miR-124 聯合miR-570 在宮頸癌不同病變階段組織中的表達及其意義

孫鳳儀 黃 煜 劉敏敏 張樹超 趙田田

1濰坊市人民醫院婦產科 山東 濰坊 261041；2青島大學附屬婦女兒童醫院婦科中心 山東 青島 266075；3青島大學附屬醫院輸血科 山東 青島 266003

宮頸癌在女性常見腫瘤發病率中位居第2 位，全世界每年約有30 萬人因宮頸癌失去生命。近年來，宮頸癌的發病率增加并且年齡趨于年輕化，對女性的健康構成嚴重威脅［1］。宮頸癌早期無明顯癥狀，臨床上確診的患者多處于中晚期，且預后不良。因此，其早期診斷對其治療和預后具有重要意義［2］。目前，宮頸癌的發病機制尚未完全闡明。研究表明，宮頸癌的發生和發展是一個極其復雜的多階段過程，受多種因素的制約。其中核酸水平的調節與宮頸癌的發生密切相關，特別是微小microRNA（miRNA）可通過調節靶基因的表達影響腫瘤下游表型改變，進而調控宮頸癌的發生和發展［3，4］。其中，miR-124 是重要的抑癌基因［5］。研究表明，它可抑制許多腫瘤細胞 發 揮 作 用，如 卵 巢 癌［6］、胃 癌［7］和 乳 腺 癌［8］。而miR-570 已在肝癌［9］和慢性粒細胞白血?。?0］中進行了研究。但是，其在宮頸癌中的表達和診斷價值的尚無相關報道。因此，本研究通過檢測miR-124 及miR-570 在宮頸癌中的表達，探討miR-124 聯合miR-570 在宮頸癌早期診斷中的臨床價值。

1 材料與方法

1.1 一般信息對2017 年4 月至2019 年4 月在濰坊市人民醫院接受治療的60 例宮頸癌患者進行回顧性分析，以病變組織為實驗組。根據FIGO 分期標準：Ⅰ期22 例，Ⅱ期25 例，Ⅲ期7 例，Ⅳ期6 例。根據病理類型，宮頸鱗狀細胞癌35 例，宮頸腺癌25例。選擇同期體格檢查確診的另外57 名健康女性的正常宮頸組織作為對照組。取出所有組織并在-80 ℃快速儲存。兩組對象一般信息見表1。

表1 兩組患者的一般信息比較

1.2 納入和排除標準納入標準：（1）實驗組包括通過病理學確認患有宮頸癌的患者；（2）對照組包括通過身體檢查確認為健康的女性。排除標準：（1）在取樣前接受放療和化療的患者；（2）患有嚴重其他器官疾病的患者；（3）不配合檢查的患者；（4）患有認知和溝通障礙的患者。參與者及其家屬簽署知情同意書，配合醫務人員完成相關醫療，研究經濰坊市人民醫院批準。

1.3 實驗儀器和材料逆轉錄-定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）以及TRIzol 試劑（Invitrogen；Thermo Fisher Scientific，Inc.，Waltham，MA，USA）；qRT-PCR 試劑盒和逆轉錄試劑盒（Takara 生物有限公司）。

1.4 方法將腫瘤標本和正常宮頸組織從-80 ℃的冰箱中取出。加入TRIzol 試劑，提取組織RNA，得到1 μL 總RNA，分別加入特異性莖環引物。根據制造商的說明書進行逆轉錄cDNA。反應溫度：42 ℃，15 min，85 ℃，5 s。根 據 序 列 設 計 擴 增miR-124 和miR-570 的 引 物，U6 作 為 內 部 參 照 對 照。擴增條件：在95 ℃變性30 s，在60 ℃退火10 s，在72 ℃延伸20 s，總共40 個循環，在72 ℃延伸5 min 后停止反應。使用2-ΔΔCt方法計算和分析miR-124 和miR-570 的表達。

1.5 統計學分析采用SPSS 21.0 軟件進行統計分析，所有數據均以均數±標準差表示，兩組間比較采用t檢驗，P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 比較miR-124 和miR-570 在兩組之間的相對表達實驗組的miR-124 的相對表達水平為0.56±0.15，低 于 正 常 對 照 組 的 0.82±0.34（P＜0.05）；實驗組miR-570 的相對表達水平為0.63±0.18，低 于 正 常 對 照 組 的 0.86±0.37（P＜0.05）。詳見表2。

