昆明市奶牛場鮮奶抗生素殘留調查

周鵬宇　劉霄　唐恩應　胡映開　鐘紹麗　楊國榮　尹革芬　亐開興

摘要：為了解目前昆明市奶牛場抗生素使用及殘留情況，對來自昆明地區6個奶牛場的鮮牛乳進行調查和抗生素殘留檢測。根據抗生素的抑菌作用，調查采用戴爾沃快速檢測試劑盒（Delvotest SP），對來自昆明市3個規?；膛ｐB殖場、3個奶牛養殖合作社共333份奶樣進行抗生素殘留檢測。結果發現，333份生牛乳檢樣中共檢出抗生素殘留陽性樣品44份，陽性率為13.21%，其中規?；膛瞿虡?6份中的陽性樣品數為0，未檢出陽性;而奶牛養殖合作社共297份樣品，陽性樣品44份，陽性率為14.81%;源于昆明市奶牛場的上市牛乳中存在抗生素殘留，殘留來源以合作社奶牛養殖場為主，表明不同管理模式對抗生素殘留有重要影響。

關鍵詞：鮮牛乳;抗生素殘留;戴爾沃快速檢測;抗生素

中圖分類號：S851.2? ? ? 文獻標志碼：A? ? doi：10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2020.02.054

Abstract：In order to investigate the current status of antibiotic usage and residues in the fresh milk from 6 dairy farms in Kunming，the fresh milk samples were subjected to detect the antibiotic residues and educational level of staffs. Based on the antimicrobial activities，333 fresh milk samples from 3 large-scale dairy farms and 3 dairy cooperative farms were carried out to detect antibiotic residues using Delvotest Rapid Detection Kit（Delvotest SP）. The results showed that the 44 of 333 milk samples were positive，with an overall value of 13.21%，while there was 0 of 36 samples without positive detection from the 3 large-scale dairy farms，and 44 of 297 samples from 3 dairy cooperatives were positive with a value of 14.81%. It indicated that there existed antibiotic residues in the dairy farms in Kunming，mainly originated from dairy cooperatives，displaying that the importance of different management models to antibiotic residues.

Key words：fresh milk;antibiotic residues;Delvotest SP;antibiotic

牛奶是營養比較全面、最容易被人體所吸收的食品之一，但近年來牛奶污染事件頻發，牛奶制品中的抗生素殘留問題也逐漸成為全社會共同關注的公共衛生問題。牛奶抗生素殘留是指在對奶牛使用藥物治療后或者以其他方式造成鮮奶的抗生素污染，導致抗生素以藥物原型的形式在牛奶中出現。長期飲用含有低劑量抗生素的牛奶對人體的危害是多方面，例如動物機體在反復接觸某一類抗生素后，體內的敏感菌株將受到選擇性抑制，細菌產生耐藥性，使疾病治療變得困難，也能引起大腸桿菌耐藥菌株的產生。經常食用一些含低劑量抗生素的牛奶還能使過敏性個體出現過敏反應，這些藥物包括青霉素、四環素，以及某些氨基糖苷類抗生素等，嚴重者引起休克、喉頭水腫、呼吸困難等嚴重癥狀，而青霉素引起的變態反應，輕者表現為接觸性皮炎和皮膚反應，嚴重者表現為致死性過敏性休克;鏈霉素對腦神經有明顯毒性作用，易引起耳聾。

