虎杖提取物對急性痛風性關節炎大鼠的關節功能障礙指數及炎癥指數的影響

程晶

（泉州醫學高等?？茖W校，福建泉州 362000）

痛風最早可以追溯到公元前2640 年，是已知古老關節疾病的一種，隨著時代的發展，痛風已經演變成最常見的炎性關節類疾病。痛風性關節炎（gouty arthritis）是患病率高的炎癥性關節炎之一，分布廣泛，發病率為0.58 ～2.89（每1 000 人）。據統計，男性患者比女性患者多，每十年發病率和患病率都會有所增加，發病率在八十歲以上的個體中更為普遍[1]。不同的種群不同區域不同年齡層發病率也呈現不同態勢。越來越多的流行病學調查顯示，痛風與高血壓、糖尿病、慢性腎病等慢性疾病息息相關，且痛風和高尿酸血癥還是冠心病的獨立危險因素[2]。研究表明，血管內皮功能障礙可能與動脈粥樣硬化的發展有關，與痛風率和致殘率也有一定的關系[3]。痛風的炎癥過程是由尿酸鈉晶體（MSU）的沉積引起，它主要存在于關節、滑膜間隙和周圍組織中，并能引起急性疼痛，與嘌呤代謝紊亂和/或尿酸排泄減少所致的高尿酸血癥有直接的相關性，體內血清尿酸水平長期高于尿酸鈉結晶形成的飽和點，屬于代謝性風濕病范疇[4]?；⒄仁且环N中草藥，味苦，在免疫、抗凝血、降血脂、護心血管、抗菌、抗病毒以及抗癌等方面都有顯著作用。本文通過動物實驗探討虎杖提取物改善大鼠關節功能障礙，下調炎癥指數等功效[5]。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑、儀器

虎杖提取物飲片，福建中醫藥大學國醫堂；氧嗪酸鉀（尿酸氧化酶抑制劑98%），尿酸鈉，美國Sigma 公司；乙醇（75%），西隴化工有限公司；DHG-9140A 電熱鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；KQ5200B 型超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 實驗動物

SPF 級別健康的雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠18 只（上海斯萊克實驗動物有限責任公司），6 周齡，體重控制在（200±20）g。實驗前一周進行適應性喂養，后隨機分為正常對照組（NC）、急性痛風性關節炎組（AGA）及虎杖干預組（PC）。

1.3 實驗方法

1.3.1 急性痛風性關節炎大鼠模型建立

參考呂軍等[6]的方法，建立高尿酸血癥并急性痛風性關節炎大鼠模型。按無菌操作方法，用4 號注射針頭，將3%的氧嗪酸鉀（尿酸氧化酶抑制劑）搖勻，以1 mL/100 g 的劑量給予AGA 組和PC 組進行腹腔內注射，2 次/d，連續注射1 周后用6 號注射針在大鼠右側踝關節后側沿跟腱內側以30°～40°方向插入至關節腔，將0.2 mL 尿酸鈉溶液（25 mg/mL）注入關節腔內，以關節囊對側鼓起為注入標準。NC 組腹腔注射等量生理鹽水，關節腔內注射同其他組等量生理鹽水。

1.3.2 給藥方案

取虎杖飲片粉碎后過3 號篩，以65%乙醇、料液比1 ∶40，超聲（350 W、55 kHz）提取20 min，提取液經旋蒸后滅菌冷凍干燥，將凍干粉冷藏，得到虎杖提取物。制備稀釋液，建模同時PC 組給予虎杖提取物（200 mg/kg），每天一次，連續灌胃8 周[7]。

1.3.3 痛風各指標的觀察、記錄

在AGA 組炎癥出現后，按5 d 為一次間隔期循環2 個月進行觀察并記錄各組大鼠的一般情況、關節功能障礙指數、炎癥指數及腫脹情況。

（1）關節功能障礙指數。在炎癥出現后，以5 d為一次間隔進行關節功能障礙指數評分（參考臨床評分標準）：0 分為正常步態，雙足均勻著地；1 分為足著地減輕足趾未展開，輕度跛行；2 分為足屈起，趾背著地，明顯跛行；3 分為足完全離地，三足步態。

（2）炎癥指數。在關節炎癥出現后，以5 d 為一次間隔，進行關節炎癥指數的評分（參考臨床評分標準）：0 分為正常；1 分為踝關節出現紅斑和輕微腫脹，骨性標志可見；2 分為踝關節到明顯紅腫，骨性標志消失，但腫脹局限于踝關節部位；3 分為踝關節到跖趾關節或掌關節出現紅斑和中度腫脹；4 分為踝關節到跖趾關節或掌關節出現紅斑和重度腫脹；5 分為關節以外肢體腫脹。

