內蒙古地區新生兒耳聾基因篩查結果分析

高建軍 張姝 段宏

內蒙古醫科大學附屬醫院（呼和浩特 010030）

聽力障礙是人類常見的出生缺陷之一，每1000 名新生兒中有1～3 名新生兒受到影響。耳聾病因復雜，60%與耳聾基因遺傳相關。非綜合征耳聾是最常見的感音神經性聾類型，占遺傳性耳聾的70%[1]。對于一些遲發型或進行性聽力下降的新生兒，基因篩查尤為重要。我區于2019年開始將“新生兒耳聾基因、遺傳代謝病免費篩查”列入為民辦實事項目，旨在進一步完善常規聽力篩查聯合耳聾基因篩查的工作流程，彌補常規聽力篩查不能發現遲發性耳聾和藥物性耳聾基因攜帶者的不足，以達到早期干預、阻斷耳聾新生兒再發生，降低出生缺陷發生率，提高出生人口素質的目的。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2019年8 月-2021年7月在內蒙古17所醫院出生的30412 名新生兒。篩查前已明確告知聽力篩查和遺傳性耳聾基因檢測的相關知識，監護人或家屬簽訂知情同意書。

1.2 檢測方法

采用遺傳性耳聾基因芯片檢測技術，對被篩查對象的GJB2、GJB3、SLC26A4和線粒體12SrRNA四個常見耳聾基因的15個突變位點（GJB2：c.35delG、c.176_191del16、c.235delC、c.299_300delAT；GJB3：c.538C＞T；SLC26A4：c.919-2A＞G、c.2168A＞G、c.1174A＞T、c.1226G＞A、c.1229C＞T、c.1975G＞C、c.2027T＞A、c.1707 + 5G＞A；線粒體12SrRNA：m.1555A＞G、m.1494C＞T)進行檢測。

1.2.1 采血

產科執業機構專業人員與新生兒監護人簽署知情同意書后，填寫信息卡，按衛生部《新生兒疾病篩查技術規范》（2010年版）在嬰兒出生72 小時充分哺乳6-8 次后進行采血，采血時間與新生兒“甲狀腺功能低下、苯丙酮尿癥”篩查采血同步，制成血樣標本，并填寫《新生兒疾病篩查登記本》和《新生兒耳聾基因篩查登記本》，做好相關信息錄入登記。

1.2.2 遞送

各助產機構將制成的血片標本干燥冷藏保存，在規定時間遞送至指定婦幼保健院，指定婦幼保健院新篩實驗室負責血片的清點、驗收及與篩查機構血片交接工作，血片從標本采集運送至篩查機構實驗室最長時限不得超過5個工作日。

1.2.3 實驗室檢測篩查機構實驗室在收到血樣標本后的24 小時內做好信息核對登記，對不符合要求的標本應立即予以退回，并要求重新采集，對符合要求的標本，篩查機構嚴格按照實驗室操作流程和技術規范，在接到血片后15 個工作日內完成核酸提取、基因擴增和芯片檢測，并對檢測結果為陽性或可疑陽性的情況，即時免費復核，所有陽性結果出具具有法律效力的檢測報告。

2 結果分析（見表1）

表1 內蒙古地區耳聾基因篩查結果Table1 Hearing-loss-related genetic screening results of neonatal in Inner Mongolia

2.1 總體篩查情況

本次篩查30412 名新生兒，檢測出突變攜帶者905 例（其中5 例為兩個常見位點突變的雜合突變），突變基因陽性突變率為2.976%（905/30412），其中GJB2單基因陽性突變率最高，為1.312%（399/30412），其次由高到低分別為SLC26A4 基因1.236%（376/ 30412）、線粒體12SrRNA0.178%（54/30412）以及GJB3基因0.266%（87/30412）。受檢新生兒中未篩查到純合突變和復合雜合突變。各基因型中，GJB2基因c.235delC 單雜合突變型的突變率最高，為0.944%（287/30412）；其次為SLC26A4基因c.919-2A＞G 單雜合突變型，突變率為0.812%（247/30412）。

2.2 各等位基因突變位點檢查結果情況

GJB2基因各突變位點陽性突變率由高到低依次為c.235delC 0.944%、c.299_300delAT 0.309%、c.176_191del16 0.059%和c.35delG 0；對應突變頻率為35.965%、11.779%、2.256%和0。SLC26A4基因各突變位點陽性突變率由高到低依次為c.919-2A＞G 0.812%、c.2168A＞G 0.135%，c.1975G＞C 0.069%、c.1174A＞T 和c.1226G＞A 同為0.062%、c.2027T＞A 0.056%、c.1229C＞T 0.036%以及c.1707+5G＞A 0.003%；對應突變頻率為32.846%、5.452%、2.793%、2.527%、2.261%、1.463%和0.133%。