為保證上市食用牛奶的質量，農業農村部于2003年5月發布《獸藥停藥期規定》對牛使用的停藥期分別為土霉素7 d，棄奶期3 d;四環素12 d，產奶期禁用注射用青霉素鈉，棄奶期3 d;磺胺二甲基嘧啶注射液28 d。牛奶中抗生素殘留主要原因有 4個：①非治療目的用藥;②治療目的用藥;③非法人為摻雜;④擠奶器械污染[1]。不同給藥途徑和劑量會造成不同程度的抗生素殘留[2]，為確保原料乳和乳制品中抗生素殘留量符合抗生素最大殘留限制要求，乳牛場、乳制品廠、政府監督部門都在努力探索準確可行的抗生素檢測方法，許多大型化學試劑和儀器公司也致力于開發抗生素殘留量的檢測方法和儀器。牛奶中抗生素殘留的檢測方法主要有微生物檢測法、理化檢測法、免疫學分析法[3-5]。實際上，通常應根據測定目標來選擇不同的方法[6-10]，Delvotest為最著名的微生物抑制法測定抗生素檢測法，為了使此類試驗更加操作易行，荷蘭Gist-brocades BV公司開發了Delvotest-P，Delvotest-SP，Del-votest cow- test，Delvotest-MCS檢測系列，而Delvotest cowtest適合奶牛場水平使用。為了解昆明市鮮牛奶中抗生素殘留情況，試驗采用價格低廉、操作簡單、靈敏度高、重復性好的Delvotest SP試劑盒對奶牛場現采鮮乳進行抗生素殘留檢測，促進昆明地區奶牛養殖業的可持續發展，利于促進消費者健康和奶制品生產安全具有現實的社會意義。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗材料

1.1.1? ? 供測奶樣

試驗于2016—2017年3次對昆明市3家規?；膛ｐB殖場和3家合作奶牛養殖場進行了現場采鮮乳的抗生素殘留檢測。

供測奶樣來源見表1。

1.1.2? ?儀器和設備

采樣管、冰箱、立式高壓蒸汽滅菌器、數顯恒溫水浴鍋等。

1.1.3? ?試劑

戴爾沃特快速檢測試劑盒（Delvotest SP NT），荷蘭DSM Gist-brocades公司提供。

1.2? ?試驗方法

1.2.1? ?調查問卷制作

通過前期對文獻的查閱與實地考察，確定調查問卷項目主要包括飼養管理人員受教育程度、奶牛場常用抗生素種類、患病奶牛的管理和治療期奶牛乳汁的處理等。

1.2.2? ?鮮牛奶中抗生素殘留的檢測

（1）樣品采集。要求著裝為消毒服裝;如果奶缸沒有專用的攪拌機器，用專用清潔的奶耙上下攪動25次以上，使罐內牛奶充分混合均勻，通過專用取樣勺取奶罐中部奶樣。

取奶樣時先用牛奶將采樣杯潤洗2次，再取樣250 mL。對規?；膛ｐB殖場從奶缸中取1份樣品，對奶牛合作養殖場每戶取1份奶樣，共計采樣333份。

（2）樣品檢測與結果判定。采用戴爾沃快速檢測法，檢測原理是利用微生物-嗜熱芽孢菌在64 ℃條件下培養2.5～3.0 h后會產酸，酸引起指示劑BCP（溴甲酚紫）變為黃色;若牛奶樣品中不含抗生素，培養后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素，嗜熱芽孢菌生長受到抑制而無法產酸，指示劑不會變色。按試劑說明書進行操作和結果判定：在白色背景前觀察，如果底部2/3固體介質是黃色，則為陰性;如果底部2/3固體介質是紫色，則為陽性;最終判定結果時與陰性、陽性對照管顏色作對比，如果陰性、陽性管顯色不吻合，需重新檢測。

1.3? ?數據分析與處理

采用SPSS 16.0軟件中t檢驗和x2檢驗對試驗數據作分析。

2? ?結果與分析

2.1? ?問卷調查統計與分析

調查共走訪3個規?；膛ｐB殖場和99個合作社奶牛養殖場生產管理人員共102人。

規?；膛ｐB殖場調查問卷見表2，合作奶牛養殖場調查問卷見表3。

由表2和表3看出，規?；膛錾a管理人員均接受過專業教育，具備一定的專業知識，在藥物使用及患病動物管理等方面處理措施相對合理;而合作社生產管理人員受教育程度多為初中以下，基本未接受過專業技能教育，生產管理多憑經驗，在用藥和病畜處理等方面缺乏系統管理。

2.2? ?抗生素殘留

2016—2017年分3次對昆明地區3家規?；膛龊?家奶牛合作社養殖場進行生鮮牛乳的抗生素殘留檢測，3家規?；膛ｐB殖場3次共抽檢樣品36份，均未檢測出抗生素殘留，陽性率為0。

