刺玫根多糖對環磷酰胺誘導的免疫抑制小鼠的免疫調節作用

查蘇娜,蘇日娜,齊和日瑪,彭斯格熱希,薩仁高娃

內蒙古醫科大學,呼和浩特 010110

刺玫根是薔薇科薔薇屬植物山刺玫(RosadavuricaPall.)的干燥根,別名山刺玫根,野玫瑰根,刺莓果根等。山刺玫廣泛生長于我國東北地區,其花、果實、根均入藥使用。刺玫根藥材標準收載于吉林省藥品標準中,其味苦、澀,性平,具有止血、抗菌作用,用于治療月經不止、功能性子宮出血、慢性氣管炎、腸炎、細菌性痢疾、膀胱炎和腎炎[1]。在蒙醫學中,刺玫根的蒙藥名為“哲日力各·扎木爾因溫都蘇”,其功效為祛協日、鎮赫依、消食,用于赫依協日癥、巴達干協日癥、胃協日癥、脈病、咳嗽、清肝毒等[2]。據研究報道,刺玫根含有內酯、鞣質、多糖、總苷、黃酮、酚類、生物堿類、蛋白質、蒽醌等成分[3-5],具有抗氧化[4,6]、降糖[6]、抗菌[7]、血管舒張[8]等藥理作用。Han等[9]報道了刺玫根多糖對衰老模型小鼠的免疫功能有改善作用,其他關于刺玫根多糖的研究甚少。

近年來,多糖作為一類具有多種生物活性的天然產物受到越來越多的關注[10],大量研究證明多糖具有免疫調節[11]、抗腫瘤[12]、抗病毒[13]、抗氧化[14]、降血糖[15]等多種活性。中藥多糖作為天然免疫調節劑,功效明確,副作用少,對免疫細胞、免疫器官以及腸道菌群等具有調節作用[16]。我國東北地區有豐富的野生山刺玫資源,其醫藥和功能性食品方面的研發將對地方經濟發展具有促進作用。刺玫根入藥較多,但相關保健品或食品中的應用較少。本文對刺玫根多糖進行提取、純化以及結構解析,同時對環磷酰胺(CTX)法誘導的免疫低下小鼠的免疫功能的調節作用進行評價并探討其作用機制,為今后的刺玫根多糖的開發提供了實驗數據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級KM屬小鼠,雄性,48只,體質量18～22 g,購置于斯貝福(北京)生物技術有限公司,合格證號為110324220104171893/SCXK(京)2019-0010。飼養環境溫度控制在20～25 ℃,相對濕度40%～70%,12 h明暗交替,小鼠可自由攝食飲水。

1.2 藥物與試劑

刺玫根棌集自大興安嶺,由內蒙古醫科大學蒙藥重點實驗室包勒朝魯教授鑒定為山刺玫(RosadavuricaPall.)的根。香菇多糖片(規格10 mg/片,批號:2203010,國藥準字:H42022727,湖北廣仁藥業有限公司);環磷酰胺(規格200 mg/瓶,批號:22041525,江蘇恒瑞醫藥股份有限公司);小鼠免疫球蛋白A(IgA,批號:34375734)、小鼠免疫球蛋白G(IgG,批號:32353771)、小鼠免疫球蛋白M(IgM,批號:34367262)、小鼠白介素-2(IL-2,批號:36397998)、小鼠白介素-6(IL-6,批號:38419241)、腫瘤壞死因子(TNF-α,批號:30331257)、γ干擾素(IFN-γ,批號:30331673)ELISA試劑盒(武漢新啟迪生物技術股份有限公司)。

1.3 儀器與設備

FA2004N電子天平(上海菁海儀器有限公司);Waters 515高效液相色譜、2410示差檢測器(美國沃特世科技有限公司);TU-1910雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);IRAffinity-1紅外光譜儀(日本島津株式公司);ICS5000離子色譜儀(美國賽默飛科技有限公司);渦旋混勻器(德國艾卡儀器設備有限公司);MEX-7222K全自動血細胞分析儀(日本廣電工業株式公司);SpectraMax-i3x全自動多功能酶標儀(美國分子儀器有限公司)。