3 討論

本次基因篩查數據為內蒙古地區首次大規模應用于新生兒的耳聾致病基因篩查所得到的數據。數據結果顯示耳聾基因陽性突變突變率2.976%明顯低于王秋菊等對近年來全國出生的110 余萬例新生兒進行遺傳性耳聾基因檢測結果4.78%[2]，低于鄒玲等成都地區471994 例新生兒耳聾基因篩查的耳聾基因陽性突變突變率4.03%[3]、阮宇等[4]北京地區新生兒檢測4 個基因9 個位點檢出的突變率4.51%(3412/75649)以及潘蕾等[5]天津地區新生兒檢測4 個基因20 個位點檢出的突變率5.40%(4423/81929)和李瑪等[6]廣州地區新生兒檢測4 個基因9個位點檢出的突變率3.68%(266/7234)，明顯低于全國平均水平。從各等位基因突變位點分布情況來看，此次篩查結果發現內蒙地區GJB2基因和SLC26A4基因突變率較高。GJB2基因中c.235delC突變頻率最高，c.299_300delAT 突變頻率次之；SLC26A4基因中，c.919-2A＞G 突變頻率最高，c.2168A＞G 突變頻率次之。由上可知GJB2基因和SLC26A4基因為內蒙古地區新生兒常見致聾基因，且其中的熱點突變和常見突變與我國的總體情況一致。此外，我們此次篩查結果中未發現純合突變和復合雜合突變基因，可能存在地域差異，需在今后繼續增加篩查量以作進一步了解。

3.1 GJB2基因

GJB2基因是與聽力損失相關的最常見致聾基因。大多數由GJB2突變引起的病例都有嚴重的先天性聽力損失。內蒙古地區GJB2基因陽性基因突變率為1.312%，較Zhang JQ[1]天津地區58397例新生兒基因篩查結果95%CI（2.49%-2.75%）低，低于鄒凌[3]等成都地區2.24%、孫毅[7]等山東地區1.80% 以及張秋韻[8]等福建地區1.76%。此次研究顯示內蒙古地區常見突變熱點為c.235delC，其陽性突變率為0.944%，突變頻率為35.96%。前期結論內蒙古地區335 例非綜合征耳聾患者基因篩查結果發現GJB2突變的患者突變率為14.93%，最常見的突變位點c.235delC 占12.39%，其突變頻率為41.49%。戴樸等[9]對全國18 個省市聾校的耳聾患者進行耳聾基因篩查，篩查結果顯示GJB2基因c.235delC 位點的突變率為18.16%。此外戴樸等[10]2019年研究報道的GJB2基因常見致病突變位點為c.235delC，突變頻率為61.00%。我國有關GJB2基因突變的多項研究表明，不同地區GJB2基因突變頻率存在差異，GJB2基因在內蒙古地區新生兒中較低的突變率和前期結論非綜合征耳聾患者中較低的突變率以及突變頻率也進一步印證了GJB2基因突變在內蒙古地區可能存在的地域差異。

3.2 SLC26A4基因

SLC26A4基因突變與前庭導水管擴大綜合征（EVA）相關，聽力損失可在出生時或兒童早期發現。在我國SLC26A4基因最常見的突變位點是c.919-2A＞G，我們的研究結果顯示內蒙古地區最常見的突變位點是c.919-2A＞G，其陽性突變率為0.812%，突變頻率為32.846%，陽性突變率與鄒凌[3]等對于成都地區新生兒篩查結果接近，較Zhang JQ[1]天津地區58397例新生兒基因篩查結果95%CI（1.46%-1.66%）低。而前期結論非綜合征耳聾患者基因篩查結果顯示內蒙古地區耳聾患者SLC26A4基因最普遍突變位點是c.919-2A＞G，占非綜合征耳聾患者6.06%[11]，較戴樸等[12]研究顯示c.919-2A＞G的突變率12.50%低?？梢妰让晒诺貐^SLC26A4基因最常見的突變位點c.919-2A＞G 在新生兒群體和非綜合征耳聾患者群體中，均明顯低于全國平均水平，可能存在地域差異。

對于GJB2基因和SLC26A4基因突變耳聾患兒，及時佩戴助聽器、人工耳蝸植入效果好。因此，對早期聽力篩查聯合致聾基因篩查發現的有明確病因的聾兒進行及時干預，有助聾兒言語正常發育。