規?；膛隹股貧埩粢姳?。

3家合作社奶牛養殖場3次共抽檢297份，除合作社D第1次未檢測出抗生素殘留外，其余均檢出抗生素殘留。合作社D，E，F陽性率分別為22.67%，18.52%和10.12%，平均陽性率為14.81%。

合作社奶牛場抗生素殘留見表5。

2.3? ?不同飼養管理方式對鮮牛乳抗生素殘留的影響

3家規?；膛ｐB殖場共計36份樣品中未檢測到抗生素陽性樣本，陽性率為0%，3家奶牛養殖合作社共計297份樣品中有44份抗生素陽性，陽性率為14.81%。不同養殖模式下抗生素殘留情況差異明顯，3次規?；瘓鰴z出率為0%，嚴格遵照國家休藥期規定、抗生素殘留未檢出陽性樣品。

不同飼養管理方式對鮮乳中抗生素殘留的影響見表6。

3? ?討論

（1）通過問卷調查發現，合作社生產管理人員受教育程度多為初中以下，基本未接受過專業技能教育和培訓，生產管理多憑經驗，在用藥和病畜處理等方面缺乏系統管理;奶牛群得不到良好的管理，導致奶牛疾病頻發;由于不具備良好的藥理藥物知識，對休藥期把握不準，對國家獸藥方面的法規基本不了解，飼養管理僅憑經驗。規?；膛ｐB殖場生產管理人員均接受過專業教育，具備一定的專業知識，在藥物使用及患病動物管理等方面處理措施相對合理，能嚴格遵照國家抗生素休藥期規定、抗生素殘留未發現陽性樣品。

（2）奶牛養殖合作社多為近些年來發展起來的農村養殖集體，為多個養殖戶集中養殖，各養殖戶各自為陣、管理比較混亂。一些農戶存欄頭數較少，自身抵抗風險的能力低，在奶牛發病后，沒有承受將“有抗奶”棄掉的經濟能力，仍將奶牛牽去集中擠奶交售;有時擠奶缸清洗不干凈，也會導致抗生素殘留或交互污染。規?；膛瞿膛４鏅跀递^多，飼養員或獸醫會將患病奶牛分圈飼養，并做好治療記錄。在擠奶時首先將全部健康牛擠完后，治療期奶牛才上機擠奶，并且進入一個專門的有抗奶缸，再由擠奶工仔細清洗并消毒擠奶設備，有效杜絕了“有抗奶”。

（3）從不同城市牛奶抗生素殘留調查看，不管是市售生鮮奶還是巴氏消毒牛奶，抗生素殘留情況都比較嚴重。寧鵬[11]利用TTC法對抗生素殘留檢測，西寧市個體飼養奶牛的鮮牛奶陽性率為6.15%（15/244）。馬群飛等人[12]報道福建省鮮奶抗生素殘留檢出率陽性率為19.77%（17/86）。楊慶文等人[13]檢測發現昆明市零售點市售不同包裝的鮮乳抗生素殘留陽性率為16.67%（18/108），而227 mL小包裝消毒鮮牛乳較高，為38.46%（15/39）。趙杰等人[14]對貴陽市超市袋裝奶和市郊散賣牛奶的檢出陽性率為1.67%（1/60）。鄧斌等人[8]對云南省市售鮮牛奶和巴氏消毒奶作調查，檢出率最高的是頭孢氨芐45.31%，其次是青霉素達35.94%。從超標的情況看，超標率達10%以上的藥物有10種，超標率20%以上的藥物有8種。牛奶中殘留的抗生素主要為青霉素和磺胺類藥物，其中頭孢氨芐和青霉素殘留最為嚴重。因此，加強鮮牛奶和乳制品的監管應該更細化，精確到各類抗生素，確保乳品安全[15]。

4? ?結論

（1）奶牛養殖合作社相對規?；膛ｐB殖場管理混亂，生產管理人員文化水平偏低，各戶各自為政，難以有效防止抗生素殘留。

（2）昆明市鮮乳存在抗生素殘留，檢出率13.21%，不同飼養管理模式對抗生素殘留具有明顯影響，抗生素殘留主要來自于奶牛合作社，規?；B殖場較為規范，調查中未發現陽性乳。

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