1.4 刺玫根多糖的提取與分析

1.4.1 多糖提取與純化

提取:稱取干燥的刺玫根適量,粉碎成粗粉,按料液比1∶20 g/mL,溫度80 ℃,煎煮120 min,離心,取上清液在60 ℃減壓濃縮至原體積的1/5,之后緩慢加入4倍量的無水乙醇并不斷攪拌,4 ℃靜置過夜,抽濾,濃縮,冷凍干燥,得到刺玫根粗多糖。

Sevage法脫蛋白:稱取2.0 g粗多糖,配制成1%的粗多糖溶液,加入1/4體積比的Sevage試劑(氯仿∶正丁醇=4∶1)混勻,磁力旋轉20 min,分液漏斗內靜置30 min,去下層蛋白液,上層多糖溶液重復此步驟至無明顯蛋白層,流水透析48 h,蒸餾水透析24 h,旋轉蒸發儀濃縮,冷凍干燥,以BCA法測量樣品總蛋白含量。

三氯乙酸(TCA)法脫蛋白:稱取2.0 g粗多糖,配制成 1%的粗多糖溶液,加入10%TCA(6.0 g TCA溶于60 mL蒸餾水),磁力旋轉20 min,分液漏斗內靜置30 min,倒去蛋白層,流水透析48 h,濃縮,冷凍干燥,以BCA法測量樣品總蛋白含量。

分級沉淀:稱取1.0 g刺玫根脫蛋白粉,溶在150 mL蒸餾水溶解,分別用30%、40%、50%、60%比例的乙醇分級沉淀,離心,取沉淀,透析,進行GPC分析。得到60%乙醇沉淀物為200 mg,命名為刺玫根多糖(RDRP),用于結構鑒定及藥理實驗。

1.4.2 總糖含量測定

采用苯酚-硫酸法進行測定。以無水葡萄糖為標準品配置0.08 mg/mL的溶液,搖勻,得標準品溶液。分別吸取0、10、20、30、40、50 mL葡萄糖標準品溶液,用蒸餾水定容至50 mL容量瓶。從各容量瓶分別取2 mL溶液倒入試管,加5%苯酚溶液1 mL,濃硫酸5 mL,搖勻,90 ℃水浴10 min,冷卻至室溫,在490 nm處測定其吸光度。以葡萄糖濃度為X,吸光度為Y,繪制標準曲線?！?.4.1”所制得的多糖用雙蒸水溶解至50 mL容量瓶,得多糖樣品溶液。準確吸取2 mL,測定吸光度,根據葡萄糖標準曲線,求出多糖溶液濃度,計算刺玫根多糖中總糖含量。

1.4.3 分子量的測定

采用凝膠滲透色譜-示差檢測器(HPGPC)法對脫蛋白山刺玫多糖進行分子量測定,具體方法參照Mu[17]等報道的步驟和色譜條件。

1.4.4 紅外光譜測定

精密稱取樣品2.0 mg和溴化鉀200 mg,壓制成片,置于傅里葉變換紅外光譜儀進行掃描,掃描波段為400～4 000 cm-1。

1.4.5 單糖組成

取多糖樣品5 mg,置于安瓿瓶中,加入3 mol/L三氟乙酸(TFA)2 mL,120 ℃水解3 h。準確吸取酸水解溶液轉移至管中,氮吹干,加入5 mL水渦旋混勻,吸取100 μL加入900 μL去離子水,離心(12 000 r/min,5 min),取上清進行離子色譜分析。同時精密稱取11種單糖標準品(巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸)各5 mg置于安瓿瓶中,按照以上的方法處理得到混合標準溶液,根據絕對定量方法,測定不同單糖質量,計算出摩爾比。

色譜條件:Dionex CarbopacTMPA10柱(4 mm×250 mm,4 μm),檢測器為電化學檢測器,柱溫為30 ℃,進樣量為25 μL;流動相A為H2O;B為500 mmol/L NaOH和50 mmol/L NaOAC緩沖液;C為20 mmol/L NaOH;流速調節為1.0 mL/min;洗脫梯度為0～30 min:100%C;30～30.1 min:50%A和50%C;30.1～46.0 min:30%B和70%A。

