血清纖維膠凝蛋白3、膠原三股螺旋重復蛋白1對非小細胞肺癌的診斷價值及與臨床病理特征的關系

蘇政軍 黃珊珊 陳萬進

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一[1]。肺癌分為非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小細胞肺癌(small-cell lung carcinoma,SCLC),其中,NSCLC約占所有肺癌病例的85%[2]。NSCLC早期治愈率高但大多數病人確診時已發展到中晚期肺癌。纖維膠凝蛋白3(ficolin-3,FCN3)由FCN3基因編碼,可通過與甘露糖結合凝集素相關絲氨酸蛋白酶(MASPs)相關的途徑激活補體,在機體免疫應答中發揮重要作用[3]。有研究表明,血清FCN3水平已被確定為食管癌病人的潛在預后生物標志物[4]。膠原三股螺旋重復蛋白1(collagen triple helix repeat containing-1,CTHRC1)是已知的膠原合成調節因子,可抑制Ⅰ型和Ⅲ型膠原轉錄[5-6]。有研究表明,CTHRC1高表達可正向調控腫瘤的擴散、侵襲、遷移、黏附和轉移[7-8]。本研究檢測NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1表達水平,分析NSCLC病人臨床病理特征與二者表達水平的關系。

對象與方法

一、對象

我院2021年7月～2022年8月收治的73例NSCLC病人為研究組,均經病理學或細胞學檢查確診。男45例,女28例;年齡41～75歲,平均(62.14±8.06)歲;有吸煙史病人47例;腫瘤直徑≥3 cm 39例,<3 cm 34例;病理類型:腺癌40例,鱗癌33例;依據AJCC TNM分期標準[9],Ⅰ、Ⅱ期32例,Ⅲ、Ⅳ期41例;分化程度:中、低分化54例、高分化19例;淋巴結轉移20例。納入標準:(1)未接受過放療、化療;(2)均行同一方式手術治療,臨床病理檢測資料完整;(3)自愿簽署知情同意書者。排除標準:合并高血壓、糖尿病、肺結核及肝腎功能嚴重障礙;合并感染性及免疫系統疾病;合并其他部位原發惡性腫瘤。選取同期本院健康體檢者55例為對照組,男34例,女21例,年齡40～76歲,平均年齡(62.96±7.53)歲,有吸煙史33例。兩組年齡、性別、有無吸煙史等比較,差異無統計學意義(P>0.05)。本研究獲得本院倫理委員會批準。

二、方法

1.樣本收集:收集病人入院后次日清晨空腹靜脈血4～5 ml,對照組靜脈血于體檢當日采集。室溫靜置30分鐘,使用高速離心機CR22N4 ℃、5 000 r/min離心8分鐘,留取上清液,分裝于無菌EP管中,于-20 ℃冰箱中保存,待檢。

2.血清FCN3、CTHRC1水平檢測:采用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)法,采用酶標儀測定不同濃度標準品在450 nm處的吸光度值,繪制FCN3、CTHRC1的標準品回歸曲線。于-20 ℃冰箱中取適量血清樣本,解凍,測定各樣本在450 nm處的吸光度值,依據標準回歸曲線計算血清FCN3、CTHRC1水平。

三、統計學方法

結果

1.兩組血清FCN3、CTHRC1水平比較見表1。結果表明,與對照組相比,研究組血清FCN3、CTHRC1水平顯著升高,差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 兩組血清FCN3、CTHRC1水平比較

2.血清FCN3、CTHRC1水平與NSCLC病人臨床病理特征的關系見表2。結果表明,血清FCN3、CTHRC1水平與NSCLC病人性別、年齡、有無吸煙史、腫瘤直徑、病理類型無關(P>0.05);與癌細胞分化程度、TNM分期、淋巴結轉移有關(P<0.05)。

表2 不同臨床病理特征NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1水平比較

3.NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1水平的相關性分析見圖1。Pearson法分析顯示,NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1水平呈正相關關系(r=0.258,P=0.028)。

圖1 NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1水平的相關性

4.NSCLC發生的Logistic回歸分析:以是否發生NSCLC為因變量(是=1,否=0),以研究組與對照組之間有差異的血清FCN3、CTHRC1為自變量(自變量之間無共線性,方差膨脹因子<10),行Logistic回歸分析。結果顯示,血清FCN3、CTHRC1表達是NSCLC發生的影響因素(P<0.05)。見表3。

