在肺結核細菌檢測中運用熒光定量PCR檢測法的臨床價值

溫曉萍

【摘要】目的：分析在肺結核細菌檢測中運用熒光定量PCR檢測法的臨床價值。方法：本文總共納入88例觀察對象，均是我院2016年5月—2021年5月收治的疑似塵肺合并肺結核患者，對88例患者開展熒光定量PCR與痰涂片抗酸染色檢測。將臨床診斷作為參照依據，比較兩種方法的檢測結果。結果：在檢出率、敏感度、特異度、陽性預測值以及陰性預測值上，熒光定量PCR明顯高于痰涂片抗酸染色檢測（P<0.05）。結論：熒光定量PCR檢測法用于肺結核細菌檢測的效果顯著，臨床可進一步推廣運用。

【關鍵詞】肺結核；細菌檢測；熒光定量PCR檢測法；臨床價值

Clinical value of fluorescence quantitative PCR detection method in the detection of pulmonary tuberculosis bacteria

WEN Xiaoping

Department of Laboratory， Huizhou Occupational Disease Prevention and Control Hospital， Huizhou， Guangdong 516001， China

【Abstract】Objective： To analyze the clinical value of fluorescent quantitative PCR detection method in the detection of pulmonary tuberculosis bacteria. Methods： A total of 88 observation objects were included in this study， all of whom were patients with suspected pneumoconiosis complicated with pulmonary tuberculosis admitted to our hospital from May 2016 to May 2021. Fluorescence quantitative PCR and sputum smear acid-fast staining were performed on 88 patients. The clinical diagnosis was used as a reference to compare the test results of the two methods. Results： The detection rate， sensitivity， specificity， positive predictive value and negative predictive value of fluorescence quantitative PCR were significantly higher than those of sputum smear acid-fast staining（P<0.05）. Conclusion： Fluorescence quantitative PCR detection method has a remarkable effect in the detection of pulmonarytuberculosis bacteria， and it can be further promoted and applied in clinical practice.

【Key？Words】Pulmonary tuberculosis； Bacterial detection； Fluorescence quantitative PCR detection method； Clinical value

肺結核在臨床上比較常見，是一種慢性的傳染病，患者在感染結核桿菌后不一定及時出現癥狀，當患者的抵抗力降低情況下才會引起疾病[1]。肺結核好發于5～35歲群體，該疾病可以侵及人體許多臟器，其中以肺部受累形成多發肺結核最為常見。近些年來，肺結核的患病人數不斷增加，達到了500萬，在全球各國的排名中位居第二，且呈逐年升高的趨勢[2]。因此，早期診斷和治療肺結核是非常重要的，可有效改善患者的預后。由于肺結核缺乏特異性，在臨床診斷過程中容易與其他肺部疾病相混淆，出現漏診和誤診的概率比較高，幫助患者選擇合適的檢測方法是臨床關注的重點。有學者在研究提出，熒光定量PCR用于肺結核檢測后，具有較高的檢出率[3]。鑒于此，本文將88例疑似肺結核患者為例進行分析，試探討熒光定量PCR檢測法的效果，以期為后續治療提供依據，具體報告內容請看下文。

1 資料與方法

1.1 一般資料

觀察例數有88例，觀察時間在2016年5月—2021年5月，觀察對象是我院收治的疑似塵肺合并肺結核患者，其中男患者49例，女患者39例，年齡20～62歲，平均年齡（41.52±3.46）歲。

納入標準：①患者年齡在20歲及以上，職業性塵肺??；②患者的精神正常，可以與醫護人員進行簡單交流；③患者的病歷資料齊全；④患者年齡>18歲；⑤本次研究得到倫理委員會的批準，且患者及家屬知情并配合研究。

排除標準：①患者在入組前確診為肺結核；②患者的精神異?；虼嬖谡J知障礙，不能配合完成檢測；③女性患者處于妊娠期或哺乳期；④患者不愿意參加研究或中途退出研究。

1.2 方法

88例患者均開展熒光定量RCP與痰涂片抗酸染色法檢查，詳細方法為：（1）熒光定量PCR檢測：①標本收集：收集患者晨起時的痰液作為檢測標本，首先利用雙氧水清潔口腔，防止干擾檢測結果；隨后叮囑患者用力深咳后，取第二次咳嗽的痰液，將痰液放入無菌器皿中送檢。②熒光定量PCR檢查過程：利用無菌吸管抽取1mL痰液中的膿性或黏稠標本，根據2：1的比例向試管中加入痰標本處理液，封閉試管后連續震蕩5min，隨后在室溫環境下靜置15min，確保痰標本能夠完全液化。完成標本處理工作后，利用廈門至善生物科技股份有限公司提供的熒光定量PCR儀（型號：SLAN？-96S）及配套試劑盒進行檢測。（2）痰涂片抗酸染色法：①標本采集：需要連續3d以上采集患者的痰液，痰液必須是患者清晨晨起深呼吸后咳出的痰液?；颊咴谇宄科鸫埠?，立即采用清水漱口，隨后深呼吸后進行咳痰，咳出的痰液即為標本；夜間痰應該是送痰前一天晚上咳出的痰液，隨后利用痰涂片法抗酸染色法檢驗痰液中的結核分枝桿菌。②痰涂片抗酸染色法的操作過程：固定好患者的痰標本后進行酒精燈加熱處理，之后將樣本放置到玻片上，并將抗酸染色劑滴注在玻片上進行染色，染色時間控制在30min，隨后利用流動的自來水沖洗標本，之后再次滴入染色劑，染色1min后再次利用流動自來水沖洗，并在室溫環境下自然風干。將風干的標本放入顯微鏡下方進行觀察，首先利用低倍顯微鏡進行篩查，然后利用高倍顯微鏡確認結果。

