缺血性疾病患者血清lncRNA PVT1 和FOXM1表達水平及聯合心臟磁共振延遲強化成像與預后的關系＊

尹曉翔 趙 森,* 郭 穎 劉夢雯 莊 琰

1.河南大學第一附屬醫院醫學影像科 (河南 開封 475000)

2.河南大學第一附屬醫院醫政科 (河南 開封 475000)

缺血性心臟病通常被認為是全世界死亡和殘疾的主要原因[1]，可能由動脈粥樣硬化性疾病、心源性腦栓塞、小血管或穿透性動脈疾病、高凝性疾病、梗死誘發[2]。缺血性心臟病患者易發生不良心臟結局，導致預后效果較差，因此早期對預后不良患者進行預測，及時治療和干預，能夠降低其死亡率[3]。心臟釓對比劑延遲增強磁共振成像(LGEMRI)對心臟結構和功能進行高分辨率評估，且對心臟幾何形狀橫斷面評估，是一種無創的檢測方法[4]。長鏈非編碼RNA漿細胞瘤轉化遷移基因1(lncRNA PVT1)屬于一類長非編碼RNA(lncRNA)，在骨骼肌等其他細胞類型中，PVT1定位于細胞核和細胞質部分，而在心肌細胞中，PVT1主要在細胞質中表達[5]。血清lncRNA PVT1水平在冠狀動脈疾病中明顯上調，可區分輕度和重度患者[6]。lncRNA PVT1表達在缺血再灌注(I / R)誘導的心肌組織以及缺氧/復氧(H/R)誘導的H9C2細胞中顯示出明顯的上調[7]。叉頭框轉錄因子M1(FOXM1)在小鼠腎小管上皮損傷期間上調[8]。前人對于lncRNA PVT1和FOXM1在缺血性疾病中的研究甚少，因此，本研究通過檢測缺血性疾病患者血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平變化，旨在探究二者聯合LGE-MRI對缺血性疾病患者預后的預測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2021年2月至2022年2月我院收治的缺血性心臟病患者118例即為研究組，隨訪一年根據隨訪過程中是否發生主要心臟不良事件(MACE)，分為MACE組32例，無MACE組86例。其中MACE組男性18例，女性14例，年齡在55-71歲，平均年齡為(63.31±6.82)歲，身體質量指數(ΒMI)為(22.41±2.34)kg/m2，根據美國紐約心臟病學會(NYHA)心功能等級分類分為Ⅰ-Ⅱ級17例，Ⅲ-Ⅳ級15例。無MACE組男性45例，女性41例，年齡在55-71歲，平均年齡為(63.20±6.79)歲，ΒMI為(22.38±2.31)kg/m2，NYHA心功能等級分類分為Ⅰ-Ⅱ級40例，Ⅲ-Ⅳ級46例。同期選擇在我院體檢健康的志愿者118例為對照組，男性60例，女性58，年齡在53-70歲，平均年齡為(63.21±6.79)歲，ΒMI為(22.37±2.28)kg/m2。

納入標準：符合《磁共振延遲掃描缺血性心臟病的診斷價值》的診斷標準[9]；均為缺血性心臟病患者。排除標準：患有先天性心臟病的患者；患有心肌梗死以及進行支架置入的患者；患有肝臟、腎臟功能異常的患者；認知功能障礙，無法進行正常交流的患者；患有惡性腫瘤的患者。本研究已獲得本院倫理委員會的審核批準，所有研究均獲得研究人員的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 收集資料 收集研究組患者入院時以及對照組體檢當天舒張壓(DΒP)、收縮壓(SΒP)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、血糖(GLU)水平，詢問吸煙史、飲酒史并記錄。

1.2.2 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測血清lncRNA PVT1的相對表達量 抽取患者入院時和體檢健康者體檢當天清晨空腹靜脈血10mL，以4000rpm速度離心20min，取其上清液置于-80℃冰箱內待用，取所有血清樣本，加入1mL Trizol試劑（購自于Invitrogen 貨號：15596026）提取總RNA，采用超微量分光光度法檢驗RNA的純度，A260/A280的值在1.8-2.0之間，采用反轉錄試劑盒(貨號：R3564，北京康瑞納生物科技有限公司)進行反轉錄后為cDNA，cDNA的濃度稀釋10倍，使用2×SYΒR Green qPCR Master Mix (貨號：A0001-R2，北京百奧創新科技有限公司)進行qRT-PCR。引物序列詳見表1。反應體系共16μL：2×SYΒR Green qPCR Master Mix 8μL，cDNA 1μL，上下引物各0.5μL，ddH2O 6μL。反應條件為：95℃，3min；95℃，20s；58℃，35s；以GAPDH作為內參，采用2-??CT法分析lncRNA PVT1的表達水平。lncRNA lncRNA PVT1和GAPDH引物序列由上?；蚧瘜W有限公司合成。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.3 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測FOXM1水平 采用ELISA法檢測所有血清樣本中FOXM1水平，選用試劑盒貨號為SP19286(購自于武漢塞培生物科技有限公司)，試驗嚴格根據試劑盒說明書進行。

1.2.4 心臟磁共振檢查 所有呈患者仰臥位，使用磁共振檢查儀，心臟4通道專用門控線圈，進行常規的心臟影像掃描，在前臂靜脈處注射造影劑行左心室灌注成像，再次注射相同劑量的造影劑延遲10min使用LGE-MRI。根據美國心臟協會(AHA)17節段劃分法[10]區分陽性(54例)和陰性(64例)。

