青錢柳葉化學成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

楊 勇，郭婷思，謝 敏，譚李宏，李文楚，鄭 豪，黃費炳，楊玉佩，王 煒，翦雨青

（湖南中醫藥大學中醫藥民族醫藥國際聯合實驗室，湖南 長沙 410208）

青錢柳Cyclocaryapaliurus（Batal.） Iljinskaja 是胡桃科落葉喬木，是我國特有的珍稀植物之一，又名青錢李、搖錢樹、甜茶樹等，主要分布于我國長江中下游地區，湖南、湖北、江西、貴州等省份為主要產地，其樹葉、樹皮、樹根均可入藥，具有清熱、消腫、解毒、止痛等作用［1-2］。民間常采其嫩葉制茶，其味微甜，且有養陰益肝、健脾化濁等功效。目前市面上以青錢柳葉為原料的保健品很多，主要以降血脂、降血糖為主。目前，從青錢柳葉中已發現二百多種成分，按結構類型主要分為三萜類、黃酮類、萘酮類、酚酸類、紫羅蘭酮類等［3-4］。其中，達瑪烷型三萜和黃酮醇類衍生物是青錢柳葉中的主要活性成分，具有降血糖、降血脂、抗炎、抗腫瘤等多種活性［5-9］。本實驗主要對青錢柳葉乙醇提取物的正丁醇萃取部位進行研究，從中分離得到15 個化合物并檢測其α-葡萄糖苷酶抑制活性，其中化合物1 為新四氫萘醇苷類天然產物，化合物4～5、8 ～10、14 為首次從青錢柳葉中分離得到?；衔? ～5 為較少見的黃酮木脂素類化合物，對α-葡萄糖苷酶具有潛在的抑制活性。

1 材料

1.1 儀器 核磁共振波譜儀（BRUKER-600，德國布魯克公司）； 超高液相色譜儀串聯軌道離子阱質譜儀（Orbitrap Exploris 120）、紅外光譜儀（美國Thermo Fisher Scientific 公司）； Agilent 1290/6740A 超高效液相色譜儀串聯三重四級桿質譜、800TS-SN 酶標儀（美國Agilent 公司）； UV-1900i紫外光譜儀（日本島津公司）； J-1500 圓二色光譜儀（日本分光株式會社）； AUTOPOL Ⅲ旋光儀（美國魯道夫公司）； P1050 制備液相色譜儀（北京清博華科技有限公司）； N-1300 旋轉蒸發儀（日本EYELA 公司）； 分析天平（上海菁海儀器有限公司）。XB-C18半制備色譜柱［10 mm× 250 mm，5 μm； 飛世爾沃頓（南京） 科技有限公司］； C18反相鍵合材料（Spherical C18Monomeric，120A）、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20 （香港GE Healthcare Bio-Sciences 公司）。

1.2 試劑 氘代試劑（美國CIL 公司）； 對硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷、阿卡波糖片、α-葡萄糖苷酶 （貨號 S10137-1 g、B20003-20 mg、S10050 100U，上海源葉生物科技有限公司）； PBS 緩沖液（pH 7.2～7.4，武漢普諾賽生命科技公司）； 二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、碳酸鈉（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）； 甲醇、乙腈（色譜純，上海西格瑪奧德里奇貿易有限公司）。

1.3 藥材 青錢柳藥材于2015 年6 月采自湖南省懷化市通道縣，經湖南中醫藥大學中醫藥民族醫藥國際聯合實驗室王煒教授鑒定為正品。藥材憑證標本（編號20150629） 現存放于湖南中醫藥大學中醫藥民族醫藥國際聯合實驗室。

2 提取與分離

取青錢柳干燥葉20 kg，粉碎，95%乙醇滲漉提取，減壓濃縮，得到總浸膏約5.0 kg。將總浸膏用水分散，依次用石油醚、氯仿及水飽和正丁醇多次萃取，合并萃取液，減壓濃縮，分別得到石油醚層（530 g）、氯仿層（2 570 g）、正丁醇層（620 g） 和水層（560 g）。

