實驗室檢測數據在動物疫病防控中的應用

李曉麗/河北省承德市動物疫病預防控制中心 067000

近年來，隨著養殖業的迅速發展，動物疫病呈現出新的特點，動物疫病種類多發，多種動物疫病混合感染的情況愈發嚴重，隱性感染、非典型癥狀和混合感染無處不在，大大增加了動物的發病率和死亡率，給動物疫病的防控和凈化工作帶來了巨大的挑戰。僅靠傳統的流行病學調查、臨床癥狀和病理剖檢變化往往難以準確診斷動物疫病，如不能及時確診疫病、準確制定防控措施，可能會導致動物大量發病甚至死亡，造成巨大的經濟損失。因此，實驗室檢測的重要性也更加突顯，獸醫實驗室檢測結果是獸醫行政和執法的重要技術支撐，是動物疫病防控的重要組成部分，在確診疫病、檢測監測、流行病學調查、疫苗免疫效果評估和檢測母源抗體水平及動物疫病凈化等方面具有重要意義。

1 獸醫實驗室開展的主要檢測

根據《各級獸醫實驗室建設標準》及獸醫實驗室開展的實驗活動范圍規定，BSL-2 獸醫實驗室主要進行血清學檢測和病原學檢測。

1.1 血清學檢測血清學檢測的基本原理是利用抗原與相應抗體在體外特異性結合的特性，對樣品中的抗原或抗體進行定性或定量的檢測。在機體免疫應答過程中，主要分為細胞免疫和體液免疫，獸醫實驗室血清學檢測中，以體液免疫反應中的特異性抗體的檢測應用最為廣泛。常用的方法除傳統的沉淀反應、凝集試驗和補體結合試驗外，標記免疫測定，如酶聯免疫測定、熒光免疫測定等方法已成為主要的免疫測定技術。近年來，一些快速測定法如膠體金方法已被基層廣泛應用。目前，BSL-2 獸醫實驗室血清學檢測方法最常用的是ELISA（酶聯免疫吸附試驗）方法，該方法具有操作簡單、時間短、特異性強、敏感性高和機器判讀結果、減少人為誤差等優點。主要用于評估疫苗免疫效果和作為對未免疫動物感染的判定依據。

ELISA 既可以用于測定抗體，也可以用于測定抗原，用于獸醫實驗室檢測用的ELISA 主要分三種類型：雙抗體夾心ELISA、間接ELISA 和競爭ELISA。

1.2 病原學檢測病原學檢測一是采用分離培養、鑒定或直接染色鏡檢等方法直接檢測病原微生物如細菌、寄生蟲等，這種方法操作復雜，危險性較高，在BSL-2 獸醫實驗室做的相對較少。二是采用 PCR（聚合酶鏈式反應）方法，檢測樣品中病原微生物的核酸，從而間接反應病原微生物是否存在，這種檢測病原微生物核酸的方法更加便利、快捷，能夠在較短的時間得到檢測結果，應用更為廣泛。

PCR 技術的基本原理類似于DNA 的天然復制過程，由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成，具有特異性強、靈敏度高、對標本純度要求低、簡便、快捷等優點，越來越多的應用于動物疫病的診斷。目前實驗室應用最多的是PCR 和熒光PCR 技術，PCR 技術可以檢測病毒、細菌和寄生蟲等各種病原微生物，對樣品中的核酸進行定量和定性分析，可用于突發動物疫情的處置和確診動物疫病和流行病學調查等工作。

2 實驗室檢測數據對疫病防控的重要應用

實驗室檢測數據主要為動物疫病防控提供技術支撐，主要應用于以下方面：

2.1 確診疫病、處置突發疫情生產實踐中，由于亞臨床感染、陰性感染、非典型癥狀和混合感染等情況的存在，許多動物疫病已不能僅靠臨床癥狀和病理變化來進行準確診斷，尤其是非洲豬瘟、高致病性禽流感等重大動物疫病的診斷更需要實驗室檢測來確診。以《非洲豬瘟疫情應急處置指南（第四版）》為例，疑似疫情和確診疫情均需進行實驗室檢測，因為只有疫情確診后，才能按照程序采取劃定疫點、疫區和受威脅區、封鎖、撲殺、無害化處理等一系列后續措施。

同樣，在處置突發疫情時也需要進行實驗室檢測，只有根據實驗室檢測結果，才能準確判斷疫情等級，采取科學的防控措施，在撤銷封鎖、終末消毒等任何環節都需要實驗室檢測數據作為支撐。