1.5 刺玫根多糖的免疫調節作用評價

1.5.1 分組與造模

取KM小鼠48只,分為6組,即空白對照組(control group,Con)、模型對照組(model group,Mod)、陽性對照組(positive group,Pos)、刺玫根多糖高劑量(RDRP high dose,RDRP-H)、中劑量(RDRP medium dose,RDRP-M)、低劑量組(RDRP low dose,RDRP-L),每組8只?？瞻讓φ战M小鼠腹腔注射0.9%氯化鈉注射液10 mL/(kg·d),其他組小鼠均注射環磷酰胺80 mg/(kg·d),連續3 d造模,第4 d開始給藥14 d?？瞻讓φ战M與模型對照組用純凈水1 mL/(kg·d)灌胃,陽性對照組以香菇多糖片50 mg/(kg·d)灌胃,RDRP高劑量組以400 mg/(kg·d)、中劑量組以200 mg/(kg·d)、低劑量組以100 mg/(kg·d)劑量灌胃,灌胃體積為10 mL/(kg·d)。

1.5.2 臟器指數的測定

末次給藥后禁食12 h,不禁水,稱取各組小鼠體質量后,小鼠眼內采血,處死小鼠,取脾臟和胸腺,清除周圍脂肪或其他組織,濾紙擦去表面殘留血液和水分,稱量,計算臟器指數,計算方式為:脾臟指數(mg/g)=脾臟質量(mg)/體質量(g);胸腺指數(mg/g)=胸腺質量(mg)/體質量(g)

1.5.3 組織病理學觀察

取各組脾臟組織用固定液固定,石蠟包埋、切片,HE染色,顯微鏡下觀察小鼠脾臟和胸腺病理變化。

1.5.4 外周血細胞測定

小鼠眼內眥靜脈采血于抗凝管中,使用全自動血細胞分析儀測定白細胞、紅細胞、血小板、淋巴細胞、紅細胞平均血紅蛋白濃度。

1.5.5 細胞因子及免疫球蛋白含量的測定

眼眶取血,室溫靜置30 min,離心(4 000 r/min,10 min,4 ℃),取上清,采用酶聯免疫法,嚴格按照ELISA試劑盒操作步驟檢測免疫球蛋白IgA、IgG、IgM濃度變化和細胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6含量水平變化。

1.5.6 脾臟組織中相關蛋白表達的影響

取出脾臟,在生理鹽水中將血液沖洗干凈,去除其他蛋白組織,將脾臟放入凍存管,液氮中速凍,轉移至-80 ℃的冰箱保存備用。剪碎脾臟,研磨,加入10倍體積的RIPA裂解液,用勻漿器勻漿。離心(12 000 r/min,5 min,4 ℃),取上清,使用BCA蛋白濃度試劑盒測定濃度。配置SDS-PAGE凝膠,上樣,電泳,轉模,封閉,孵育一抗,孵育二抗,顯色,通過TANONGIS軟件讀取相關條帶灰度值。

1.5.7 統計學方法

2 實驗結果

2.1 刺玫根多糖提取與分析

2.1.1 提取與純化

采用水煮醇沉法提取刺玫根粗多糖,提取率為7.3%,得棕褐色絮狀物。經過Sevage法和TCA法分別脫蛋白處理,以BCA法測定其總蛋白含量,刺玫根多糖的總蛋白濃度從60.3 μg/mL分別降到10.3 μg/mL和6.0 μg/mL,表明TCA法的脫蛋白效果更有效。經過不同濃度的乙醇溶液分級沉淀,采用GPC法測定各分級醇沉物,得到相對分散度較低小于1.5的60%乙醇沉淀的褐色絮狀醇沉物RDRP,進行結構分析和活性評價實驗。

2.1.2 多糖總糖含量

采用苯酚硫酸法測定多糖總糖含量。葡萄糖為標準品,在0.0～80.0 μg/mL濃度范圍內呈良好的線性關系,線性回歸方程為Y=0.016 5X-0.018 3,相關系數R2=0.999 0。刺玫根多糖RDRP中糖含量為91.9%,用Sevage法和TCA法分別脫蛋白純化后,RDRP中糖含量分別為94.1%和90.2%。由此看來,TCA法脫蛋白效果雖然好,但糖的損失較多,所以Sevage法是山刺玫根多糖的最佳脫蛋白方法。

