高效液相法同時測定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸的含量

梁雪松 劉文佳 黃 靜 黃光偉

(柳州兩面針股份有限公司，廣西 柳州 545001)

前言

阿魏酸(ferulicacid)和異阿魏酸(isoferulicacid)是一種植物來源的酚酸，是以桂皮酸為母核的酚酸類成分的代表[1,2]。它們結構相似，是一對同分異構體[3]，且廣泛存在于升麻、藁本、川芎等中藥中，是這些中藥的有效成分之一[4-6]。它們具有廣泛的藥理學作用，如抗腫瘤、抗氧化、解毒、保肝等作用，是一種多靶點的抗腫瘤天然藥物，且性質穩定、毒性低[7]。

阿魏酸與異阿魏酸是兩面針中藥牙膏去漬中藥處方的功效成分，為了保證產品的功效，需對牙膏中的功效成分進行定量測定。已有文獻報道牙膏中異阿魏酸含量的測定[8]，但對同時檢測牙膏中阿魏酸與異阿魏酸含量卻未見報道。本研究采用高效液相法，建立牙膏中阿魏酸與異阿魏酸含量檢測方法，優化檢測步驟，提高檢測效率。由于牙膏是一種由十幾種原料組成的混合物，其中包含有表面活性劑和香精等多種成分，對分析干擾很大。為了達到理想的分離效果，作者采用甲醇-0.05%磷酸作為流動相，并以梯度洗脫的方法進行處理，并經過一系列的方法學試驗，以及相關結果表明：本方法穩定、準確，重現性好，是測定同時測定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸含量的可靠方法，為牙膏建立相應的質量控制方法提供依據；經過優化后，該方法簡便、快速，提高了檢測效率，減少了人力與物力成本。

1 儀器和試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀(G1311C Quat Pump VL，G1316A 1260TCC，G1315B DAD)；電子分析天平(ML204型，精度為0.0001g，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；高速離心機；磁力加熱攪拌器(RCT B S25型，德國IKA公司)；阿魏酸對照品，中國食品藥品檢定研究所(含量以99.0%計)；異阿魏酸對照品，中國食品藥品檢定研究所(含量以99.2%計)；牙膏(規格: 120克 /支,柳州兩面針股份有限公司生產)；甲醇為色譜純；磷酸為分析純；超純去離子水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：迪馬 DIKMA Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇(B)-0.05%磷酸水溶液(A)為流動相；梯度洗脫：0～15min，30%～60%B；流速為1.0mL/min，柱溫40℃，檢測波長為320 nm；進樣體積為20 μL。按此色譜條件下測定，牙膏樣品色譜圖見圖1。

圖1 牙膏樣品阿魏酸與異阿魏酸色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

分別精密稱取阿魏酸與異阿魏酸對照品10.5mg置100mL容量瓶中，加入適量甲醇，振蕩溶解，再加甲醇至刻度，搖勻。制成濃度為105.00 μg/mL的阿魏酸與異阿魏酸混合標液。

2.2.2 供試品溶液制備

精密稱定5g牙膏樣品，加入50mL甲醇，磁力攪拌20min，轉速800 rpm，使樣品充分分散，離心沉淀，取上清液，用0.45 μm濾膜過濾，濾液為供試品溶液。

2.3 線性關系考察

分別精密吸取2.2.1對照品溶液1.00、3.00、5.00、7.00、10.00mL于10mL容量瓶中，以甲醇定容至10mL。依次注入液相色譜儀，測定峰面積，以對照品濃度為橫坐標(X)，以峰高為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得阿魏酸的回歸方程為：

Y=6375899.82 X-0.1012202

r=0.99980

異阿魏酸的回歸方程為：

Y=7376794.69 X+1.9564695

r=0.99984

結果表明，阿魏酸與異阿魏酸的質量濃度在10.50～105.00 μg/mL范圍內與峰高呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

取牙膏樣品制備的供試品溶液，依前述色譜條件連續進樣6次，測定阿魏酸與異阿魏酸的含量, 其結果見表1。其中阿魏酸平均值別為8.08 ppm，RSD為1.44%，異阿魏酸平均值為57.71 ppm，RSD為1.03%，結果表明, 該方法精密度良好。

2.5 重現性試驗

取同一支牙膏平行稱取樣品6份，每份精密稱定5g，分別按2.2.2制備供試品溶液，進樣測定，結果見表2。測定阿魏酸與異阿魏酸的含量, 其中阿魏酸平均值別為8.02 ppm，RSD為1.89%，異阿魏酸平均值為57.20 ppm，RSD為1.44%，表明分析方法重現性良好。

表1 精密度試驗結果

表2 重現性試驗結果

2.6 回收率試驗

精密稱取已知含量的牙膏6份行樣，分別精密加入一定量阿魏酸與異阿魏酸對照品溶液，攪勻樣品，依照2.2.2制備供試品溶液，按上述2.1色譜條件進樣測定，并計算樣品加標回收率，結果見表3、表4。阿魏酸平均回收率為99.03%，RSD為1.06%，異阿魏酸平均回收率為99.46%，RSD為0.81%。實驗數據表明本方法準確可靠。

表3 阿魏酸回收率試驗結果

表4 異阿魏酸回收率試驗結果

2.7 牙膏穩定性試驗

把牙膏分別置于室溫與45℃烘箱中，在 0、1、2、3、6、9、12個月時，取牙膏樣品5g，精密稱定，按2.2.2制備供試品溶液,在前述2.1的色譜條件下，分別進樣，測定阿魏酸與異阿魏酸含量。結果見表5、表6、圖2、圖3。結果顯示, 牙膏中功效成分阿魏酸在常溫與45℃下其含量略有下降，12個月期考察期內，常溫樣品下降了17%，45%烘箱樣品下降26%；異阿魏酸在12個月的考察期內，常溫和烘箱樣品含量基本保持穩定，常溫樣品下降了1%，45%烘箱樣品下降4%；綜上所述，阿魏酸與異阿魏酸在牙膏中穩定性表現良好，能在牙膏有效期內保持良好的功效作用。

表5 阿魏酸穩定性試驗結果

表6 異阿魏酸穩定性試驗結果

圖2 阿魏酸含量穩定性

圖3 異阿魏酸含量穩定性

3 結論

建立了用高效液相色譜法同時測定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸含量的方法，實驗證明該方法的分離效果好，阿魏酸與異阿魏酸的質量濃度在10.50～105.00 μg/mL范圍內與峰高呈良好的線性關系，r阿魏酸=0.99980，r異阿魏酸=0.99984。阿魏酸平均回收率為99.03%，RSD為1.06%，異阿魏酸平均回收率為99.46%，RSD為0.81%。采用該方法測定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸的含量，該方法穩定，數據準確，重現性好，樣品處理方法簡便，結果可靠，是測定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸質量分數的可靠方法；較單獨檢測牙膏中阿魏酸與異阿魏酸的方法，該方法提高了檢測效率，減少了人力與物力成本。