稱取青錢柳氯仿浸膏980 g，經硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶0 ～0 ∶1） 梯度洗脫，得到Fr.1～Fr.21。Fr.16 經硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇（1 ∶0 ∶0 ～0 ∶1 ∶0 ～0 ∶0 ∶1） 梯度洗脫，得到Fr.16-1 ～Fr.16-16。Fr.16-4 （3.1 g） 經Sephadex LH-20 和半制備HPLC 分離（流動相45%甲醇-水，體積流量3.0 mL/min，檢測波長210、245 nm），得到化合物1 （tR＝11.2 min，12.6 mg）。Fr.16-6 （6.36 g） 經Sephadex LH-20、硅膠和半制備HPLC （流動相25% 甲醇-水，體積流量3.0 mL/min，檢測波長210、245 nm） 純化，得到化合物3 （tR＝21.5 min，6.3 mg）。

稱取青錢柳正丁醇層浸膏600 g，用水分散。再稱7.5 kg 大孔樹脂（AB-8） 裝柱，以水-甲醇（1 ∶0、7 ∶3、5 ∶5、3 ∶7、1 ∶9） 梯度洗脫，得到Fr.A～Fr.E。

Fr.D 經硅膠柱分離，以二氯甲烷-無水甲醇（1 ∶0 ～0 ∶ 1） 梯度洗脫，得Fr.D1 ～Fr.D13。Fr.D5 經Sephadex LH-20 分離，以甲醇洗脫，得到Fr.D5-1～Fr.D5-4。Fr.D5-2 經半制備HPLC （流動相45%乙腈-水，體積流量3.0 mL/min，檢測波長210、245 nm） 分離，得到化合物8 （tR＝7.9 min，2.5 mg）、10 （tR＝13.3 min，7.8 mg）。Fr.D6 經Sephadex LH-20 分離，以甲醇洗脫，得到Fr.D6-1～Fr.D6-6。Fr.D6-2 經C18反相柱分離，再經半制備HPLC （流動相50%乙腈-水，體積流量3.0 mL/min，檢測波長210、245 nm） 分離，得到化合物6 （tR＝26.3 min，4.1 mg）。Fr.D12 經聚酰胺（80～100 目）、C18反相柱、Sephadex LH-20 和半制備HPLC （流動相55% 甲醇-水，體積流量3.0 mL/min，檢測波長210、245 nm） 分離，得到化合物4 （tR＝16.2 min，4.0 mg）、5 （tR＝18.8 min，22.9 mg）。

Fr.C 經硅膠柱分離，以二氯甲烷-無水甲醇（1 ∶0～0 ∶1） 梯度洗脫，用5%香草醛-濃硫酸作為顯色劑用于TLC 檢識，得Fr.C1 ～Fr.C15。Fr.C2 經Sephadex LH-20 分離，以甲醇洗脫，得到Fr.C2-1～Fr.C2-6。Fr.C2-6 經半制備HPLC （流動相35%乙腈-水，體積流量3.0 mL/min，檢測波長210、245 nm） 分離，得到化合物15 （tR＝6.1 min，7.8 mg）。Fr.C9 經Sephadex LH-20 分離，以甲醇洗脫，得到Fr.C9-1 ～Fr.C9-6。Fr.C9-4 經半制備HPLC （流動相25% 乙腈-水，體積流量3.0 mL/min，檢測波長210、245 nm） 分離，得到化合物7 （tR＝16.6 min，5.5 mg）。Fr.C10 經Sephadex LH-20 分離，以甲醇洗脫，得到Fr.C10-1～Fr.C10-6； Fr.C10-1 經半制備HPLC （流動相30% 乙腈-水，體積流量3.0 mL/min） 分離，得到化合物9（tR＝12.8 min，15.6 mg）、2 （tR＝14.6 min，7.9 mg）。Fr.C12 經Sephadex LH-20 分離，以甲醇洗脫，得到Fr.C12-1～Fr.C12-6。Fr.C12-3 經過硅膠柱和半制備HPLC （流動相25% 乙腈-水，體積流量3.0 mL/min，檢測波長210、245 nm） 分離，得到化合物12 （tR＝8.5 min，16.2 mg）、13 （tR＝8.9 min，4.1 mg）、11 （tR＝10.1 min，3.5 mg）、14 （tR＝11.5 min，17.2 mg）。

3 酸水解、衍生和HPLC 分析

參照文獻［10］ 報道方法，對化合物1 進行酸水解、衍生和HPLC 分析。HPLC 分析結果顯示，化合物1 中的葡萄糖與D-葡萄糖標準品衍生物的保留時間一致，可以確定化合物1 中葡萄糖為D-構型。