2.1.3 多糖分子量測定

采用凝膠滲透色譜法(GPC)測定刺玫根多糖RDRP的分子量。六種不同分子量的葡聚糖為標準品,分子量分別為5.8、11.8、47.3、100、380、788 kDa,得到標準曲線回歸方程為logY=26.5-3.81X+0.236X2-0.005 22X3,相關系數R2=0.999 9。GPC色譜圖如圖1。顯示RDRP由兩個不同分子量的多糖組成,保留時間為14.933 min的峰的重均分子量(Mw)為66.7 kDa,多分散度為1.1,面積為24 043μv*s,占總面積的13.3%。保留時間為17.550 min的峰的重均分子量(Mw)為13.1 kDa,多分散度為1.2,面積為156 434μv*s,占總面積的86.7%。由此看來,RDRP主要由重均分子量為13.1 kDa的多糖組成的。

圖1 RDRP的GPC 色譜圖

2.1.4 紅外光譜檢測

刺玫根多糖RDRP的紅外光譜圖如圖2。從紅外掃描結果看,3 383 cm-1是糖分子中O-H鍵的強伸縮振動吸收峰,是糖類的特征峰。2 928 cm-1顯示糖分子中C-H鍵的伸縮振動吸收,1 616 cm-1處的顯示糖結合水的吸收峰,1 522 cm-1處的吸收峰可能是C=O鍵的伸縮振動吸收,1 437 cm-1處顯示的弱吸收峰為糖分子中C-H鍵的變角振動吸收,1 367 cm-1處可能是C-H鍵的彎曲振動吸收峰,1 157 cm-1顯示糖分子環上C-O鍵的伸縮振動吸收,1 057 cm-1處的峰可能是O-H鍵的變角振動吸收,1 016 cm-1顯示吡喃環醚C-O鍵的變形振動吸收,762 cm-1處的吸收峰是α-構型吡喃環的對稱振動,說明RDRP含有α-構型的中性吡喃多糖。

圖2 RDRP的紅外光譜圖

2.1.5 單糖組成分析

采用離子色譜法對刺玫根多糖RDRP進行分析,色譜圖如圖3。結果表明,11種單糖標準品的保留時間相比較,刺玫根多糖中檢測到了5種單糖,即,阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖。其摩爾比為0.207∶0.121∶0.598∶0.040∶0.033。從摩爾比看出,RDRP主要由葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖組成的。其中,葡萄糖占59.8%,阿拉伯糖占20.7%,半乳糖占12.1%。

圖3 單糖標準品的混合溶液(a)和RDRP(b)的離子交換色譜圖

2.2 刺玫根多糖對免疫功能低下小鼠的影響

2.2.1 刺玫根多糖對小鼠臟器指數的影響

從表1可知,模型對照組體質量、脾臟指數、胸腺指數均明顯低于空白對照組(P<0.01),表明免疫低下模型小鼠制備成功。與模型組相比,陽性對照組和刺玫根多糖RDRP各劑量組脾臟指數和胸腺指數均顯著升高(P<0.05或P<0.01),說明其可促進免疫低下小鼠免疫器官的發育。

表1 各組小鼠體質量、脾臟指數、胸腺指數的比較

2.2.2 刺玫根多糖對小鼠組織病理的影響

在生物光學顯微鏡下觀察各組織病理的變化。從圖4中看出,脾臟空白組白髓和紅髓分布均勻,而模型組紅髓偏多,細胞排列不緊密且出現空泡狀。與模型組相比,刺玫根多糖RDRP各劑量組白髓顯著增多,分布均勻,表明淋巴細胞增多,且界限清晰。

圖4 RDRP對小鼠脾臟病理形態影響(HE,×100)

如圖5所示,空白對照組胸腺細胞排列整齊,皮質和髓質界限清晰,皮質主要由淋巴細胞和胸腺上皮細胞組成,皮質上淋巴細胞排列密集;髓質部分染色較淺,主要由大量的胸腺上皮細胞及少量淋巴細胞構成,髓質區可見大小不等圓形或橢圓形的胸腺小體。模型對照組胸腺皮質髓質界限清晰,髓質區可見胸腺上皮細胞空泡變性,髓質區細胞間隙增大。與模型組相比,刺玫根多糖RDRP各劑量組細胞界限清晰,可見胸腺小體。

圖5 RDRP對小鼠胸腺病理形態影響(HE,×100)

