罕見的抗E、抗Kpa混合抗體1例

黃嫻,王維,解金輝,李彤彤(天津市血液中心免疫血液學研究室,天津 300110)

Kpa抗原(KEL3)屬于Kell系統的低頻抗原,抗Kpa非常罕見,可能引起嚴重的急性[1]、遲發性溶血性輸血反應[2]和胎兒貧血[3]、水腫[4]?？笶、抗Kpa混合抗體更未見報道且極易漏檢,近期本實驗室發現1例,現報告如下。

1 對象與方法

1.1研究對象 患者,女,32歲,骨髓增生異常綜合征,無妊娠史,有5次輸血史,最近輸注紅細胞為2月前。血紅蛋白43 g/L,申請輸注紅細胞,醫院輸血科檢測不規則抗體篩查陽性,送檢至本實驗室。

1.2試劑與儀器 正定型標準血清和反定細胞(上海血液生物公司);抗篩細胞、RhD標準血清(荷蘭Sanquin公司);譜細胞(荷蘭Sanquin公司,意大利REAGENS公司);抗球蛋白卡(美國Bio-Rad公司);Rh分型標準血清、IgG型單克隆抗Kpa、抗Kpb標準血清(德國CE-IMMUNDIAGNOSTIKA公司);聚凝胺試劑、0.2 mol/L二硫蘇糖醇(DTT)和0.01 mol/L DTT(長春博德公司);酸放散試劑盒(珠海貝索公司);KA2200離心機(日本久保田公司);毛細管離心機(德國Sigma公司)。

1.3血型血清學試驗 ABO正反定型、Rh分型、直接抗球蛋白試驗、抗體篩查和鑒定均按《全國臨床檢驗操作規程》第4版進行操作,酸放散試驗按試劑說明書進行操作,0.2 mol/L DTT處理紅細胞、0.01 mol/L DTT處理血清的IgM抗體參考AABB第20版,毛細管離心法按參考文獻操作[5]。效價采用試管法對血清倍比稀釋,抗E效價采用sanquin譜11號Ee、Kp(a-)細胞,抗Kpa效價采用sanquin譜8、16號ee、Kp(a+)細胞混合液,采用抗人球蛋白凝膠卡檢測。

2 結果

2.1患者血型 B型,Rh分型為CCDee,Kp(a-b+)。

2.2直接抗球蛋白試驗 采用抗球蛋白卡,患者直接抗球蛋白試驗2+。用毛細管離心法分離,近心端1+,遠心端3+。提示既往輸注的紅細胞被致敏,可能有輸血反應。

2.3抗體篩查和抗體鑒定結果 患者血清與抗篩細胞、Sanquin公司譜細胞在鹽水介質中均陰性,在抗球蛋白卡中除與E陽性細胞凝集外,與8號、16號ee、Kp(a+)細胞凝集強度為2+。為進一步確認,加做REAGENS公司譜細胞,在抗球蛋白卡中與9號ee、Kp(a+)細胞凝集強度也為2+。提示患者血清中除含有抗E外,還存在抗Kpa。

患者血清在聚凝胺介質中呈抗E格局,聚凝胺法對抗Kpa漏檢。血清與0.2 mol/L DTT處理后的譜細胞在抗球蛋白卡中也僅檢測到抗E,Kpa抗原被0.2 mol/L DTT破壞。

2.4抗體類型、性質和效價 患者血清經等量EE、Kp(a-)紅細胞充分吸收1h后,吸收后血清格局為抗Kpa,EE、Kp(a-)紅細胞吸收后酸放散液格局為抗E,說明患者血清中的抗E、抗Kpa為混合抗體,而非聯合抗體。

鹽水介質陰性,采用0.01 mol/L DTT破壞患者血清中可能存在的IgM抗體,處理前后血清與Sanquin公司譜細胞在抗球蛋白卡中凝集強度不變,確證本案例中的抗E、抗Kpa均為IgG性質。

患者血清在抗球蛋白卡中抗E效價16,抗Kpa效價64。

2.5放散液抗體檢測 在抗球蛋白卡中,患者紅細胞酸放散液與Sanquin公司譜細胞反應。由于放散液量的限制,選做部分細胞。1號ee、Kp(a-)凝集強度2+,3號EE、Kp(a-)凝集強度4+,8號ee、Kp(a+)凝集強度3+。酸放散液與含有E或Kpa抗原的細胞反應強于ee、Kp(a-)細胞。

2.6交叉配血 篩選B型,Rh分型為CCDee,Kp(a-)的懸浮紅細胞2 U與患者配血,鹽水法主次側均陰性,聚凝胺法和抗球蛋白卡結果主側均陰性,次側均1+。輸注后患者血紅蛋白值由43 g/L上升為57 g/L,無輸血不良反應。

3 討論

抗E在我國有輸血史人群中是最常檢出的抗體[6],而抗Kpa很罕見。Kpa抗原陽性的表型頻率在亞洲極低,在黑人中低于0.01%,在高加索人中較多,也僅為2%[7]。自1957年發現第1例抗Kpa(Penney)至今,PubMed數據庫共報道抗Kpa不足20例,多因妊娠、輸血等免疫刺激產生[8],另有1例為天然抗體、1例可能與細菌感染有關[9]。因輸血產生抗Kpa的多為淋巴瘤、地中海貧血患者等長期輸血患者。Kell血型系統抗體多為IgG型,主要是IgG1,在抗球蛋白介質中反應良好,可引起急性、遲發性溶血。由于Kell糖蛋白出現于紅系祖細胞上,抗Kpa可導致胎兒紅細胞生成抑制,造成胎兒貧血[10]。

本例患者無妊娠史,有多次輸血史,毛細管離心后直接抗球蛋白試驗遠心端強陽性,提示輸注紅細胞被致敏,可能輸注了E或Kpa抗原陽性的血液,混合抗體或與輸血免疫相關。另外,酸放散液與E或Kpa抗原陽性的紅細胞反應均強于ee、Kp(a-)紅細胞,放散液中可能存在抗E、抗Kpa,可考慮稀釋放散液,格局可能更明確。針對患者血清中的抗E、抗Kpa混合抗體,需篩選E和Kpa抗原陰性的血液輸注,由于患者Rh表型為CCDee,為排除抗E聯合抗c的潛在可能,給予CCDee、Kp(a-)血液更安全。此后4個月內,患者輸注8次B型、CCDee、Kp(a-)血液,共16 U,輸注效果良好,無不良反應,且4個月中患者直接抗球蛋白試驗結果逐漸由2+變為1+,最后變為陰性。

抗Kpa罕見但不應被忽視,國外有報道該抗體被電子配血漏檢而導致血管外溶血[11]?；仡櫛纠贵w鑒定:(1)因Kpa頻率低,譜細胞中陽性細胞數少,可使用多套譜細胞鑒定;(2)巰基還原劑可破壞Kell糖蛋白結構中半胱氨酸間的二硫鍵[12],從而破壞紅細胞上的Kell抗原,為抗Kpa鑒定提供依據。(3)聚凝胺試驗漏檢Kell系統抗體[13],若本案例僅采用鹽水法和聚凝胺法會漏檢抗Kpa。(4)混合抗體檢測時,運用吸收放散、效價等試驗有助于確證抗體。輸血前檢測應綜合運用多種方法,保障臨床輸血安全。