4 結構鑒定

圖1 化合物1 的結構式Fig.1 Structural of compound 1

在1H-NMR 譜中，顯示了22 個質子信號，其中δH： 7.48 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-2″，6″） 和6.81 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-3″，5″） 表明AA′XX′系統存在；δH： 7.73 （1H，d，J＝16.0 Hz，H-7″） 和6.41 （1H，d，J＝16.0 Hz，H-8″） 表明存在一對反式雙鍵；δH： 4.62 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），表明化合物1 是糖苷類化合物。在13C-NMR譜中，有25 個碳信號，結合DEPT 135°譜，顯示化合物1 有2 個亞甲基、18 個次甲基和5個季碳。在1H-1H COSY 譜（圖2） 中，存在2 個自旋耦合體系H-1/H2-2/H-3/H-4 和H-5/H-6/H-7/H-8，結合HMBC 譜（圖2） 的H-1 到C-8/C-9/C-10 和H-4 到C-5/C-9/C-10 的關鍵信號，可以推斷出化合物1 是四氫萘烷母核（圖1）。通過對化合物1 進行酸水解、衍生和HPLC 分析，結合糖的端基質子H-1′耦合常數J＝7.9 Hz，可以確定存在β-D-葡萄糖。剩下的9 個碳 ［δC： 169.0 （C-9″），161.3 （ C-4″），147.1 （ C-7″），131.3 （ C-2″，6″），127.2 （C-1″），114.8 （C-8″），116.8 （C-3″，5″） ］，通過HMBC 譜H-7″到C-1″/C-2″，6″/C-9″和H-3″到C-4″，結合1H-1H COSY 譜中H-7″/H-8″和H-2″，6″/H-3″，5″2 個自旋耦合系統，可以確定為反式對香豆?；鶊F。通過HMBC 譜H-1′到C-4 和H-6′到C-9″的2 個關鍵信號，可以推斷上述3 個片段的連接方式。因此化合物1 的平面結構為1，3，4-三羥基四氫萘醇- ［6′- （E） -對羥基香豆?；?-4-β-D-吡喃葡萄糖苷。ROESY 譜中，3 個關鍵相關的信號H-3/H-2a、H-1/H-2b 和H-4/H-2b，可以證明H-1 和H-4 為同側，H-1 與H-3 為異側。如果把H-1 定為α 朝向，那么H-3 為β，H-4為α，化合物1 的構型為1S，3S，4S。如果把H-1定為β 朝向，則化合物1 的構型為1R，3R，4R（圖3）。最終，通過化合物1 的實驗ECD 曲線圖譜與計算ECD 曲線圖譜對比分析（圖4），可以確定其絕對構型為1R，3R，4R。因此，化合物1 的為（1R，3R，4R） -1，3，4-三羥基四氫萘醇-［6′- （E） -對羥基香豆?；?-4-β-D-吡喃葡萄糖苷，命名為cyclopaloside C，并對其核磁數據進行歸屬（表1）。

表1 化合物1 的1H-NMR、13C-NMR 數據Tab.1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1

圖2 化合物1 的關鍵HMBC 與1H-1H COSY 相關性Fig.2 Key HMBC and 1H-1H COSY correlations of compound 1

圖3 化合物1 的NOE 關鍵相關信號Fig.3 Key NOE correlations of compound 1

化合物2： 淡黃色無定形粉末，分子式C25H26O11，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為灰色，ESI-MSm/z：525.5 ［M＋Na］＋。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：7.61 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-7″），7.47 （2H，d，J＝8.5 Hz，H-2″，6″），7.45 （1H，d，J＝9.2 Hz，H-6），6.84 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-3″，5″），6.81 （1H，d，J＝9.2 Hz，H-7），6.34（1H，d，J＝15.9 Hz，H-8″），5.37 （1H，t，J＝3.2 Hz，H-4），4.84 （1H，d，J＝7.7 Hz，H-1′），4.53 （1H，dd，J＝11.9，2.2 Hz，H-6a′），4.39（1H，dd，J＝11.9，6.6 Hz，H-6b′），3.66 （1H，m，H-2′），3.65 （1H，m，H-5′），3.50 （1H，m，H-3′），3.44 （1H，m，H-4′），3.04 （1H，ddd，J＝17.5，12.6，6.2 Hz，H-2a），2.52 （1H，m，H-2b），2.22 （2H，m，H-3）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ： 206.4 （C-1），33.5 （C-2），30.3 （C-3），61.3 （C-4），148.4 （C-5），128.8（C-6），119.0 （C-7），159.3 （C-8），116.2 （C-9），135.3 （C-10），104.4 （C-1′），75.2 （C-2′），77.8 （C-3′），71.7 （C-4′），75.7 （C-5′），64.4 （C-6′），127.0 （C-1″），131.2 （C-2″，C-6″），116.9 （C-3″，5″），161.4 （ C-4″），146.8（C-7″），114.9 （C-8″），168.9 （C-9″）。以上數據與文 獻 ［11 ］ 基 本 一 致，故 鑒 定 為cyclopaloside A。

