2文件做正確度驗證，但未完全按照其做法。我們選取了40個樣本分5 d做完，且樣本濃度涵蓋線性范圍，但只是做了單次測定未進行重復測試。本實驗室雅培全自動熒光免疫分析儀檢測系統采用原裝配套試劑，同時操作人員經過系統培訓，整個系統一直參加全國衛生部臨床檢驗中心的室間質評活動，質評結果均優秀，是一可靠檢測系統，以此作為參照系統對基蛋生物Getein1600熒光免疫定量分析儀檢測系統作對比檢測。分析驗證方法的數據與參比試驗方法數據，二者在統計學意義上無差異，證明其正確度驗證良好?？偛痪芏仁峭暾貦嗪饬伺鷥?、批間及天間種種誤差因素，較為真實地反映了分析儀總的精密度，并且為了更好地檢出不穩定的誤差。已明確提出檢測系統的批內不精密度應為美國的臨床實驗室室間質量評估CLIA’88允許誤差的1／4，天間標準差應為該允許誤差的1／3，達到這樣要求的檢測系統，可認為它的隨機誤差屬于可接受的水平［7］。本次檢測CLIA’88推薦CK-MB允許誤差為30%，CK-MB的1／4允許誤差為7.5%，CK-MB的1／3允許誤差為10%。實驗結果顯示采用基蛋生物Getein1600熒光免疫定量分析儀檢測CK-MB的低、中濃度水平樣品總不精密度結果均小于1／3 CLIA’88允許誤差，在可接受范圍內。而廠家說明書聲稱的批內和總精密度范圍分別為10%和15%，則均在可接受范圍內。

目前臨床上所用檢測CK-MB的POCT儀器品牌多樣，蘇榮等［7］驗證過美國Biosite Biagnostics公司生產的Triage Metet熒光免疫干式快速定量診斷儀檢測CK-MB的正確性、精密度良好，符合實驗室要求。黃靜沁等［8］實驗得出CK-MB采用POCT法與電化學發光法有很強的相關性結果。目前POCT的管理缺乏統一的標準，只對血糖項目做出了規范化標準的專家共識［9］。對其他POCT項目儀器的準入和性能驗證，迫切需要有關部門做出統一的規范化標準，以供實驗室參考執行。我們所驗證的基蛋生物的這款儀器是國產儀器，經驗證其正確度良好、批內精密度稍稍超過國際規定范圍，總精密度良好，線性范圍良好，均符合廠家說明書聲稱標準。