2.2 檢測、監測和流行病學調查通過開展檢測、監測和流行病學調查，能夠掌握一定區域的主要動物疫病發生、流行趨勢，及時把握疫情動態，準確評估動物疫情，對疫情進行準確預警，制訂科學的防控措施，提升整體防控水平。

2.3 評估疫苗免疫效果和檢測母源抗體動物免疫尤其是使用活疫苗免疫時，免疫效果與其體內的母源抗體水平有很大關系，母源抗體水平高，會干擾疫苗的免疫作用，只有當母源抗體下降到一定水平后，使用疫苗才能充分的發揮其免疫作用，因此要制定科學合理的免疫程序，就必須進行大量的實驗室檢測，以確定母源抗體水平，從而為制定科學的免疫程序提供參考。

同樣，動物接種疫苗后產生的抗體水平與相關疫病的防控效果具有相關性。正常情況下，動物機體免疫抗體水平越高，動物群體免疫抗體合格率越高，對相應疫病的防控效果就越好。實驗室檢測能夠對動物免疫抗體水平進行監測，進而評估動物群體的免疫效果，可以此為依據評判疫苗質量、接種劑量、疫苗保存與運輸方式、免疫途徑及免疫程序的合理性。

2.4 動物疫病凈化新修訂的《中華人民共和國動物防疫法》中，動物防疫的方針由原來的“預防為主”調整為“預防為主，預防與控制、凈化、消滅相結合”，將動物疫病凈化提升到了一個新的高度。動物疫病凈化，是指在特定區域或場所對某種或某些重點動物疫病實施有計劃的消滅過程，達到該范圍內個體不發病和無感染狀態。動物疫病凈化主要采用“監測、檢疫、撲殺、消毒、無害化處理”等一系列的綜合性防控措施，構建“規范化、制度化、設施化、和無害化”的防疫和生產體系，最主要的就是通過實驗室檢測定期對感染特定病原微生物的動物個體進行準確識別，采取相應措施，以達到清除特定病原微生物、凈化疫病目的。

3 影響實驗室檢測結果的因素

實驗室質量管理的方針是科學、及時、準確，準確即要求“檢測報告以準確無誤為標準，確保檢測結果的準確性”，影響實驗室檢測結果準確性的因素主要有以下幾個方面：

3.1 人員現階段，我國大部分實驗室特別是基層獸醫實驗室還未達到試驗全過程機器化，主要還是采用人工檢測的方式，人員的素質和水平很大程度上決定了實驗室水平的高低優劣。專業技術人員的文化水平、專業技術能力、工作熟練程度、對待工作的態度以及解決問題的能力等，都是影響檢測結果準確性的重要因素。

3.2 儀器設備儀器設備的靈敏度和穩定性直接影響檢測結果的準確性，特別是精密儀器，需要定期檢定校準和維護，否則會降低儀器設備的準確度和精密度，縮短其使用年限。

3.3 樣品待檢樣品采集的是否規范及其質量對檢測結果的準確性影響也是非常大的，不同種類的待檢樣品和不同檢測項目的樣品的采集和制備是不同的，應按具體要求制樣。如進行血清學抗體檢測，如果待檢血清發生腐敗、溶血，那么很可能導致樣品抗體檢測不合格，如果用于檢測病原的棉拭子樣品不放保存液，就不能真正反映疫病的實際感染狀況。

3.4 檢測方法和檢測試劑根據檢測目的，選擇合適的檢測方法和敏感性、精確性相適應的檢測試劑，能夠保證實驗結果的準確性。檢測方法應優先選擇國家標準方法作為檢測依據，檢測試劑應優先選擇有獸醫批準文號的試劑，同時，根據平時工作經驗，選擇穩定性、敏感性和精確度均較高的試劑。

3.5 檢測環境在做血清學檢測中，抗原抗體反應是一個復雜的生物學反應過程，受很多因素的影響，溫度、濕度是重要的影響因素，特別是溫度的高低會影響抗原抗體反應的結合和解離，直接影響結果的正確性，因此獸醫實驗室應按規定安裝空調裝置，保障檢測環境符合檢測方法的要求。

檢測結果的準確性是評價和提高獸醫實驗室管理水平的重要手段，應加強獸醫實驗室管理，制定標準化的管理體系文件，確保有效運行，確保檢測結果更加科學、準確，使實驗室檢測數據在動物疫病防控工作中發揮更加重要的作用。

4 結語

加強獸醫實驗室管理，保證檢測結果的科學準確，才能夠更好的將檢測結果服務于動物疫病防控工作。