1.2.5 隨訪 對所有患者進行出院后1年的隨訪，每三個月進行一次，隨訪截止于2023年2月或發生MACE(心源性猝死、心率失?；蛐牧λソ?。

1.2.6 統計學方法 使用SPSS 25.0軟件對本研究數據進行處理。將符合正態分布的計量數據用均值±標準差(±s)表示，采用獨立樣本t檢驗分析兩組之間的差異；計數資料用例表示，組間比較采用卡方檢驗。受試者工作特征(ROC)曲線分析LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1對缺血性心臟病患者預后發生MACE的預測價值。P<0.05認為具有統計學意義。

2 結 果

2.1 一般資料比較研究組患者DΒP、SΒP、TG、TC、LDL-C、GLU水平與對照組相比顯著升高，HDL-C水平顯著降低(P<0.05)。兩組之間性別、年齡、ΒMI、吸煙史、飲酒史比較差異不具有顯著性(P>0.05)，見表2所示。

表2 一般資料比較

2.2 兩組血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平比較與對照組相比，研究組的血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平顯著升高(P<0.05)。見表3所示。

表3 兩組血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平比較

2.3 MACE組和無MACE組一般資料比較與無MACE組相比，MACE組患者DΒP、SΒP、TC、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低(P<0.05)。兩組之間性別、年齡、ΒMI、NYHA心功能等級、吸煙史、飲酒史、TG、GLU比較差異不具有顯著性(P>0.05)。見表4所示。

表4 MACE組和無MACE組一般資料比較

2.4 MACE組和無MACE組血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平比較與無MACE組相比，MACE組患者血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平顯著升高(P<0.05)。見表5。

表5 MACE組和無MACE組血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平比較

2.5 兩組LGE-MRI狀態比較MACE組的LGE-MRI陽性數量顯著高于無MACE組(P<0.05)。見表6所示。

表6 兩組LGE-MRI狀態比較

2.6 LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1對缺血性心臟病患者預后發生MACE的預測價值ROC曲線結果顯示，血清lncRNA PVT1預測缺血性心臟病患者預后發生MACE的ROC曲線下面積(AUC)為0.871(0.801-0.941)，敏感度為70.80%，特異性為81.80%，截斷值為6.397，血清FOXM1預測MACE發生的AUC為0.778(0.681-0.874)，敏感度為71.90%，特異性為79.10%，截斷值為11.631ng/mL，LGE-MRI預測MACE發生的AUC為0.701(0.595-0.806)，敏感度為50.90%，特異性為80.00%。三者聯合預測MACE發生的AUC為0.896(0.836-0.956)，敏感度為90.60%，特異性為76.70%，與LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1單獨預測相比，三者聯合預測MACE發生的AUC更高(Z=7.221，P<0.001；Z=7.737，P<0.001；Z=7.091，P<0.001)。見圖1所示。

圖1 LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1對缺血性心臟病患者預后發生MACE的 預測價值

3 討 論

缺血性心臟病患者其預后效果差，能夠造成惡性心衰、心律失常等引發患者死亡，嚴重威脅患者的生命健康[11]。LGEMRI是一種無創影像工具用于評價心肌纖維化程度，有較高的重復性和敏感性，LGE-MRI狀態是左心室射血分數惡化的獨立預測指標[12]。然而單純依靠LGE-MRI對缺血性心臟病患者預后評估價值較低。為彌補其不足，本研究旨在探究LGE-MRI聯合血清學指標對缺血性心臟病患者預后發生MACE的預測價值。

lncRNA在腦卒中、惡性腫瘤、慢性肺病和心血管疾病等多種疾病的生理過程中起著重要的調節作用[13]。lncRNA PVT1的敲低抑制血管平滑肌細胞的凋亡，且可緩解心肌纖維化和心房顫動[14]。lncRNA PVT1在急性缺血性腦卒中患者血清中明顯升高，是一種潛在的診斷生物標志物[15]。lncRNA PVT1敲低可能對缺氧復氧誘導的神經損傷具有改善作用[16]。本次研究中，與對照組相比，研究組的血清中lncRNA PVT1水平顯著升高，表明lncRNA PVT1水平與缺血性心臟病的發生有關，推測其在疾病中起促炎及細胞凋亡的作用。與無MACE組相比，MACE組患者血清中lncRNA PVT1水平顯著升高，提示lncRNA PVT1水平與預后狀況有關，有成為評估缺血性心臟病預后的生物學標志物。

FOXM1在機體發育過程中起到重要作用[6]，參與染色體分離、細胞分裂以及DNA斷裂修復[17]。已發現FOXM1在器官損傷后被激活，例如肺、肝臟和胰腺[18]。在腦梗死患者腦組織中，FOXM1表達上調[19]。本次研究表明，與對照組相比，研究組的血清中FOXM1水平顯著升高，提示在缺血性心臟病患者血清中FOXM1被激活，與疾病的發生有關。與無MACE組相比，MACE組患者血清中FOXM1水平顯著升高，提示，FOXM1水平與缺血性心臟病預后有關。

MACE組的LGE-MRI陽性數量顯著高于無MACE組，表明LGE-MRI可識別心功能變化。與LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1單獨預測相比，三者聯合預測MACE發生的AUC更高，提示三者聯合預測MACE發生的價值較高，能夠彌補單一指標的不足，可有效提早篩查MACE的發生。

綜上所述，MACE患者血清lncRNA PVT1和FOXM1水平均顯著升高，LGE-MRI、lncRNA PVT1和FOXM1聯合對缺血性心臟病患者預后有一定的預測價值。但本次研究的數量較少，后期研究中會擴大樣本量進一步評估。