探討絨毛細胞長期培養法在產前診斷及早孕和早中孕期自然流產病因檢測中的應用價值

唐干平，朱素優，曾育英

（惠州市第二婦幼保健院，廣東 惠州 516001）

染色體畸形病變是遺傳疾病中占比較大的一種，此類情況會導致嬰幼兒智力降低、生長發育速度緩慢、胎兒畸形以及器官異常等，部分胎兒還會出現流產或者不孕不育等，嚴重威脅著產婦以及胎兒的生命健康，可通過絨毛染色體分析對患者的基本情況進行檢測和判斷[1]?；诖?，共計抽取1058例患者參與本次研究，其中使用B超引導進行產前診斷的患者236例，早孕和早中孕期自然流產患者822例，患者均于2015年12月-2019年11月入我院進行檢查治療，探究產前診斷及早孕和早中孕期自然流產病因檢測中絨毛細胞長期培養法的應用效果，分析產前診斷及早孕和早中孕期自然流產時期絨毛細胞長期培養法的檢測結果差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 共計抽取1058例患者參與本次研究，患者均于2015年12月-2019年11月入我院進行檢查治療，其中使用B超引導進行產前診斷的患者236例，孕周10-14周，平均孕周（12.1±1.2）周；早孕和早中孕期自然流產患者822例，孕周5-17周，平均孕周（9.5±1.5）周；患者均無其他系統功能異常情況；患者均無藥物或者食物過敏情況；所有研究參與人員以及家屬對于本次研究以及參與要求均完全知曉且自愿配合。

1.2 方法 所有患者均進行絨毛染色體檢測，兩個患者患者絨毛標本才使用相同的方式進行細胞培養和染色體制備，①培養方法：使用無菌生理鹽水對無菌絨毛進行洗滌，通過顯微鏡對絨毛組織進行挑選，選出高質量的絨毛組織，通過手術刀將其切碎，接種在5 mL AmnioMax-II培養基中進行培養，該培養基需要放置在5%二氧化碳培養箱中，靜置6-7 d之后取出，使用顯微鏡對其進行詳細觀察，觀察到梭形細胞克隆之后方可給予置換液，繼續2-3 d的培養，如出現多圓形細胞即可收獲。②G顯帶染色體的制作方式：將0.5 ng/mL的秋水仙素加入培養瓶之中，混合均勻后放在37oC的培養箱中進行孵育，連續孵育2 h之后取出，使用胰蛋白酶對標本進行消化，時間控制在2 min，離心處理后取出上層清液，按照1:1的比例加入0.075 M KC1和1%的檸檬酸鈉混合液，低滲3-5 min之后加入2 mL 3:1 的甲醇和冰乙酸，固定液預固定30 min后進行離心處理，去除上層清液之后制作標本片，每管制片1-2張。

1.3 觀察指標 詳細統計患者絨毛細胞長期培養法的檢查結果，分析產前診斷及早孕和早中孕期自然流產時期絨毛細胞長期培養法的檢測結果差異。

1.4 統計學分析 以SPSS 20.0軟件對數據分析，計數資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用均數±標準差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

使用B超引導進行產前診斷的236例患者中培養成功例數為225例，培養失敗為11例，培養成功率為95.34%，11例培養失敗的患者中5例是由于污染影響，另外6例為細胞不貼壁生長；早孕和早中孕期自然流產822例患者培養成功例數為738例，培養失敗為84例，培養成功率為89.78%，84例培養失敗的患者中30例是由于污染影響，另外54例為細胞不貼壁生長；絨毛細胞長期培養在產前診斷中絨毛培養的成功率高于早孕和早中孕期自然流產中的成功率，經計算χ2=6.930，P=0.008；有統計學意義（P＜0.05）。使用B超引導進行產前診斷的236例患者中絨毛染色體異常例數為24例，異常率為10.17%；早孕和早中孕期自然流產822例患者中絨毛染色體異常例數為477例，異常率為58.03%；早孕和早中孕期自然流產絨毛染色體異常率與產前檢查相比明顯較高，經計算χ2=168.468，P=0.000；差異有統計學意義（P＜0.05）。產前診斷患者的絨毛培養天數為10-13 d，平均天數（11.5±1.2）d；早孕和早中孕期自然流產患者的絨毛培養天數為1-12 d，平均天數（11.4±1.4）d；經計算t=0.997，P=0.2319；兩組患者絨毛細胞長期培養法的培養時間分組對比無明顯差異，無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

絨毛染色體制備法首次提出于1983年，該制備方法為直接法，在實際檢測中主要通過低滲透、消化以及秋水仙素干擾的方式促進細胞的分裂，該檢測方式在實際實施過程中的操作方式比較簡單，耗費時間比較短，臨床應用價值較高[2-4]。本次研究中，絨毛細胞長期培養在產前診斷中絨毛培養的成功率高于早孕和早中孕期自然流產中的成功率，孕和早中孕期自然流產絨毛染色體異常率與產前檢查相比明顯較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。兩組患者絨毛細胞長期培養法的培養時間分組對比無明顯差異，無統計學意義（P＞0.05）?？梢?，絨毛細胞長期培養的應用能夠為產前診斷及早孕和早中孕期自然流產病因檢測提供相關參照指標，提升臨床診斷準確性，同時能夠根據檢測結果了解患者的實際情況[5-6]。

綜上可知，絨毛細胞長期培養在臨床中的應用可以作為產前診斷以及流產診斷的標志，臨床診斷中需要確保檢驗標本的新鮮度以及無菌性，嚴格按照要求進行絨毛細胞培養，為臨床診斷及治療提供基礎。