三種方法測定合成魚腥草素片含量的結果比較

張 雁，劉長榮，梅 慧，鄧映明（通信作者）

（梅州市食品藥品監督檢驗所化學室 廣東 梅州 514071）

合成魚腥草素是魚腥草素的亞硫酸氫鈉加成物，具有抗菌[1-3]、抗炎及免疫調節[4-9]等藥理作用，臨床應用廣泛，常與抗生素聯用治療上呼吸道感染，慢性支氣管炎，肺炎等。市場上存在魚腥草素鈉與合成魚腥草素兩種制劑，但兩者均為化學合成產物，合成工藝相同，李雪等[10]研究證實，合成魚腥草素與魚腥草素鈉實為同一物質，應統一質量標準?，F行的合成魚腥草素片的標準為部頒標準WS1-34（B）-89，多年來未進行標準提高，較為滯后，其中含量測定采用碘量法進行滴定，在實際操作過程中發現碘量法易受輔料和不同廠家來源淀粉指示劑等多種因素干擾[11-12]，滴定終點藍紫色的顏色判斷，不同操作人員存在較大差異，數值判定因人而異，方法專屬性較差；現有文獻報道，合成魚腥草素含量測定方法除碘量法外還有電位滴定法、高效液相色譜法及毛細管帶電泳法等[13-15]。本文旨在比較高效液相色譜法、電位滴定法及碘量法在合成魚腥草素片含量測定上的差異，以期為建立質量標準提供參考。

1.儀器與試藥

高效液相色譜儀LC-20ADXR（日本島津公司），全自動電位滴定儀梅特勒G20 s（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司），梅特勒電子分析天平（XSR205DU/A，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。魚腥草素鈉對照品（批號：100247-202102，含量99.4%，中國食品藥品檢定研究院），合成魚腥草素片（廠家A：批號為202104501、202104502、202106501、202106502、202106503； 廠 家B： 批 號 為20210815、20211001、20211005）。碘滴定液（0.1 moL/L）（深圳市博林達科技有限公司，批號：20220701A1），甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2.方法與結果

2.1 高效液相色譜法

（1）溶液的制備。①對照品溶液：精密稱取魚腥草素鈉對照品25 mg，置50 mL 量瓶中，流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備溶液，取上述溶液依次稀釋成含合成魚腥草素約0.5、2.0、5.0、10.0、25、50 μg/mL 的系列標準溶液。②供試品溶液：取合成魚腥草素片10 片，除去糖衣，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于魚腥草素鈉25 mg），置50 mL 量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置50 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。（2）高效液相色譜法色譜條件。色譜柱：phenomenex Luna C8（150×4.60 mm 5 μm）；流動相：甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨溶液（55 ∶45 ∶0.3）；流速：1 mL·min-1，檢測波長286 nm；柱溫45 ℃；進樣體積20 μL。

2.2 碘量法

取合成魚腥草素片10片，置碘瓶中，加氫氧化鈉液（0.2 moL/L）100 mL，振搖使合成魚腥草素溶解完全后，移入冰浴中冷卻，加4 ℃以下的硫酸液（0.5 moL/L）40 mL，與淀粉指示液2 mL，立即用碘液（0.1 moL/L）快速滴定至顯藍色，每1 mL 碘液（0.1 moL/L）相當于15.12 m g的C12H23NaO5S。

2.3 電位滴定法

照“2.2”同法制備供試品溶液，浸入鉑-飽和甘汞電極，按電位滴定法，立即用碘滴定液（0.1 moL/L）迅速滴定。記錄消耗滴定液的體積與電位值，以電位e 為縱坐標，以滴定液體積v 為橫坐標，繪制e-v 曲線，曲線拐點處即為滴定終點。

2.4 方法學考察結果

2.4.1 線性關系考察 精密量取“2.1.1”項下系列標準溶液，照“2.1.2”項下色譜條件測定。以質量濃度為橫坐標（X），峰面積值（Y）為縱坐標，繪制標準曲線。合成魚腥草素在其線性范圍（0.50 ～50 μg/mL）內的回歸方程為y = 110.16x-6.6494（r= 1.000），表明其線性關系良好，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜法色譜圖

2.4.2 精密度試驗 取“2.1.1”項下對照品溶液，連續進樣6 次，每次20 μL，記錄結果。測得魚腥草素鈉峰面積RSD 為0.37%，表明儀器精密度良好。

2 . 4 . 3穩定性試驗： 稱取樣品6 份（批號為202104501），室溫下分別于0、2、4、8、12、24 h 在“2.1.2”項色譜條件下進行測定，測得合成魚腥草素峰面積的RSD 為0.58%，表明該供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

2.4.4回收率試驗：取已知含量的樣品（批號為202104502）適量（約相當于合成魚腥草素0.15 g，相當于5 片）加入原料藥0.12、0.15、0.18 g（相當于80%、100%和120%，因用量較大，用已知含量原料藥代替對照品），加入輔料，置具塞錐形瓶中，照3 種測定項下方法制備回收率樣品，依法測定，高、中、低3 種質量濃度的回收樣品（n= 3），求得加樣回收率，見表1。

表1 回收率試驗結果

2.5 3 種方法結果比較

分別采用高效液相色譜法、電位滴定法以及碘量法對合成魚腥草素片的含量進行測定，結果顯示，對于同一批樣品，高效液相色譜法與電位滴定法相當，而碘量法的測定結果較上述兩種方法測定結果高，見表2。

表2 3 種方法含量測定結果（%）

3.討論

原料藥測定結果。3 種方法測定原料藥結果一致，測定結果與廠家提供的原料藥含量一致。說明3 種方法在沒有其他因素的干擾下均能對合成魚腥草素進行準確定量。

輔料對結果的干擾。3 種方法測定結果表明，碘量法測定時含量最高，電位滴定法最低，高效液相色譜法的回收率較其他兩種方法高，更為準確。碘量法與電位滴定法原理一樣，為碘分子與合成魚腥草素中的亞硫酸根進行氧化還原反應，終點顏色由淺黃色至藍褐色的漸變過程；單獨對輔料進行空白滴定，需消耗2 ～3 滴的碘滴定液，這可能是碘量法測定結果較高的原因之一，電位滴定法溶液的顏色為黃棕色時曲線出現拐點，并未到達藍褐色，是造成結果數值較低的主要因素。輔料中的糊精也是對結果的判定不一致的重要因素，原料藥溶液澄清，終點為明顯的藍色，容易判斷，而輔料的加入使得溶液顏色變渾濁，由原來的澄清變成乳白狀懸浮液，滴定至接近終點時溶液顏色從黃色變成紅棕色，難以觀察到藍色變化，很容易造成干擾，導致終點的誤判；高效液相色譜法經過色譜柱的分離，可以很好地避免輔料的影響，測定結果可信度更高。

可溶性淀粉的選擇。淀粉可分為支鏈淀粉和直鏈淀粉，支鏈淀粉遇碘呈紅紫色，直鏈淀粉遇碘呈藍色，生成藍色配合物，此反應是特征反應，靈敏度高。故而不同廠家的可溶性淀粉他的指示效果各不相同，對終點顏色的判斷也不同，需要注意選擇。

綜上所述，通過高效液相色譜法、碘量法與電位滴定法三種測定方法進行比較，結果表明高效液相色譜法在有輔料干擾的情況下，更適合對合成魚腥素片含量進行測定，但碘量法與電位滴定法無需對照品，其對樣品的處理操作也比較簡單?，F行的合成魚腥草素片質量標準應該進一步完善。