（3）腫脹情況。通過米尺和游標卡尺測量實驗前NC 組、PC 組、AGA 組的關節周徑（mm），關節腔注射尿酸鈉溶液后測量一次周徑記為第0 天，然后每5 d 測量一次，以評估大鼠關節腫脹程度，關節腫脹度=測定時間點關節周徑-初始周徑。

1.4 數據統計與分析

采用Microsoft Excel 2007 與SPSS Statistics 17.0等軟件進行數據處理與統計分析；實驗數據以“平均值±標準差”（mean±SD）表示；采用t檢驗與LSD 多重比較分析組間差異。

2 結果與分析

2.1 大鼠一般情況

3 組大鼠活動情況有明顯差異。其中，NC 組能正?；钴S，同一籠大鼠之間無明顯差異；AGA 組由于關節腫脹明顯，不適合站立，所以采食量相對下降，將食物置于籠內后大鼠活動情況有所改善，攻擊性變強，建議單只單籠飼養；PC 組前期情況同AGA 組，后期隨著給藥時間的遞進，關節腫脹情況緩解，較AGA 組溫順。

2.2 關節功能障礙指數

關節功能障礙指數結果如圖1 所示。NC 組足趾無異常，雙足均能點地，行走無異常。與NC 組相比，AGA組其關節功能障礙指數保持高分值水平（P＜0.01），呈現三足步態，說明造模成功。PC 組每日給予虎杖提取物（200 mg/kg）灌胃治療，其關節功能障礙指數逐日降低，從第20 天開始，行動能力明顯變好，與AGA 組相比，PC 組能夠顯著減輕尿酸鈉溶液注射后引起的關節障礙（P＜0.01），可短時間站立覓食。

圖1 不同組別大鼠關節障礙指數評分情況

2.3 炎癥指數

與NC 組相比，AGA 組的炎癥指數保持平穩高分值（P＜0.01），再次說明造模成功；與AGA 組相比，PC 組每日給予虎杖提取物，從第25 天開始能夠顯著降低炎癥指數（P＜0.01），使關節腫脹由最初的踝關節到跖趾關節至掌關節出現紅斑的重度腫脹恢復到只有踝關節腫脹，結果見圖2。

圖2 不同組別大鼠炎癥指數評分情況

2.4 腫脹情況

由表1 可知，虎杖提取物灌胃后大鼠關節腫脹度降低，NC 組初始周徑與第60 天所測得的周徑相差不大。如圖3 所示，以NC 組足踝直徑30 mm 為標準，則NC 組＜PC 組＜AGA 組。

表1 不同組別大鼠關節腫脹度（n=6，mm）

圖3 腫脹情況比較圖

3 討論與結論

目前痛風一線治療藥物的療效存在局限性，中醫將痛風歸屬于“痹癥”?；⒄葹檗た?、多年生草本植物，虎杖的干燥根莖和根具有廣泛的藥理作用，具有利濕退黃、清熱解毒等功效，主治濕熱黃疸、風濕痹痛及癰腫瘡毒等，是治療痛風的傳統中藥?，F代藥理實驗表明虎杖具有改善微循環的作用，并能對抗細菌、對抗病毒、抗腫瘤、抗炎鎮痛，虎杖根莖的清熱解毒功效及其抗炎、抗氧化以及調節血管生成等作用已在相關領域得到肯定和重視[8]。在佐劑關節炎模型中，HAN等[9]對虎杖提取物的鎮痛和抗炎作用進行研究，發現其能有效抑制C 反應蛋白和類風濕因子的陽性反應，風濕性關節炎治療的有效候選藥物。王斌等[10]在急性痛風性關節炎大鼠滑膜組織中發現，虎杖提取物可以通過抑制ICAM-1 和NF-κB p65 異常表達，改善炎性癥狀，對關節局部起到保護作用。CHEN 等[11]發現已經晶體尿酸單鈉能引起痛風，但是炎癥狀況的機制尚不清楚。

動物模型和人體病理過程存在一定差異[12]，本實驗模擬急性痛風性關節炎，在造模成功后對大鼠給予虎杖提取物（200 mg/kg）灌胃兩個月，分析大鼠的關節障礙及腫脹情況，數周后發現大鼠的關節腫脹消退明顯，行為能力恢復情況良好，可為虎杖提取物的臨床應用提供理論基礎。但目前對于急性痛風性關節炎能否在體引起血管內皮功能障礙，以及其與血清尿酸和炎癥因子濃度的關系尚不明確，虎杖提取物改善模型大鼠血管內皮功能以及炎癥反應的作用及其機制還有待研究。