1.3 觀察指標

將臨床診斷作為參照標準，88例患者經臨床診斷發現陽性有69例，陰性有19例，比較熒光定量PCR與痰涂片抗酸染色法的檢測結果，仔細記錄檢出率、敏感度、特異度、陽性預測值以及陰性預測值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 23.0統計學軟件進行數據分析。計數資料采用（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料采用（χ±s）表示，進行t檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 分析痰涂片抗酸染色法的檢測結果

經痰涂片抗酸染色法檢測后，發現真陽57例，真陰12例，總共檢查出69例，診斷檢出率為78.41%（69/88），見表1。

2.2 觀察熒光定量PCR的檢測結果

經熒光定量PCR檢測后，發現真陽64例，真陰17例，總共檢查出81例，診斷檢出率為92.05%（81/88），見表2。

2.3 比較兩種方法檢測結果的差異

在檢出率、敏感度、特異度、陽性預測值以及陰性預測值上，熒光定量PCR明顯高于痰涂片抗酸染色法（P<0.05），見表3。

3 討論

肺結核是臨床常見的結核病，具有較高的發病率與死亡率，給患者的身體健康構成極大的威脅。據世界衛生組織統計發現，全球每年發生肺結核的人數達到800～1000萬，同時也是死亡率最高的單一傳染??；我國結核桿菌感染患者占了總人數的1/3，其中肺結核患者有500萬，在全球各國的排名中居于第二；在我國每年因肺結核死亡的人數有300萬，占非自然死亡的70.0%，占傳染疾病患者總數的10.0%?；颊吒腥窘Y核桿菌后，容易出現咳嗽、氣短、胸悶等癥狀，若是沒有及時進行有效處理，一旦擴散會給公共安全、患者身心健康帶來不良影響。因此，盡早篩查和積極治療肺結核是非常有必要的，對于早期確診和治療肺結核、改善患者的預后具有重要意義。

隨著生化技術的發展與完善，實驗室檢測手段引起了臨床的關注與重視，已成為各類疾病診斷的常用手段。痰涂片抗酸染色法是臨床檢測肺結核的常用手段，具有操作簡單、價格低廉等優點，其操作過程的穩定性與均一性較好，在密封儀器內完成切片、脫蠟、烘烤以及染色等步驟，減少了外界環境雜質的污染，提高了檢出率。但是，痰涂片抗酸染色法對于已經滲出的病變類型、典型結核結節的檢測存在一定的難度，再加上該方法的敏感度與特異度較低，提高了疾病漏診和誤診的概率，限制了臨床應用范圍。此外，由于肺外結核病患者痰液中的結核分枝桿菌的含量比較少，利用痰涂片抗酸染色法檢測后的效果也不理想，容易發生漏診和誤診情況。熒光定量PCR是近些年來新興的檢測手段，其在DNA擴增反應中，通過熒光化學物質來測定每次聚合酶鏈式反應循環后形成產物的總量，提高疾病診斷的準確度。熒光定量PCR是在PCR技術的基礎上發展而來的，其在PCR反應系統中加入一個熒光標記探針，激發的熒光信號值與所擴增的目標基因數量呈正比，通過對試管內熒光值的實時監測，來實現木板的定量檢測。當熒光定量PCR用于結核病檢測時，其主要利用結核分枝桿菌的特異性和結核分枝桿菌特異性的熒光反應來判定結核桿菌的性質，具有較高的檢測靈敏度；同時，熒光定量PCR通過PCR反應液與耐熱DNA聚合酶的變化，結合4種核苷酸單體來診斷疾病。本次研究結果發現，在檢出率、敏感度、特異度、陽性預測值以及陰性預測值上，熒光定量PCR明顯高于痰涂片抗酸染色法（P<0.05），表明相較于痰涂片抗酸染色法，熒光定量PCR的檢測效果更佳，敏感度以及特異度更高，有利于提高疾病診斷的準確率。追其原因是：相較于痰涂片抗酸染色法，熒光定量PCR技術的操作比較簡單，檢測速度比較快，具有很高的敏感度和特異度，有效提高了疾病檢測的檢出率，為肺結核的診斷和治療提供了科學依據。

綜上所述，熒光定量PCR用于肺結核的檢測效果理想，具有較高的檢出率、敏感度和特異度，可作為肺結核的輔助檢測手段，有利于臨床醫師了解患者的病情，為后續治療方案的制定提供依據，具有較高的臨床推廣價值。

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