免疫膠體金技術在中藥材活性成分檢測中的研究進展

劉立微

摘? 要：中藥材質量主要取決于其自身活性成分，目前工作人員主要依靠儀器設備檢測中藥材自身活性成分，這種檢測方式較為復雜，無法做到快速檢測。而免疫膠體金技術可以有效改善這種情況，該技術具有較高靈敏度，較強的特異性，便于處理樣品，能夠快速檢測等特征，與傳統方式相比其實用性顯著。文章從該技術工作原理與特點等多方面對其進行介紹，并探究該項技術在重要活性成分檢測中的應用情況。

關鍵詞：免疫膠體金;中藥材活性成分;研究進展

膠體金是免疫膠體金技術應用過程中不可或缺的部分，利用該項技術自身具備的特征，可以在光鏡電鏡環境下對膠體金內部抗原物質金進行檢測定位，定性，甚至是定量研究，是一項全新的標記技術?，F如今，隨著科學技術不斷發展創新，該技術在應用過程中逐漸完善，成為第四大標記技術。因其本身具有高靈敏度，較強特異性，便于處理，快速檢測等多項優勢，已廣泛應用在各個檢測儀器當中，例如光鏡，電鏡，流式細胞儀等，最近幾年，該技術也被用于檢測中藥材自身活性當中。

1 免疫膠體金（ICG）技術的概述

1.1 ICG技術的基本原理及特點

1.1.1 基本原理

氯金酸若受到抗壞血酸，白琳等多種還原劑的影響將會形成某種顆粒物質，且帶有負電的疏水膠溶液，如果受到靜電影響液體會逐漸成為膠體狀態，故此將其稱作膠體金。運用還原法可以將氯金酸制成大小不一的膠體金顆粒。在弱堿環境當中，這種顆粒本身會帶有負電荷，能夠與其他直徑較大分子或者蛋白質分子融合在一起，利用顯微鏡對其進行觀察可以發現物質當中含有部分黑褐色顆粒，另外部分標記物與相應配體結合在一起會形成粉紅色斑點。膠金體無法影響蛋白質或者其他分子生物特征，因此該技術常被運用于免疫學，組織學等多項醫學領域當中。

1.1.2 特點

和其他醫學技術進行比較可以看出，免疫膠體金技術具有以下幾項特征;第一，該技術可以借助靜電發揮的作用與多種生物分子進行統合，且不會改變生物分子原有活性;第二，該技術擁有某種特異性，并不會吸收組織細胞;第三，免疫膠體金標記技術常用于光鏡和熒光顯微鏡當中，IGSS方法是目前最有效的免疫方法，因膠體金本身也可以激發電子，故此可以用于掃描電鏡工作當中，且其顆粒較為密集，且在顯微鏡環境下分辨率較高，因此分辨過程較為輕松。

1.2 ICG檢測技術的應用

1.2.1 膠體金技術在電鏡技術上的應用

目前隨著免疫膠體金技術愈發成熟，該技術在運用過程中已經與電鏡技術相互融合，且成為最為常用的免疫細胞化學方法。該技術不僅有上述所說的特征，且可以對抗原體進行測量，定性，觀察，通過觀察結果結合實際情況選用標記方法。免疫膠體金技術多重標記法可以將形態，功能融合在一起，借助這種方式能夠了解分子之間的關系，包括其合成，分泌等過程。借助不同方式觀察戊型肝炎病毒卻發現膠體金方法當中有許多病毒顆粒都被金屬顆粒包裹，根據金屬顆粒分布情況可以輕松找到病毒顆粒，由此可以看出免疫膠體金電鏡技術在運用過程中具有簡便，快速的能特征，提升檢測效果。