表3 Logistic回歸分析NSCLC發生的影響因素

5.血清FCN3、CTHRC1水平對NSCLC發生的診斷價值:血清FCN3水平診斷NSCLC發生的ROC曲線下面積為0.869,血清CTHRC1水平診斷NSCLC發生的ROC曲線下面積為0.810,二者聯合診斷NSCLC發生的ROC曲線下面積為0.881,優于血清FCN3、CTHRC1各自單獨診斷(Z二者聯合-FCN3=2.065、Z二者聯合-CTHRC1=2.429,P=0.011、0.001)。見表4和圖2。

圖2 血清FCN3、CTHRC1水平診斷NSCLC發生的ROC曲線

表4 血清FCN3、CTHRC1水平對NSCLC發生的診斷價值

討論

肺癌是世界上發病率和死亡率最高的惡性腫瘤,是男性癌癥死亡率最高的腫瘤,女性癌癥死亡率第二高的腫瘤,NSCLC是最常見的肺癌類型[10]。NSCLC早期無特殊臨床癥狀,易錯過最佳治療時機[11]。因此,及時診斷NSCLC發生,對NSCLC病人的臨床治療具有非常重要的價值。

FCN3是一種由FCN3基因編碼的寡聚結構凝集素,在凝集素補體途徑中起關鍵作用,主要表達于人體組織中的肺和肝臟[3]。Jang等[12]研究表明,FCN3可通過誘導內質網應激發揮對肺腺癌的抑制作用。本研究中,研究組血清FCN3水平顯著高于對照組。NSCLC病人血清FCN3水平與癌細胞分化程度、TNM分期、淋巴轉移有關,當有淋巴轉移、癌細胞分化程度低和TNM分期在Ⅲ、Ⅳ時,NSCLC病人血清CTHRC1水平更高。Logistic回歸分析顯示,血清FCN3是NSCLC發生的獨立影響因素,FCN3表達水平升高預示著NSCLC的發生、發展。ROC曲線顯示,血清FCN3水平診斷NSCLC發生的AUC為0.869,這說明檢測血清FCN3水平對診斷NSCLC發生有一定參考價值,臨床可根據病人血清FCN3水平制定診療方案,防止病人病情惡化。

CTHRC1是一種分泌性糖基化蛋白,可以通過調節TGF-β和Wnt信號通路來調節膠原蛋白的合成,在多種實體腫瘤中廣泛上調[13]。He等[14]研究表明,CTHRC1是一種癌癥侵襲驅動基因,通過激活NF-κB/MMP9等信號傳導促進NSCLC進展,以CTHRC1為治療靶點可能用于增強抗癌藥物對NSCLC的治療效果,此外,其研究亦稱CTHRC1是用于評估NSCLC不良臨床病理特征的有效生物標志物。本研究中,研究組血清CTHRC1水平高于對照組,與文獻報道一致[15]。血清CTHRC1水平與癌細胞分化程度、TNM分期、淋巴轉移有關,而且有淋巴結轉移、癌細胞分化程度低和TNM分期在Ⅲ、Ⅳ時,NSCLC病人血清CTHRC1水平升高,說明CTHRC1促進了腫瘤的侵襲和轉移,與文獻報道一致[7,14]。血清CTHRC1是影響NSCLC發生的因素,提示CTHRC1表達水平持續升高,增加了NSCLC病人病情惡化的風險。ROC曲線顯示,血清CTHRC1水平診斷NSCLC發生的ROC曲線下面積為0.810,提示血清CTHRC1水平對NSCLC診斷有臨床參考價值。Pearson法分析顯示,NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1水平呈正相關關系,提示二者在NSCLC發生的分子機制中可能有一定的協同作用。二者聯合診斷NSCLC發生的ROC曲線下面積為0.881,優于血清FCN3、CTHRC1各自單獨評估,提示FCN3、CTHRC1聯合可更有效地診斷NSCLC的發生。

綜上所述,NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1水平均升高,且與癌細胞分化程度、TNM分期、淋巴結轉移有關,二者聯合對NSCLC早期診斷更具價值。但FCN3、CTHRC1在NSCLC具體的作用機制尚未明確,需進一步探究。