山羊口蹄疫、小反芻獸疫疫苗不同免疫劑量同步分點注射免疫效果比較

高麗艷，楊曉燕，臺曉媛，喻永福，張俊雄，李繼明，段 綱，李本能，李學德，陳關雄

（1. 石林彝族自治縣動物疫病預防控制中心，云南石林 652200；2. 云南鑫德順畜牧有限公司，云南石林 652200；3. 云南農業大學動物醫學院，云南昆明 650201；4. 會澤縣待補鎮農業農村綜合服務中心，云南會澤 654216）

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）和小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）被我國列為一類動物疫病，被世界動物衛生組織（World Organization for Animal Health，WOAH）列為須通報動物疫病[1-2]，是危害山羊養殖業發展的主要疫病。FMD 是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，也是可快速遠距離傳播的動物疫病[3]。FMDV 有7 個血清型，包括O 型、A 型、C 型、亞洲I 型以及南非1～3 型[4]。目前，FMDV 在我國以O 型和A 型流行為主，不同血清型間無交叉免疫保護[5]。PPR 是由小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病，山羊、綿羊和其他野生小反芻動物對其均易感[6]，其中山羊對其高度易感，而幼齡山羊以及哺乳期山羊易感程度更高，發病率可達80%～90%，病死率可達50%～100%[7-9]。我國對FMD 和PPR 的綜合防控措施以撲殺和免疫為主，在《國家動物疫病強制免疫指導意見（2022—2025年）》中，二者均被列為強制免疫疫病。在基層動物防疫過程中，FMD 和PPR 免疫工作主要集中于春、秋兩季，分2 個階段進行。春、秋兩季是母羊配種及分娩的主要時期，完成兩種疫苗免疫需耗時半個月至1 個月，嚴重影響著能繁母羊的配種工作，且因免疫工作量大、免疫過程繁瑣、山羊應激大等問題，基層動物防疫員和養殖戶對兩種疫病免疫的接受程度低。

為探究一種適合基層同時開展山羊FMD 和PPR 免疫的方法和劑量，解決基層免疫工作量大、工作效率低、過程繁瑣、周期較長以及接受程度低等問題，使山羊在免疫保護期內維持較高的抗體水平，盡量降低疫苗接種對羊群生產性能的影響，本研究將FMD和PPR疫苗進行一次性同步分點注射，通過比較不同免疫劑量疫苗接種后的抗體水平，尋找FMD 和PPR 疫苗一次性分點同步注射的最佳免疫劑量，以期為基層開展免疫工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 4 月齡左右、斷奶2 周以上的山羊64 只，由云南鑫德順畜牧有限公司自繁自養，且FMDV、PPRV 抗體和核酸檢測均為陰性。

1.1.2 疫苗 FMD O 型、A 型二價滅活疫苗（OHM/02 株+AKT-Ⅲ株，批號2022049）、PPR活疫苗（Clonge9 株，批號2021034-2）和疫苗稀釋液（批號100/2022014），均為新疆天康生物制藥有限公司產品。

1.1.3 主要試劑及儀器 FMDV O 型競爭ELISA 抗體檢測試劑盒（ 批號20092301）、FMDV A 型競爭ELISA 抗體檢測試劑盒（批號20072206）、PPRV 阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒（批號20172214），均購自青島立見生物科技有限公司。酶標儀（型號ELX-800）、洗板機（型號50TS），為美國伯騰儀器有限公司產品；恒溫培養箱（型號GSP-9080MBE），購自上海博迅實業有限公司醫療設備廠；移液器，為德國Epprndorf公司產品；電動離心機（型號TDL-80-28），購自上海安亭科學儀器廠。

1.1.4 試驗場地及時間 本試驗在云南省石林縣云南鑫德順畜牧有限公司進行，試驗時間為2023年3—8 月。

1.2 免疫方案

本試驗共分4 個組，每組試驗山羊16 只。

第1 組：對照組（常規免疫組）。先在試驗山羊左側頸部肌肉注射FMD O 型、A 型二價滅活疫苗1.0 頭份（1.0 mL），2 周后于左側頸靜脈采血檢測FMDV 抗體，同時在右側頸部皮下注射用疫苗稀釋液稀釋的PPR 活疫苗1.0 頭份（1.0 mL）。

第2～4組為試驗組，即1.0、1.2、1.5頭份劑量組。于對照組山羊FMD 疫苗接種當日，在不同試驗組山羊左側頸部肌肉分別注射FMD O 型、A 型二價滅活疫苗1.0、1. 2、1.5 頭份（1.0、1.2、1.5 mL），同時在右側頸部皮下注射用疫苗稀釋液稀釋的PPR活疫苗1.0、1.2、1.5 頭份（1.0、1.2、1.5 mL）。

1.3 試驗觀察

免疫注射結束后，對各組試驗山羊觀察48 h，主要觀察體溫、精神狀態、飲食狀況和排泄情況等有無異常。

1.4 血液樣品采集

分別于各疫苗接種后14、28、42、56、70、100 和160 d，對各組山羊采血，分離血清后檢測FMDV O 型、A 型和PPRV 抗體情況。

1.5 抗體檢測

分別采用FMDV O 型、A 型競爭ELISA 抗體檢測試劑盒以及PPRV 阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒，對采集的血液樣品進行檢測。

