紅絲酸模止血作用的初步評價

王業靜，錢 凱，陳 慧，郭昌洪

（荊州市中醫醫院，湖北 434000）

紅絲酸模為蓼科酸模屬紅絲酸模Rumex chalepensis Mill．的根及根莖，始載于《中藥志》［1］，又名網果酸模、金不換、止血草，味辛、苦，性涼。入肺、肝二經。在我國主要分布在湖北、江西、河南、浙江及安徽等地，其具有清熱解毒、破瘀消腫的功效，常用于止血和治療痢疾［2-4］。單味中藥金不換（學名紅絲酸模）沖劑是本院傳統藥，前期臨床應用認為，其具有理氣活血、破瘀生新、消腫生肌之功效用，單味藥或復方治療上消化道出血、幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）相關性胃炎、消化性潰瘍、十二指腸球部潰瘍等均取得了較好的療效［5］。但近年來鮮有其止血作用的藥理研究文獻報道，而且藥效物質基礎不清，本文通過對紅絲酸模體內止血藥效進行初步探討，為紅絲酸模臨床應用提供理論依據，也為后續對紅絲酸?；钚晕镔|基礎及科研制劑的研究提供試驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康KM 種SPF 級小鼠90 只，雌雄各半，體重（20±2）g，由長江大學醫學部實驗動物中心提供［許可證號：SCXK（京）2021-0018］。

1.1.2 藥物 紅絲酸模采自湖北省荊州市公安縣章莊鋪鎮，經黑龍江中醫藥大學王振月教授鑒定為廖科酸模屬植物紅絲酸模，去掉根莖殘基，根及根莖清洗干凈，切片，干燥，得其飲片。

1.1.3 實驗材料與試劑 陽性對照藥：云南白藥膠囊（云南白藥集團股份有限公司，批號ZHB2102）；無水乙醇（市售分析純）；羧甲基纖維素鈉（市售分析純）；真空采血管（武漢致遠醫療科技有限公司，批號20210222）；抗凝劑：枸櫞酸鈉（市售分析純）；灌喂針，毛細管（0.1 mm×100 mm），定性濾紙，移液槍，圓底燒瓶，布氏漏斗，抽濾瓶等。

1.1.4 實驗儀器 HH-M4 數顯恒溫水浴鍋（上海赫田科學儀器有限公司）；RE-3000A 旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；3-5N 臺式離心機（湖南恒諾儀器設備有限公司）；DFT-50A 手提式高速粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；PS-390 計時器（深圳追日電子科技有限公司）；篩網（5 號篩，80 目）。

1.2 方法

1.2.1 紅絲酸模水提物和醇提物的制備

1.2.1.1 水提物的制備 稱取紅絲酸模粉末50 g，加蒸餾水500 ml，浸泡2 h 后倒入圓底燒瓶，置于電熱套中加熱至微沸，煮沸30 min，過濾，離心取上清液，剩余藥渣再加蒸餾水400 ml，提取30 min，過濾，離心取上清液，合并兩次藥液，加熱濃縮至50 ml，濃度為1 g/ml。-20 ℃冰箱密封保存，備用。

1.2.1.2 醇提物的制備 稱取紅絲酸模粉末50 g，加75%乙醇500 ml，浸提48 h，布氏漏斗過濾，藥渣加75%乙醇400 ml，浸提48 h，抽濾，合并兩次濾液，濃縮，揮干溶劑，得浸膏5.750 5 g。每0.115 0 g 浸膏相當于原藥材1 g。置于-20 ℃冰箱密封保存，備用。

1.2.2 試驗分組與給藥

1.2.2.1 分組 健康KM 種SPF 級小鼠90 只（雌雄各半），體重為（20±2）g。隨機分9 組，分別為空白對照組，模型對照組，紅絲酸模醇提物和水提物低劑量組（1.95 g/kg）、中劑量組（3.90 g/kg）和高劑量組（7.80 g/kg），陽性對照組（0.26 g/kg），每組10 只動物。試驗期間動物都在相同的環境下進行飼養，動物自由地進食進水，明暗12 h 交替喂養。所有動物均于試驗前12 h 禁食不禁水。

1.2.2.2 給藥 紅絲酸模醇提物組和水提物組分別灌胃不同濃度藥物的0.5%CMC-Na 氯化鈉注射液混懸溶液，連續7 d，1 次/d；模型對照組、空白對照組給予等劑量0.5%CMC-Na 的水溶液，陽性對照組予云南白藥氯化鈉注射液溶液，連續給藥7 d，1 次/d。

1.2.3 小鼠胃潰瘍出血模型的制作 除空白對照組以外，其余的組別均需要建模。本實驗采用無水乙醇法建模。連續給藥7 d，1 次/d 灌胃，末次給藥1 h 后，灌胃給予無水乙醇10 ml/kg 造模，1 h 后分別采用斷尾法、毛細管法測定各組小鼠的出血時間和凝血時間，采血后頸椎脫臼處死，剖腹取胃，計算出血指數［6-8］。

1.2.4 考查指標

1.2.4.1 斷尾法測定出血時間 末次給藥1 h 后，用剪刀在小鼠尾尖10 mm 處剪斷，發現血液溢出時開始計時，每隔5 mm 處剪斷，發現血液溢出時開始計時，每次間隔10 s 用濾紙吸尾部末端一次，直至濾紙取吸無血跡為止，記錄實驗結果［9-10］。

1.2.4.2 毛細管法測定凝血時間 用內徑為0.1 mm、長10 cm 的毛細管斜45°插入小鼠內眥球后靜脈叢，自血液注滿毛細管開始計時，每間隔10 s 折斷毛細管10 mm，然后慢慢拉開，并觀察折斷處有無血凝絲出現，記錄從毛細血管采滿血到出現血凝絲的時間，每只小鼠取3 次，計算平均值，記錄實驗結果［9-10］。