2.2.3 刺玫根多糖對小鼠外周血白細胞數量的影響

與空白對照組相比,模型組白細胞數(white blood cell,WBC)、紅細胞數(red blood cell,RBC)、血小板(blood platelet,PLT)、淋巴細胞數量(lymphocyte,LYM)明顯顯著降低(P<0.01),平均紅細胞血紅蛋白濃度(mean corpuscular hemoglobin,MCHC)顯著增高;與模型組相比,陽性對照組和刺玫根多糖高劑量組的白細胞、紅細胞、血小板數量均顯著升高(P<0.01或P<0.05);與模型組相比,刺玫根多糖RDRP低劑量組和中劑量組的白細胞、紅細胞、血小板數量有升高,但沒有顯著意義。與模型組比較,其他給藥組的淋巴細胞數量均有增高趨勢,而平均紅細胞血紅蛋白濃度均有降低的趨勢(見表2),提示刺玫根多糖RDRP可能上調免疫功能低下小鼠的外周血細胞來增強細胞免疫。

表2 各組小鼠血常規指標比較

2.2.4 刺玫根多糖對小鼠血清中免疫球蛋白IgM、IgG、IgA濃度的影響

由圖6可知,與空白對照組比較,模型組小鼠血清中的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM濃度水平極顯著下降(P<0.01),說明環磷酰胺免疫抑制小鼠模型造模成功。與模型對照組比較,刺玫根多糖RDRP各劑量組和香菇多糖組的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM濃度水平極顯著上升(P<0.01)。但是高、中、低劑量組之間沒有顯著差異。

圖6 RDRP對小鼠血清中免疫球蛋白IgM、IgG、IgA的影響

2.2.5 刺玫根多糖對小鼠血清中細胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6的影響

由圖7可知,與空白對照組比較,模型對照組小鼠血清中的IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6含量極顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,刺玫根多糖RDRP各劑量組和香菇多糖組均極顯著上調了IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6的含量(P<0.01),各劑量組之間沒有差異。這結果提示RDRP可能通過上調免疫低下小鼠血清中細胞因子的含量而調節免疫功能,緩解環磷酰胺引起的免疫低下狀況。

圖7 RDRP對小鼠血清中細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α的影響

2.2.6 刺玫根多糖對小鼠脾臟組織中相關蛋白表達的影響

采用Western blot法測定各組TLR4、MyD88、TRAF-6和NF-κB p65蛋白的表達水平。結果如圖8,與空白對照組相比,模型對照組小鼠脾臟的NF-κB p65蛋白顯著下降(P<0.01)。與模型對照組相比,刺玫根多糖RDRP各劑量組有上升趨勢,但無統計學意義,且濃度和劑量有依賴趨勢。與空白組對照組相比,模型對照組的TLR4、MyD88、TRAF-6蛋白表達水平顯著下降(P<0.01)。與模型組相比,刺玫根多糖RDRP各劑量組的TLR4和TRAF6蛋白極顯著上升(P<0.01),刺玫根多糖RDRP低劑量組的MyD88蛋白極顯著上升(P<0.01),刺玫根多糖中、高劑量組的MyD88蛋白水平有上升趨勢,但統計學意義。綜上結果,刺玫根多糖RDRP可能有由調節TLR4/MyD88/TRAF-6信號通路和NF-κB p65蛋白的表達水平來提升小鼠免疫功能。

圖8 小鼠脾臟中TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB蛋白表達

3 討論與結論

植物多糖具有多種生物活性而越來越受到天然產物研究者的關注。有生物活性的植物多糖在藥物、食品、保健品、綠色產品等領域上起著重要角色[18]。隨著科學技術的不斷進步,植物多糖的提取純化和結構鑒定技術逐步走向多樣化,比如熱水提取法、堿提取法、乙醇發酵沉淀法、酶輔助法、微波輔助提取法、超聲提取法、超聲輔助酶提取法、亞臨界水提取法、超高壓提取法、減壓/真空提取法等陸續報道[19]。這些方法都有利弊,其中熱水提取法雖然提取率不是很高,但經濟、無毒、安全、無損害細胞壁等優勢而常用在多糖提取中。本研究中采用熱水提取/乙醇沉淀方法,從刺玫根中提取多糖,并用兩種方法進行脫蛋白。結果表明,TCA法脫蛋白效果明顯,但糖的損失較多,所以Sevage法相比TCA法更適合山刺玫根多糖的脫蛋白。經過乙醇分級沉淀,得到60%醇沉多分散度相對較小的多糖RDRP,其糖含量為94.1%。植物多糖的結構直接影響其生物活性,可采用分子量分布、紅外特征吸收峰、單糖組成等來鑒定多糖基本結構[20,21]。本研究中,GPC法測定刺玫根多糖分子量,發現RDRP為重均分子量為13.1 kDa,少含分子量較大(66.7 kDa)的混合多糖。其紅外檢測結果表明,刺玫根多糖是含有α-構型的中性吡喃多糖。單糖組成分析表明,主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、木糖組成。但其單糖支鏈連接方式有待進一步深入研究。