化合物3： 淡黃色無定形粉末，分子式C16H20O9，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為灰色，ESI-MSm/z：379.35 ［M ＋Na］＋。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ： 7.53 （1H，d，J＝9.1 Hz，H-6），6.88 （1H，d，J＝9.1 Hz，H-7），5.36 （1H，t，J＝3.3 Hz，H-4），4.79 （1H，d，J＝7.7 Hz，H-1′），3.90（1H，dd，J＝12.1，1.8 Hz，H-6a′），3.71 （1H，dd，J＝12.1，4.9 Hz，H-6b′），3.52 （1H，dd，J＝9.2，7.7 Hz，H-2′），3.45 （1H，t，J＝8.6 Hz，H-3′），3.39 （1H，m，H-4′），3.38 （1H，m，H-5′），3.06 （1H，ddd，J＝17.5，13.4，5.5 Hz，H-2a），2.54 （1H，td，J＝17.5，3.6 Hz，H-2b），2.25 （1H，m，H-3a），2.20 （1H，m，H-3b）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ： 206.5 （C-1），33.6 （C-2），30.3 （C-3），61.3 （C-4），148.9 （ C-5），128.5 （ C-6），119.0 （ C-7），159.1 （ C-8），116.2 （ C-9），134.7 （ C-10），104.5 （C-1′），75.4 （C-2′），77.9 （C-3′），71.3（C-4′），78.4 （C-5′），62.5 （C-6′）。以上數據與文獻［12］ 基本一致，故鑒定為juglanosides E。

化合物4： 黃色粉末，分子式C24H16O9，在365 nm 的紫外燈下呈藍色熒光，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為灰褐色；； HR-ESI-MSm/z： 447.072 1 ［M-H］-（計算值為447.072 2，C24H15O9-）。1H-NMR （600 MHz，DMSO-d6）δ： 7.33 （1H，s，H-6″），6.79 （1H，s，H-3″），6.72 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），6.71 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5′），6.63 （1H，s，H-8），6.61 （1H，dd，J＝8.2，2.1 Hz，H-6′），6.07 （1H，s，H-8″），4.90 （1H，d，J＝6.3 Hz，H-2），4.08 （1H，m，H-3），2.86 （1H，dd，J＝16.3，4.8 Hz，H-4a），2.74 （1H，dd，J＝16.3，6.9 Hz，H-4b）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 81.7 （ C-2），64.8 （ C-3），25.8 （ C-4），147.8 （C-5），99.6 （C-6），152.4 （C-7），97.5（C-8），157.7 （C-9），103.2 （C-10），129.4 （C-1′），114.0 （C-2′），145.2 （C-3′），145.1 （C-4′），115.4 （C-5′），118.0 （C-6′），106.1 （C-1″），152.6 （C-2″），103.4 （C-3″），146.6 （C-4″），143.9 （C-5″），109.0 （C-6″），141.5 （C-7″），92.3 （C-8″），161.2 （C-9″）。上述數據與文獻［13-14］ 報道一致，進一步通過旋光分析，并比較化合物4 的實驗ECD 與計算ECD 圖譜（圖4），確定其絕對構型為 （2R，3S），故鑒定為vaccinin A。