1.6 數據分析

對檢測結果數據用SPSS19 軟件進行χ2檢驗，統計分析各組檢測結果的差異性。P＞0.05 為差異無統計學意義，P≤0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 試驗山羊健康情況及免疫應激反應

所有試驗山羊（64 只）在疫苗接種后48 h 內均未出現體溫升高、精神沉郁、厭食情況，采食和排泄均正常，未出現免疫應激反應。接種后36 d，第4 組1 只山羊死亡，其余各組山羊在試驗期間均未出現異常情況。

2.2 FMDV O 型抗體檢測

結果（表1）顯示：接種后14 d，各組山羊FMDV O 型抗體陽性率可達87.50%以上，分別為100%、87.50%、100%、93.75%；接種后28 d，各組山羊FMDV O 型抗體陽性率均達到100%，并維持至接種后56 d；接種后70 d，第2 組有1 只山羊抗體轉陰；接種后100 d，第2 組有2 只山羊抗體轉陰，第3 組有1 只山羊抗體轉陰。經統計學分析，各組山羊在接種后14、28、42、56、70、100、160 d 之間的檢測數據差異無統計學意義（χ2= 1，P＞0.05）。

表1 FMDV O 型抗體檢測結果

2.3 FMDV A 型抗體檢測

結果（表2）顯示：接種后14 d，第1 組山羊FMDV A 型抗體陽性率為87.50%，其余各組均可達到100%，并維持至接種后100 d；接種后160 d，除第2 組抗體陽性率降至93.75%外，其余3 組均仍保持在100%。經統計學分析，各組山羊在接種后14、28、42、56、70、100、160 d 之間的檢測數據差異無統計學意義（χ2= 1，P＞0.05）。

表2 FMDV A 型抗體檢測結果

2.4 PPRV 抗體檢測

結果（表3）顯示，接種后14 d，各組山羊PPRV 抗體陽性率即達到100%，且一直保持至接種后160 d。經統計學分析，各組山羊在接種后14、28、42、56、70、100、160 d 之間的檢測數據差異無統計學意義（χ2= 1，P＞0.05）。

表3 PPRV 抗體檢測結果

3 討論

FMD 和PPR 均屬于我國一類動物疫病，嚴重危害我國養殖業的發展[10]，而預防接種是有效防控二者的重要措施之一[11-12]。本研究通過將不同免疫劑量的FMD 和PPR 疫苗一次性同步分點分組接種山羊，在接種后持續48 h 觀察試驗山羊的體溫、精神狀態、采食、排泄等體征，發現各組山羊在接種兩種疫苗后均未表現出免疫應激反應，表明在試驗免疫劑量范圍內可開展山羊FMD 和PPR 疫苗一次性分點同步免疫接種工作。

本試驗將不同接種方式和不同接種劑量的兩種疫苗，分別采用常規免疫和一次性分點同步接種方式接種山羊，探究疫苗免疫后抗體陽性率變化情況，尋找FMD 和PPR 疫苗一次性分點同步注射的最佳免疫劑量。結果顯示：FMD 和PPR 疫苗在接種后14、28、42、56、70、100、160 d 各組的抗體檢測數據差異均無統計學意義（P＞0.05）。但是接種后14 d，1.0 頭份劑量組（第2 組）山羊FMDV O 型抗體陽性率僅為87.50%，1.5 頭份劑量組（第4 組）為93.75%，均低于1.2 頭份劑量組（第3 組）的100%；對照組（第1 組）山羊FMDV A型免疫抗體陽性率為87.50%，低于其他免疫劑量試驗組；接種后70 d，1.0 頭份劑量組（第2 組）有1 只山羊FMDV O 型抗體轉陰；接種后100 d，1.0 頭份劑量組（第2 組）有2 只山羊FMDV O型抗體轉陰，1.2 頭份劑量組（第3 組）有1 只山羊FMDV O 型抗體轉陰；接種后160 d，1.0 頭份劑量組（第2 組）有1 只山羊FMDV A 型抗體轉陰；其余不同劑量組山羊免疫抗體陽性率均保持在100%。分析以上數據發現，在免疫后14 d，1.5 頭份劑量組FMDV O 型抗體陽性率反而沒有1.2 頭份劑量組高，推測這可能與山羊個體差異或接種大劑量疫苗抑制了機體前期的免疫反應有關，需進一步研究分析；采用一次性分點同步注射免疫方法以不同的疫苗劑量接種山羊后，在前期1.2 頭份劑量組山羊免疫抗體陽性率較高，而后期1.5 頭份劑量組抗體陽性率維持時間較長；常規免疫方法與一次性分點同步注射免疫方法在免疫抗體產生及維持時間上無差異。此外，各組PPRV 抗體陽性率均在接種后14 d 達到100%，并持續保持至接種后160 d，表明PPR 疫苗免疫源性好、免疫效期長。

本試驗結果顯示，將FMD 和PPR 疫苗以不同劑量一次性分點同步接種山羊，雖然接種后檢測數據的差異無統計學意義，但前期FMD 疫苗1.2頭份劑量組免疫抗體陽性率高于1.0 和1.5 頭份劑量組。因此，基層在開展山羊FMD 和PPR 疫苗一次性分點同步免疫時，建議FMD疫苗使用1.2頭份，PPR 疫苗使用1.0 頭份，且于接種后14 d 開展免疫效果監測為佳。