1.2.2 在快速檢測上的應用

免疫膠體金技術目前已經成為免疫學領域當中常用的檢測方法之一，主要用于檢測藥物中殘留的細菌，病毒等。常用的方法有膠體金免疫層析法、斑點免疫金滲濾法制成試紙條或試劑盒。制備鹽酸克倫特羅載體抗原，免疫動物后產生高效價的特異性抗體，純化抗體與膠體金結合成免疫金，制備成簡易的檢測試紙條。通過檢測試紙條的敏感性、保存期、金標抗體工作濃度選擇、操作方法對比、實驗檢測及與單抗金標試紙條平行檢測等試驗，證明建立的免疫金試紙法快速檢測鹽酸克倫特羅具有實用性、可靠性和穩定性。通過優化膠體金溶液的pH值和嘔吐毒素的三聯檢測卡。結果證明：該三聯檢測卡操作簡便、快速、準確、穩定，且能同時檢測3種真菌毒素，有較好的應用前景。

2 中藥材活性成分檢測方法的概述

2.1 化學檢測法

以往工作人員常用化學反應等方法檢測中藥材自身活性成分，從藥材內部將活性成分提取出來，并對其采取提純措施，根據成分自身化學結構選擇相應鑒別方法，例如可以用將鹽酸與鎂粉混合在一起，通過二者產生的化學反應鑒定蘆丁中的活性物質黃酮類化合物，觀察溶液顏色變化情況判斷液體當中是否含有相應化合物。和儀器檢測方法不同，該方法操作簡單便捷，且無需投入過多時間精力，但其靈敏度和專一性無法和儀器檢測法比較，這種方法無法做定量分析，故此該方法不常用于檢測中藥材活性成分。

2.2 儀器聯用法

為了提高檢測方法的專屬性、靈敏度、準確度等，通常將色譜的高效分離與質譜的高分辨力聯合應用，將色譜儀與質譜儀或其他儀器串聯使用。文獻中建立了超高效液相色譜一串聯質譜（uPLc-Ms/MS）測定癍痧涼茶中18種活性成分的定量分析方法，結果表明：所建立的方法線性良好、靈敏度高、精密度高、準確度好、穩定性理想。

3 免疫膠體金技術在中藥材活性成分檢測中的應用

大多情況下，中藥材活性成分檢測中會將單克隆抗體技術與ICG技術聯用，制備成膠體金免疫檢測試紙條。制備免疫膠體金試紙條，首先需制備相應的單克隆抗體，因中藥材活性成分多為小分子物質，只有反應原性而不具備免疫原性，必須將其連接到一些大分子蛋白載體上以形成偶聯物，借助大分子T細胞表位間接誘導B細胞激活、分化增殖，產生針對半抗原的特異性抗體。常見的載體有牛血清白蛋白、多聚賴氨酸等。而偶聯的方法由目標化合物的官能團決定，若半抗原帶有游離羧基，可用碳化二亞胺法、混合酸酐法、活潑酯法;若半抗原帶有酮基，可用manni ch反應和羧甲基羥胺法。半抗原與載體蛋白偶聯后通過純化獲得具免疫原性的人工合成抗原，并將其免疫動物，一般選用的動物為小鼠或大鼠，使動物體內產生致敏B淋巴細胞。處死動物并取出其脾臟，制備成脾細胞懸液，加入促進劑，再與同系的骨髓瘤細胞按一定比例混合，獲得雜交瘤細胞，通過色譜法或沉淀法純化抗體，并進行效價測定。

4 結束語

綜上所述可以看出，如今我國中醫藥在臨床領域已經得到廣泛的應用，對藥材需求量越來越多。然而因藥材資源匱乏，環境質量不斷下降導致大部分天然藥材安全性無法得到保障，甚至部分藥材已經出現變異情況。鑒于這種情況有關部門要加強對藥材市場的監管力度，結合實際情況選用檢測方法。目前，在對中藥材活性成分檢驗過程中，免疫膠體金技術已經成為最常用的檢測技術，和傳統技術進行比較可以發現，該技術方法簡單快捷，特異性較強，可以快速檢測出中藥材自身活性成分，發展前景廣闊。

參考文獻

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