化合物5： 黃色粉末，分子式C24H16O9，在365 nm 的紫外燈下呈藍色熒光，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色反應為灰褐色；； HR-ESI-MSm/z： 447.072 5 ［M-H］-（計算值為447.072 2，C24H15O9-）。1H-NMR （600 MHz，DMSO-d6）δ： 7.34 （1H，s，H-6″），6.75（1H，s，H-3″），6.72 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），6.71 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5′），6.67（1H，s，H-8），6.61 （1H，dd，J＝8.2，2.1 Hz，H-6′），6.10 （1H，s，H-8″），4.89 （1H，d，J＝6.3 Hz，H-2），4.07 （1H，m，H-3），2.80 （1H，dd，J＝16.3，4.8 Hz，H-4a），2.69 （1H，dd，J＝16.3，6.9 Hz，H-4b）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 81.7 （C-2），64.8 （C-3），25.8（C-4），151.7 （C-5），99.6 （C-6），148.7 （C-7），97.2 （C-8），157.8 （C-9），103.2 （C-10），129.4 （ C-1′），114.1 （ C-2′），145.2 （ C-3′），145.1 （ C-4′），115.4 （ C-5′），118.0 （ C-6′），106.0 （ C-1″），152.6 （ C-2″），103.4 （ C-3″），146.6 （ C-4″），143.8 （ C-5″），109.0 （ C-6″）141.6 （C-7″），91.9 （C-8″），161.2 （C-9″）。結合1D 和2D NMR 譜歸屬了化合物的碳、氫信號，發現化合物5 和4 結構上極其相似，差別主要在于C-5 和C-7 的化學位移不同。在化合物4 的HMBC譜中，H-4 （δH2.74，2.86） 與C-5 （δC147.8）有相關信號，H-8 （δH6.63） 和C-7 （δC152.4）也存在相關信號。而在化合物5 的HMBC 譜中，H-4 （δH2.69，2.80） 與C-5 （δC151.7） 有相關信號，H-8 （δH6.67） 和C-7 （δC148.7） 也存在相關信號。通過HMBC 譜的這2 個關鍵的信號，以上數據與文獻報道［14-16］ 基本一致，推斷化合物5 的結構可能為emururin A （2R，3S） 或entmururin A （2S，3R）。最終，通過計算ECD （圖4） 的方法確定化合物5 的絕對構型為2S，3R，與ent-mururin A 一致。

化合物6： 黃色無定形粉末，分子式C21H20O10，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 431.0［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ： 7.77 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-2′，6′），6.93（2H，d，J＝8.7 Hz，H-3′，5′），6.36 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.18 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.37 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-1″），4.22（1H，dd，J＝3.3，1.7 Hz，H-2″），3.71 （1H，dd，J＝9.1，3.3 Hz，H-3″），3.33 （1H，overlap，H-4″），3.33 （1H，m，H-5″），0.92 （1H，d，J＝5.7 Hz，H-6″）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ： 159.1 （C-2），136.1 （C-3），179.5 （C-4），161.6 （C-5），100.2 （C-6），163.2 （C-7），95.0（C-8），158.7 （C-9），105.6 （C-10），122.6 （C-1′），131.9 （ C-2′，6′），116.5 （ C-3′，5′），161.6 （ C-4′），103.5 （ C-1″），71.9 （ C-2″），72.0 （C-3″），73.2 （C-4″），72.0 （C-5″），17.7（C-6″）。以上數據與文獻［17］ 基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物7： 黃色無定形粉末，分子式C21H20O11，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 447.1 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 8.06 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，6′），6.89 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′，5′），6.40（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.20 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.27 （1H，d，J＝7.3 Hz，H-1″），3.69 （1H，dd，J＝11.9，2.3 Hz，H-6″a），3.53（1H，dd，J＝11.9，5.5 Hz，H-6″b），3.42 （1H，overlap，H-3″），3.42 （1H，overlap，H-2″），3.32（1H，overlap，H-4″），3.20 （1H，ddd，J＝9.7，5.5，2.3 Hz，H-5″）；13C-NMR （ 150 MHz，CD3OD）δ： 159.0 （C-2），135.4 （C-3），179.5（C-4），161.6 （C-5），99.9 （C-6），166.0 （C-7），94.7 （C-8），158.3 （C-9），105.8 （C-10），122.8 （C-1′），132.3 （C-2′，6′），116.0 （C-3′，5′），161.6 （ C-4′），104.0 （ C-1″），75.7 （ C-2″），78.4 （C-3″），71.3 （C-4″），78.0 （C-5″），62.6 （C-6″）。以上數據與文獻［18］ 基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8： 黃色無定形粉末，分子式C22H20O12，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 475.0 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，DMSOd6）δ： 8.00 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，6′），6.87 （2H，d，J＝ 8.8 Hz，H-3′，5′），6.33（1H，brd，H-8），6.12 （1H，brd，H-6），5.45（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″），3.72 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-5″），3.56 （ 3H，s，H-1?），3.36（1H，overlap，H-4″），3.28 （ 1H，overlap，H-3″），3.24 （1H，overlap，H-2″）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 156.6 （C-2），132.9 （C-3），175.3 （C-4），161.1 （C-5），99.5 （C-6），163.6（C-7），94.1 （C-8），156.6 （C-9），103.2 （C-10），120.7 （C-1′），130.8 （C-2′，6′），115.1（C-3′，5′），160.1 （C-4′），101.5 （C-1″），71.5（C-4″），75.5 （C-3″），73.9 （C-2″），75.6 （C-5″），169.0 （C-6″），51.9 （C-1?）。以上數據與文獻［19］ 基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-β-D-葡萄醛酸甲酯。

