注射劑生產中的無菌技術

王衛國

摘要：無菌是注射劑的重要質量控制要求之一，近年來注射劑滅菌工藝變更補充申請數量劇增。本文結合日常技術審評工作，從注射劑滅菌工藝篩選研究方面，對注射劑的無菌技術進行了闡述，同時介紹了近幾年無菌生產的新技術。

關鍵詞：注射劑; 滅菌工藝; 滅菌工藝驗證;培養基模擬灌裝

注射劑是藥物與適宜的溶劑或者分散介質制成的供注入體內的一種制劑，在臨床應用時直接注射入人體組織、器官或者血液。無菌是注射劑的重要質量控制要求之一，合理并經過驗證的滅菌工藝過程、良好的無菌保證體系是實現注射劑無菌的重要保障。

賽進公司在注射劑領域的率先突破，改變了中國醫藥市場長期以來形成的格局，它專注于重大疾病和高技術難度藥物。在無菌注射劑產品的研發和生產過程中，采用了更為尖端的無菌溶液灌裝技術。首次在亞洲實現全隔離聯動線的大規模商業化生產，突破了國內普遍采用的高溫滅菌技術。生產全程無需高溫滅菌，高度的自動化體系最大限度地提高了藥品的有效性和安全性，并同時保證了生產過程的高安全性。

賽進公司生產的近4萬支無菌注射劑抗癌藥。作為中國首批直接銷往美國市場的無菌注射劑產品，這批藥物預計在3天內抵達美國田納西州孟菲斯，再被分發到美國各地的醫療機構。據悉此次銷往美國的國內首個無菌注射劑產品，刷新了多個“國內首次”——這家專注于重大疾病和高技術難度藥物的蓉企，是國內第一家公司整體通過美國食品藥品管理局（FDA）認證的制藥企業;去年7月該公司通過美國FDA國家級專家組的現場檢查，今年5月成為第一個產品獲得美國FDA上市批準的企業。在無菌注射劑產品的研發和生產過程中，首次在亞洲實現全隔離聯動線的大規模商業化生產突破了國內普遍采用的高溫滅菌技術。

滅菌工藝篩選研究

滅菌工藝篩選研究注射劑的滅菌工藝，一般可以從原料藥的化學結構特點與穩定性、處方篩選研究、生產過程控制研究、不同滅菌工藝的比較研究等等方面考慮進行。注射劑滅菌工藝的選擇一般按照滅菌工藝決策樹進行，首選終端滅菌工藝如果能夠耐受過度殺滅法（F 0≥12），則首選過度殺滅法;如不能耐受過度殺滅的條件可采用殘存概率法（8≤F 0<12）均應保證產品滅菌后的無菌保證水平（SAL）不大于10-6。如果有充分依據證明不適宜采用終端滅菌工藝可采用無菌生產工藝。

非最終滅菌小容量注射劑（F0<8）無菌工藝的模擬灌裝試驗。

無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和原料藥，按照生產工藝的不同可將注射劑分為最終滅菌和非最終滅菌兩種，非最終滅菌小容量注射劑（F0<8）部分或全部采用無菌生產工藝按照2010版GMP要求，需對無菌生產工藝進行培養基模擬灌裝試驗，以此評價其對產品無菌保證的有效性和穩定性，本試驗采用經除菌過濾的大豆胰蛋白胨液體培養基在與實際生產相同的條件下，連續進行三批培養基模擬灌裝試驗每批為10000支微生物培養結果均無菌生長。

1 試驗部分

1.1 試驗前需滿足的先決條件培養基模擬灌裝試驗是一項復雜、系統的試驗，試驗前必須滿足一定的先決條件：（1）潔凈廠房及HVAC系統、配制及洗烘灌封系統的確認已經完成;（2）公用工程的驗證已經完成，包括純化水系統、注射用水系統、純蒸汽系統、壓縮空氣系統;（3）各種滅菌工藝的驗證已經完成包括濕熱滅菌、除熱原工藝、無菌過濾工藝、配制及灌封系統滅菌;（4）人員已經過無菌操作、更衣程序的培訓。

1.2培養基的無菌性檢查

用經滅菌的0.22μm除菌過濾器，對配制好的液體培養基進行除菌過濾，濾芯過濾前后均進行完整性測試，將培養基灌裝于已滅菌的10支50 mL的試管中，每支灌裝12 mL加塞、密封。其中5支樣品在23 ～28℃培養14 d另取5支樣品在30～35℃培養14 d。14 d內若各瓶中無任何微生物生長，以此作為陰性對照。

1.3培養基的微生物促生長試驗

取過濾后的大豆胰酪蛋白胨液體培養基灌裝于已滅菌的14支50 mL的試管中，每支灌裝12 mL加塞、密封，其中9支試管每2支分別接種<100 cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌，1 支不接種作為空白對照，在30～35℃培養7d。另外5支，其中4支試管中接種<100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，在23～28℃培養7 d。7天內接種的各試管的培養基中應出現明顯的所接種的微生物的生長空白對照管應無菌生長則判定該培養基微生物性能生長試驗符合規定。

1.4模擬灌裝

安瓿瓶經洗瓶機清洗、隧道烘箱除熱原后進入灌裝線，開啟灌裝機，檢查設備運行情況良好調節相關參數后在與實際生產環境相同的條件下，進行培養基灌封，2批調節裝量為3.5 mL/瓶，灌裝速度為20瓶/min/針，第3批調節裝量為0.7 mL/瓶，灌裝速度為35瓶/min/針。無菌灌裝時限為14h。灌裝過程中模擬了上述設計的最差條件和干預事件?？刂乒嘌b速度設置灌裝前中后三個階段，每個階段約灌裝3333支，其余時間設備正常運行（不走瓶），灌封完的樣品及時傳出無菌區。

2 試驗接受標準

根據GMP無菌附錄要求，零污染是進行無菌工藝培養基模擬灌裝試驗的目標，若有任何污染發生均應當調查，根據灌裝數量的不同，具體標準見表4。

3 實驗結果分析與評價

3.1 培養基無菌性檢查

5支樣品在23～28℃培養14 d，另5支樣品在30～35℃培養14 d。14 d內若各瓶中無任何微生物生長，培養基無菌性檢查試驗合格。

3.2 培養基微生物促生長試驗

大豆胰酪蛋白胨液體培養基分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2支，在30～35℃培養7 d，接種白色念珠菌、黑曲霉各2支，在23～28℃培養7d，進行微生物促生長試驗，接種各試管微生物生長良好，空白對照管無菌生長。

3.3 培養基無菌灌裝結果

按照試驗中設計的所有最差條件和干預事件，培養基無菌灌裝過程中進行了模擬并記錄全過程為實際生產提供依據。

3.54模擬灌裝過程中環境監測

灌裝中各項環境監測均符合標準規定（除干預事件設計的溫濕度超標3次外），無菌環境合格。

3.5結果評價

在與實際生產相同的條件下進行了非最終滅菌小容量注射劑（F0<8）的培養基模擬灌裝試驗，其過程和結果真實反映了實際生產情況證明了非最終滅菌小容量注射劑（F0<8）無菌生產工藝對產品無菌保證的有效性和穩定性。

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