3.3 線粒體12SrRNA

線粒體12SrRNA是氨基糖苷類藥物毒性致聾基因中的突變熱點，同時也具有母系遺傳的特點。此次基因篩查共檢出線粒體耳聾基因陽性攜帶新生兒54 例，陽性突變率為0.178%，在Zhang JQ[1]等對天津地區58397 例新生兒基因研究顯示的陽性突變率95%CI（0.16%-0.23%）內，而王秋菊[2]對近年來全國出生的110 余萬例新生兒進行遺傳性耳聾基因檢測結果顯示此基因陽性突變率為0.23%，由此可見內蒙古地區線粒體12SrRNA陽性突變率與全國總體情況一致。線粒體12SrRNA基因屬于線粒體母系遺傳基因，該突變基因通過女性可以全部傳遞給她的下一代，而下一代中的男性不會將此基因繼續傳遞下去。線粒體12SrRNA突變基因對氨基糖苷類抗生素高度敏感，攜帶有該基因的個體，僅使用一次常規劑量的氨基糖苷類抗生素，即可發生聽力損失，主要是因為聚集在耳蝸細胞中的氨基糖苷類抗生素與12SrRNA突變基因相互作用，抑制線粒體的功能導致耳蝸毛細胞受損，最后出現聽力下降[13]。因此，為了及早揭示導致遲發性或氨基糖苷類敏感型聽力損失的遺傳原因，并識別具有致病性突變的攜帶者，將基因篩查納入當前的新生兒常規篩查對于維持攜帶此陽性突變基因兒童的聽力健康至關重要，因為這些兒童最容易受到遺傳和環境風險的影響。

此外，在2021年9月3日，WHO（世界衛生組織）發布了《聽力篩查技術指導》文件，文件針對不同年齡人群制定了循證聽力篩查方案，規范了新生兒聽力篩查策略，我們也應按照規范執行聽力篩查聯合耳聾基因篩查，從而更全面評估新生兒聽力水平，以促進對耳部疾病和聽力損失的早期干預。研究工作中，我們也發現了諸多不足。首先是基因篩查聯合新生兒聽力篩查的工作流程不夠規范，資料收集、信息完善不夠充分，導致只獲取了部分新生兒聽力篩查初篩結果（獲取的部分結果中14名新生兒聽力篩查初篩未過，另外有3 名新生兒聽力篩查單耳未過），后續篩查結果無法獲取或掌握信息不全面；其次由于宣傳工作不到位，新生兒家長對于致聾基因篩查工作的認識不足，重視程度不夠，從而導致部分家長拒絕篩查，或者篩查后失訪，未能得到后續的相關信息采集。下一步，我們會進一步完善工作流程，加強協調各醫院、工作人員工作，提高業務人員技能水平，完善信息采集，加強科普力度，做好解釋工作，積極做好隨訪，降低失訪率，能夠更有效地做好篩查工作，采集更全面的信息，以此為契機更全面了解內蒙古地區的耳聾基因突變特點，為制定有針對性的耳聾預防和干預措施提供參考。

4 結 論

常規新生兒聽力篩查既不能檢測到輕度聽力損失，也不能提示遲發性或藥物性聽力損失，常常因此遺漏部分患病兒童，從而錯過最佳治療時期，以致后期帶來的沉重的經濟、家庭以及社會負擔?；蚝Y查的目的不是診斷所有的遺傳性耳聾，而是作為聽力篩查的補充，以確保永久性聽力喪失兒童得到及時的識別和干預。為了實現這一目標，我們可以選擇一個有限的篩查面板進行人群遺傳篩查，因為與綜合診斷檢測方法相比，它具有成本低、周期快、易于解釋和結果不確定性低的優點。包括闡明病因，識別高危亞群，識別其他可能受益于早期干預的兒童，并告知高危新生兒及其母親親屬其對耳毒性藥物的易感性增加。

此次總結分析內蒙古地區新生兒耳聾基因篩查的結果對于掌握內蒙古地區致聾的常見基因突變位點的總體情況和分布特點有很大幫助，也為后期進一步增大基因篩查的樣本量和積累數據提供參考和依據?；诖舜魏Y查結果分析，對于我們下一步更加全面細致完善新生兒聽力篩查聯合基因篩查工作有很大的指導意義。也為我們在今后更加精準地投身耳聾出生缺陷防控工作、健康宣教、生育指導、遺傳咨詢以及耳毒性藥物的合理使用等方面提供充分的理論和實踐依據。

致謝:本研究得到內蒙古自治區科技計劃項目（項目編號2021GG0190）以及內蒙古自治區自然科學基金項目（項目編號2017MS（LH)0834）和內蒙古醫科大學附屬醫院科研項目（項目編號NYFY·YB·029）的支持。