血清DKK-1、LAG-3和SII在分化型甲狀腺癌診斷中的臨床價值

吳 玲，徐高峰

上海交通大學附屬第六人民醫院南院/上海市奉賢區中心醫院：1.普外科；2.急診科，上海 201499

甲狀腺癌是普外科常見的惡性腫瘤，其發病率占所有惡性腫瘤的1%～2%，按組織學類型分為乳頭狀癌、濾泡狀癌和未分化癌，其中乳頭狀癌和濾泡狀癌分化程度較好，故二者統稱為分化型甲狀腺癌[1]。分化型甲狀腺癌的超聲檢查診斷標準不統一，而超聲穿刺活檢受醫院條件的限制，由于為有創性，所以患者接受程度較差，易被漏診和誤診。因此，尋找一種無創、簡單易行和依從性好的鑒別良惡性甲狀腺腫瘤的方法，具有重要臨床意義[2]。重組人Dick-kopfx相關蛋白-1(DKK-1)是Wnt信號通路中的重要拮抗劑，惡性腫瘤患者血清DKK-1呈高表達，可以通過旁分泌和自分泌多種信號通路參與腫瘤的增殖和轉移；血清淋巴細胞活化基因-3(LAG-3)屬于免疫球蛋白家族的跨膜蛋白，對淋巴細胞具有活化作用，參與免疫應答的負反饋調節[3]；系統性免疫性炎癥指數(SII)是綜合中性粒細胞(N)、淋巴細胞(L)和血小板(P)數量，并與機體免疫應答密切相關的指標[4]。本研究對血清DKK-1、LAG-3和SII在分化型甲狀腺癌患者中的診斷價值進行比較分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年12月在本院就診的分化型甲狀腺癌患者98例作為分化型甲狀腺癌組，均行手術治療，并經病理檢查確診，其中男35例，女63例；年齡38～60歲，平均(46.68±8.64)歲；病理類型：乳頭狀癌71例，濾泡狀癌27例；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期35例，Ⅲ期32例，Ⅳ期16例。選擇同期在本院就診的良性甲狀腺結節患者75例作為甲狀腺結節組，均行手術治療，病理檢查確診，其中男28例，女47例；年齡37～60歲，平均(47.15±9.55)歲。選擇同期在本院健康體檢者45例作為健康對照組，其中男18例，女27例；年齡38～60歲，平均(46.23±7.28)歲。納入標準：所有受試者均知情同意并簽署知情同意書；本研究經本院倫理委員會審核通過。排除標準：其他惡性腫瘤；免疫性和血液性疾??；智力障礙和精神性疾??；高血壓、糖尿病和冠心病等慢性疾??；肝炎、結核病和肺炎等急慢性感染性疾??；孕婦和哺乳期婦女。3組受試者年齡、性別等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法

1.2.1血清標本留取 所有分化型甲狀腺癌患者入院時和術后2周，以及良性甲狀腺結節患者和健康體檢者抽取肘靜脈血5 mL。血液標本采用離心機離心，離心半徑15 cm，離心速度3 000 r/min，離心時間15 min，抽取上清液放置在除酶管內，置-70 ℃冰箱保存待檢。

1.2.2血清DKK-1、LAG-3和血常規檢測 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗檢測血清DKK-1和LAG-3水平，采用全自動酶標儀在450 nm處檢測吸光度值，并根據標準品制作標準曲線，計算出DKK-1和LAG-3水平，其操作步驟嚴格按照說明書執行。DKK-1和LAG-3檢測試劑盒采用美國R&D公司產品。采用血細胞分析儀檢測血常規，分別計算出N、L和P和絕對值。SII=P×N/L。

1.3觀察指標 比較分化型甲狀腺癌組、甲狀腺結節組和健康對照組血清DKK-1、LAG-3水平和SII，觀察手術前后血清DKK-1、LAG-3水平和SII變化情況，觀察各指標的相關性，以及診斷分化型甲狀腺癌的效能。