免疫系統包括免疫器官、免疫細胞和免疫分子,它們共同作用保護機體免受病原體的侵害。胸腺和脾臟是主要的免疫器官,在產生和維持免疫細胞方面起著重要作用[22]。作為體液免疫和細胞免疫的中心,脾臟是T、B淋巴細胞定居的主要場所,因此脾臟指數可以反映機體免疫力的高低。環磷酰胺是烷化劑的一種,廣泛用于癌癥治療的藥物。但它不僅對癌細胞有各種毒性,對免疫細胞、上皮細胞等快速分裂的細胞也有毒性,常被用于免疫抑制模型的建立。本研究中,給小鼠腹腔注射環磷酰胺后,小鼠體質量、脾臟指數、胸腺指數、免疫球蛋白濃度水平均明顯低于空白對照組(P<0.01),表明免疫抑制模型小鼠制備成功。并連續刺玫根多糖RDRP干預2周后,與模型對照組相比,RDRP組的小鼠的外周血白細胞、淋巴細胞、血小板數量和脾臟指數、胸腺指數均為顯著升高(P<0.05或P<0.01),說明其可促進免疫低下小鼠免疫器官的發育。在生物光學顯微鏡下觀察胸腺和脾臟病理的變化,結果表明刺玫根多糖RDRP組小鼠脾臟和胸腺的病理變化有一定的改善,說明能提高免疫器官的免疫功能。ELISA檢測發現刺玫根多糖RDRP各劑量組和香菇多糖組的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM濃度水平極顯著上升(P<0.01),說明刺玫根多糖有助于增強機體免疫功能。此外,植物多糖能夠激活T淋巴細胞、B淋巴細胞、巨噬細胞等,促進相關細胞因子,提高機體免疫功能[23]。本研究中,刺玫根多糖RDRP各劑量組和香菇多糖組均極顯著上調了免疫低下小鼠血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6的含量(P<0.01),說明刺玫根多糖可能通過上調免疫低下小鼠血清中細胞因子的含量,調節免疫功能,緩解環磷酰胺引起的免疫低下。

目前,多糖免疫調節作用機制的研究也受到關注。其中TLR下游通路NF-κB的報道最多[24]。本研究中,采用Western blot法測定各組TLR4、MyD88、TRAF-6和NF-κB p65蛋白的表達水平。結果顯示,與模型組相比,刺玫根多糖RDRP高劑量組的TLR4、MyD88、TRAF-6蛋白極顯著上升(P<0.01),刺玫根多糖RDRP各劑量組NF-κB p65蛋白有上升趨勢。這結果表明,刺玫根多糖可能激活TLR4受體,進而激活MyD88(髓樣分化因子88)與IRAK(IL-受體相關激酶)結合去激活TRAF-6(TNF受體相關因子6)和IκB激酶復合體,誘導NF-κB抑制蛋白激酶IκB磷酸化,增加TNF-α、IL-6等細胞因子的分泌,進而發揮免疫調節作用[16,25]。

綜上所述,主要由13.1 kDa重均分子量的多糖組成的刺玫根多糖能夠增加免疫器官指數和外周血白細胞、淋巴細胞、血小板數量,改善免疫器官病理變化,還能夠上調免疫相關蛋白和細胞因子表達水平,緩解CTX所導致的免疫低下,呈展現一定的免疫調節活性,并其作用機制與TLR/NF-κB通道有關。本研究結果為刺玫根多糖的開發應用提供一定價值的實驗依據。