1.2.4.3 胃潰瘍出血計分方法 采血后頸椎脫臼處死，剖腹取出胃，沿胃部大彎剪開，用NS 清洗，洗凈后展開，定型，計算出血指數。參考標準：瘀血點計1 分，線狀瘀血長度小于1 mm 者2 分，1～2 mm 者3 分，3～4 mm 者4 分，大于5 mm 者5 分，全胃指數總和即該小鼠的出血指數［11-12］。

1.3 統計學方法 采用SPSS 20.0 軟件進行統計分析，單因素方差分析和LSD 方法進行統計分析，數據結果用x±s 表示，P＜0.05 具有統計學意義。

2 實驗結果與分析

2.1 無水乙醇法建立小鼠胃潰瘍出血模型圖 無水乙醇法造模后，解剖模型組小鼠可肉眼觀察到與正常對照組不同，胃黏膜表現出一定程度的損傷，胃內壁較清潔，胃體松軟，缺少張力，可見點狀或條索狀黏膜出血。見圖1。

圖1 無水乙醇法建立小鼠胃潰瘍出血模型圖

2.2 出血時間和凝血時間 各組小鼠出血時間和凝血時間結果見表1。從表格中數據可知，與空白組比較，模型組小鼠的出血時間和凝血時間明顯延長，具有顯著性差異（P＜0.01），提示造模成功；用藥組中水提取物和醇提取物中、高劑量組小鼠出血時間和凝血時間明顯縮短，具有統計學意義（P＜0.05）。與模型組比較，紅絲酸模水提物及醇提物的中、高劑量組均能夠顯著縮短小鼠的出血時間和凝血時間，具有統計學意義（P＜0.01），但作用弱于陽性藥。

表1 紅絲酸模對胃潰瘍出血模型小鼠出血時間和凝血時間的影響（±s，n=10）

表1 紅絲酸模對胃潰瘍出血模型小鼠出血時間和凝血時間的影響（±s，n=10）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 給藥劑量（g/kg） 出血時間（s） 凝血時間（s）空白組 - 485.18±126.10△ 89.75±8.27△△模型組 - 612.11±124.78* 106.83±12.90**陽性組 0.26 282.00±105.06**△△58.84±5.51△△紅絲酸模75%醇提物 1.95 477.25±175.39△ 86.00±13.99△紅絲酸模75%醇提物 3.9 374.42±106.25*△△ 76.58±17.46*△△紅絲酸模75%醇提物 7.8 366.11±134.07*△△ 75.89±15.97*△△紅絲酸模水提物 1.95 471.50±107.42△ 82.17±9.94△△紅絲酸模水提物 3.9 347.11±121.90*△△ 78.85±9.53*△△紅絲酸模水提物 7.8 342.67±160.92*△△ 79.60±8.32*△△

2.3 胃潰瘍出血指數 由表2 中所知，與空白組比較，模型組出血指數明顯增大，具有顯著性差異（P＜0.05），也說明小鼠胃出血模型造模成功；與模型組比較，紅絲酸模水提取物及醇提取物中、高劑量均可以明顯減少小鼠胃的出血指數，有顯著性差異（P＜0.05）。

表2 紅絲酸模對模型小鼠胃潰瘍出血指數的影響（±s，n=10）

表2 紅絲酸模對模型小鼠胃潰瘍出血指數的影響（±s，n=10）

與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較△P＜0.05

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綜上所述，紅絲酸模水提物及醇提物中、高劑量組與模型組比較能顯著縮短出血時間、凝血時間（P＜0.01），能顯著降低出血指數（P＜0.05），肉眼可見出血點數和條數減少，顏色呈不同程度黑褐色著染，胃黏膜損傷明顯減弱。說明該劑量組紅絲酸模具有一定的止血作用，能對抗乙醇引起的胃黏膜出血性損傷。

3 討論

凝血時間和出血時間均為研究止血類藥物的常用篩選指標［12］。出血時間的長短主要與血液中血小板的質量和數量以及毛細血管收縮性能有關；凝血時間的長短主要與體內各種凝血因子的功能和含量有關。本實驗表明紅絲酸模水提物及醇提物中、高劑量組均能縮短小鼠凝血和出血時間，說明其具有一定的止血作用。正常的止血功能是由血管、血小板和血液凝固來完成的，三者相互聯系，協同作用。當血管壁破損時血小板才迅速定位于應當形成止血栓的位置，并與血管內皮暴露出來的膠原纖維和基膜結合，快速黏附到血管壁上，繼之血小板被活化，同時發生聚集，并釋放出多種凝血物質。在止血的初級階段血小板的積聚十分重要［13］。后期本課題組將在進一步對紅絲酸模止血活性成分進行篩選的同時，對其止血作用機制進行初步研究，包括血小板的生成和聚集、血管收縮性能、凝血因子和血液黏稠度等方面，以期為本院科研制劑的開發提供一些借鑒。

目前國內胃潰瘍出血模型常見的造模方法有幽門結扎法、水浸拘束法、消炎痛法、乙酸燒灼法及乙醇法等胃潰瘍模型［14］。此外，還可以采用熱性中藥進行造模，比如用干姜、肉桂和附子等各100 g 建立熱盛模型；辣椒水和乙醇混合給大鼠灌胃造成胃熱模型等。本實驗表明紅絲酸模水提物及醇提物高中劑量組對酒精性胃潰瘍有明顯的治療作用，然而不同的造模方法，可以形成不同的獨特證候，后期本實驗也將進一步對不同動物模型進行篩選研究，觀察紅絲酸模對不同證候的胃潰瘍模型是否具有治療效果，為臨床合理應用提供依據。