2 結 果

2.1各組血清DKK-1、LAG-3水平和SII比較 分化型甲狀腺癌組患者血清DKK-1水平和SII均明顯高于甲狀腺結節組，甲狀腺結節組患者又明顯高于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；分化型甲狀腺癌組患者血清LAG-3水平明顯低于甲狀腺結節組，而甲狀腺結節組患者又明顯低于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清DKK-1、LAG-3水平和SII比較

2.2分化型甲狀腺癌患者術后血清DKK-1、LAG-3水平和SII變化 分化型甲狀腺癌患者術后血清DKK-1[(61.58±6.13)μg/L]水平和SII[(368.31±114.68)]均較術前明顯降低(t=8.680、7.595，P<0.05)，而血清LAG-3[(533.91±126.64)μg/L]水平較術前明顯升高(t=13.174，P<0.05)。

2.3分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII與臨床病理因素的關系 分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII與淋巴結轉移和TNM分期有明顯關系(P<0.05)；而與性別、年齡、病理類型、腫瘤最大徑和腺外浸潤無明顯關系(P>0.05)。見表2。

表2 分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII與臨床病理因素的關系

續表2 分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII與臨床病理因素的關系

2.4分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平與SII之間的相關性分析 分化型甲狀腺癌患者血清LAG-3水平與DKK-1水平(r=-0.642，P<0.05)和SII(r=-0.716，P<0.05)均呈負相關，DKK-1水平與SII呈正相關(r=0.784，P<0.05)。

2.5血清DKK-1、LAG-3和SII對甲狀腺癌的診斷效能 血清DKK-1、LAG-3和SII對甲狀腺癌具有較高的診斷效能，通過將3項指標進行二元Logistic回歸分析得方程=0.148×DKK-1-0.013×LAG-3+0.009×SII-7.655，DKK-1、LAG-3、SII聯合檢測的靈敏度為88.8%，特異度為96.0%，受試者工作特征曲線下面積(AUC)為0.965，明顯高于DKK-1、LAG-3和SII(P<0.05)單獨檢測，而DKK-1、LAG-3和SII之間差異無統計學意義(P>0.05)。見表3和圖1。

表3 血清DKK-1、LAG-3水平和SII對分化型甲狀腺癌的診斷效能

圖1 血清DKK-1、LAG-3和SII診斷分化型甲狀腺癌的靈敏度和特異度

3 討 論

分化型甲狀腺癌由于缺乏典型的臨床表現，術前與良性甲狀腺結節難以鑒別，現有診斷方法主要有B超、CT和細胞學穿刺病理活檢，其單獨使用均不能達到滿意的診斷效果?，F有的CT和B超等影像學方法對診斷甲狀腺癌的靈敏度較低，易產生誤診。病理活檢雖然為確診手段，但其為有創檢查，患者依從性較差。血清學指標出現異常往往比癥狀早3～6個月，因此，早期血清學指標聯合檢測已是目前診斷惡性腫瘤的研究熱點之一。

DKK-1是一種分泌性蛋白，屬于Dick-kopfx-1家族成員，可以通過與相應的受體結合后調控細胞通路的傳導，對細胞的分化、增殖、凋亡和遷移有重要作用，在腫瘤的發生和發展中也有重要作用。DKK-1含有1個信號肽序列和2段富含半胱氨酸的保守結構域，其羧基端可以與低密度脂蛋白受體結合，對Wnt信號通路具有明顯的抑制作用[5]。DKK-1在不同腫瘤細胞中的表達明顯不同，在胃癌、腸癌和乳腺癌中呈低表達，在肝癌、肺癌和甲狀腺癌中呈高表達[6-7]。DKK-1在腫瘤中呈負反饋調節，Wnt信號通路對腫瘤的發生和發展具有重要作用，其在正常組織中呈低表達，在惡性腫瘤患者血清中呈高表達，通過自分泌和旁分泌激活多種信號通路，參與腫瘤增殖、浸潤和轉移的負反饋調節作用[8]。本研究發現，分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1水平明顯高于甲狀腺結節組和健康對照組，且手術后血清DKK-1水平較術前明顯降低，說明DKK-1水平降低與甲狀腺癌手術有一定的關聯，推測DKK-1主要來源于甲狀腺癌，參與了腫瘤的發生和發展。當血清DKK-1>64.30 μg/L時，其診斷分化型甲狀腺癌的靈敏度為77.6%，特異度為86.7%，AUC為0.858，對分化型甲狀腺癌具有較高的診斷效能，與文獻[9]報道血清DKK-1表達水平對胃癌具有較高診斷效能的結果接近。