表2 miR-124 和miR-570 在兩組之間的相對表達

2.2 miR-124 和miR-570 在不同階段的相對表達比較在早期（Ⅰ～Ⅱ期）和中晚期（Ⅲ～Ⅳ期）的宮頸癌患者中，實驗組中miR-124 的相對表達水平分別為0.62±0.18 和0.28±0.16，miR-570 的表達水平分別為0.74±0.23 和0.34±0.11?？傮w水平均存在顯著差異（P＜0.01），表明臨床分期越晚，miR-124 和miR-570 的表達水平越低。詳見表3。

表3 miR-124 和miR-570 在不同階段的相對表達比較

2.3 單獨miR-124 和miR-570 檢測的診斷價值及其在宮頸癌早期（Ⅰ～Ⅱ）中的聯合檢測在早期宮頸癌患者的診斷中，miR-124 診斷的敏感性、特異性和曲線下面積（AUC）分別為83.56%，63.54%和0.753；miR-570 的診斷的靈敏度、特異性和AUC分別為82.18%，58.68%和0.682；而miR-124 聯合miR-570 的靈敏度、特異性和AUC分別為91.25%，61.23%和0.813。其 中，miR-124 聯 合miR-570 的敏感性和AUC顯著高于單獨的miR-124 和miR-570 診斷。詳見表4。

表4 miR-124 和miR-570 單獨檢測及其聯合檢測對早期宮頸癌的診斷價值

3 討論

宮頸癌是女性生殖系統中最常見的惡性腫瘤之一，近年來發病率不斷上升［11］。有研究報道，早期宮頸癌在臨床上不易被發現。一旦發現，往往處于中晚期，其復發、侵襲和轉移率較高，導致宮頸癌的治療和預后不良［12］。宮頸癌的發病機制是一個非常復雜的過程，涉及從正常宮頸上皮細胞到癌細胞浸潤的許多編碼和非編碼基因的結構和表達異常［13，14］。作為單鏈非編碼調控RNA，通過參與靶基因表達的調控，miRNA 在各種生物過程中發揮作用，如細胞增殖、凋亡、分化和遷移［15-17］。miR-124通過靶基因的調控與卵巢癌、胃癌、乳腺癌和其他腫瘤的發生密切相關。此外，研究報道miR-124 可通過直接靶向IGF2BP 抑制宮頸癌的生長和轉移，可能被發展成為一種治療宮頸癌的新方法［18］。Lin等［19］的研究表明，miR-570 在肝癌的增殖、血管生成和免疫逃逸中起著重要作用，可能是潛在的診斷和預測生物標志物。

為了闡明miR-124 和miR-570 在宮頸癌中的診斷價值，本研究比較了它們在病變組織和正常宮頸組織中的表達。結果發現，實驗組的表達低于對照組（P＜0.05）。然后，比較miR-124 和miR-570 在不同階段的相對表達。結果顯示，臨床分期越晚，miR-124 和miR-570 的表達水平越低（P＜0.05）。進一步評估miR-124 和miR-570 單獨及聯合檢測在早期宮頸癌中的診斷價值。結果顯示，單獨miR-124 診斷的敏感性、特異性和AUC分別為83.56%、63.54%和0.753，單獨miR-570 診斷的敏感性、特異性和AUC分別為82.18%，58.68% 和0.682，而miR-124 聯合miR-570 診斷的敏感性，特異性和AUC為91.25%、61.23%和0.813。聯合診斷的敏感性和AUC顯著高于單獨miR-124 和miR-570，表明miR-124 和miR-570 聯合診斷早期宮頸癌的價值高于他們的單獨診斷價值。

總之，miR-124 和miR-570 在宮頸癌組織中的表達顯著下調，而miR-124 聯合miR-570 的價值高于早期宮頸癌中單獨檢測的價值，其可用作早期宮頸癌的臨床診斷的優選解決方案。然而，目前關于宮頸癌中miR-124 和miR-570 相關的報道仍然很少。因此，未來需要進行更大樣本規模的調查以驗證并應用。