LAG-3屬于免疫球蛋白超家族成員，是一種跨膜蛋白，在多種免疫細胞表面表達，可以選擇性活化T淋巴細胞和自然殺傷細胞，激活免疫應答，對腫瘤細胞增殖和遷移具有明顯抑制作用，參與腫瘤微環境和免疫調節作用[10]。LAG-3在腫瘤組織中表達并釋放入血，通過檢測LAG-3水平可評估腫瘤的惡性程度[11]。本研究發現，分化型甲狀腺癌患者血清LAG-3水平明顯低于甲狀腺結節組和健康對照組，并且術后甲狀腺癌患者血清LAG-3水平較術前明顯升高，說明LAG-3與甲狀腺癌具有密切的相關性，是分化型甲狀腺癌的重要保護因子，對甲狀腺癌具有負調節作用。本研究發現，當血清LAG-3≤446.09 μg/L時，其靈敏度為90.8%，特異度為73.3%，AUC為0.898，說明LAG-3對分化型甲狀腺癌有較高的診斷效能，與文獻[12]報道血清LAG-3水平是診斷胃癌的重要血清標記物，與腫瘤分期、浸潤深度和分化程度相關的結論相類似。

SII是已經廣泛證實的與惡性腫瘤的診斷和預后密切相關的重要指標，主要在肝癌、胃癌、甲狀腺癌和生殖細胞腫瘤中有重要臨床意義。SII升高代表高水平的P和N及低的L計數，P升高存在于10%～57%的惡性腫瘤中，是副腫瘤綜合征較為常見的一種，與腫瘤的惡性程度具有明顯相關性。腫瘤細胞與活化的P結合后，誘導上皮-間充質轉化[13]。N通過產生與多種腫瘤相關的炎癥因子，包括內源性和外源性途徑，改變腫瘤炎性微環境，增加腫瘤侵襲性和免疫監視的逃避[14]。而L通過誘導細胞毒性導致腫瘤細胞死亡，抑制惡性腫瘤細胞增殖和遷移[15]，對機體惡性腫瘤的免疫監視和防御具有重要作用，是惡性腫瘤發生免疫應答的重要部位[16]。本研究發現，分化型甲狀腺癌患者SII明顯高于甲狀腺結節組和健康對照組，與腫瘤的TNM分期和淋巴結轉移有密切關系，在診斷甲狀腺癌方面有較高的靈敏度和特異度。并且手術后甲狀腺癌患者SII明顯低于術前，說明SII參與了分化型甲狀腺癌的發生和發展過程。

本研究發現，血清LAG-3水平與DKK-1水平和SII均呈負相關，血清DKK-1水平與SII呈正相關，說明3項指標之間存在某種內在聯系；聯合檢測DKK-1、LAG-3和SII的靈敏度為88.8%，特異度為96.0%，AUC為0.965，明顯高于單項指標，說明3項指標聯合檢測診斷分化型甲狀腺癌具有某種互補性，其具體機制仍不清楚，需要進一步研究。

綜上所述，血清DKK-1、LAG-3和SII參與了分化型甲狀腺癌的發生和發展過程，對于分化型甲狀腺癌具有較高的診斷效能。