化合物9： 黃色無定形粉末，分子式C23H22O12，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 489.1 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，DMSOd6）δ： 8.02 （2H，d，J＝8.9 Hz，H-2′，6′），6.87 （2H，d，J＝ 8.9 Hz，H-3′，5′），6.44（1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.22 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），5.43 （1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″），4.01 （2H，q，J＝7.1 Hz，H-1?），3.70 （1H，d，J＝9.7 Hz，H-5″），3.35 （1H，dd，J＝9.7，8.8 Hz，H-4″），3.28 （1H，dd，J＝9.0，8.8 Hz，H-3″），3.24 （1H，dd，J＝9.0，7.5 Hz，H-2″），1.08 （3H，t，J＝7.1 Hz，H-2?）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 156.7 （C-2），133.1 （C-3），177.2 （C-4），161.2 （C-5），98.9 （C-6），164.4（C-7），93.8 （C-8），156.4 （C-9），104.0 （C-10），120.6 （C-1′），131.0 （C-2′，6′），115.1（C-3′，5′），160.2 （C-4′），101.5 （C-1″），71.5（C-4″），75.5 （C-3″），73.9 （C-2″），75.7 （C-5″），168.5 （ C-6″），60.7 （ C-1?），13.9 （ C-2?）。以上數據與文獻［20］ 基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-β-D-葡萄醛酸乙酯。

化合物10： 黃色無定形粉末，分子式C25H26O12，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 517.0 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，DMSOd6）δ： 7.99 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，6′），6.86 （2H，d，J＝ 8.8 Hz，H-3′，5′），6.32（1H，brd，H-8），6.11 （1H，brd，H-6），5.44（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″），3.97 （2H，t，J＝6.4 Hz，H-1?），3.69 （1H，d，J＝9.7 Hz，H-5″），3.36 （1H，dd，J＝9.7，8.8 Hz，H-4″），3.28 （1H，dd，J＝9.0，8.8 Hz，H-3″），3.24（1H，dd，J＝9.0，7.5 Hz，H-2″），1.41 （2H，m，H-2?），1.16 （2H，m，H-3?），0.74 （3H，t，J＝7.4 Hz，H-4?）；13C-NMR （150 MHz，DMSOd6）δ： 156.6 （C-2），132.8 （C-3），176.8 （C-4），161.1 （C-5），99.5 （C-6），163.3 （C-7），94.1 （ C-8），156.1 （ C-9），103.0 （ C-10），120.6 （C-1′），130.8 （C-2′，6′），115.1 （C-3′，5′），160.2 （ C-4′），101.5 （ C-1″），71.3 （ C-4″），75.5 （C-3″），73.9 （C-2″），75.8 （C-5″），168.4 （ C-6″），64.2 （ C-1?），29.9 （ C-2?），18.4 （C-3?），13.4 （C-4?）。以上數據與文獻［21］ 基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-β-D-葡萄醛酸丁酯。

化合物11： 黃色無定形粉末，分子式C21H20O11，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 447.0 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 7.34 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），7.31 （1H，dd，J＝8.3，2.0 Hz，H-6′），6.91（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5′），6.37 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.20 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.35 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-1″），4.22 （1H，dd，J＝3.3，1.7 Hz，H-2″），3.71 （1H，dd，J＝9.5，3.3 Hz，H-3″），3.43 （ 1H，m，H-5″），3.33 （1H，overlap，H-4″），0.92 （1H，d，J＝5.6 Hz，H-6″）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：159.3 （ C-2），136.2 （ C-3），179.6 （ C-4），163.2 （C-5），99.8 （C-6），165.8 （C-7），94.7（C-8），158.5 （C-9），105.9 （C-10），122.9 （C-1′），116.9 （C-2′），146.4 （C-3′），149.8 （C-4′），116.3 （C-5′），122.9 （C-6′），103.5 （C-1″），71.9 （C-2″），72.1 （C-3″），73.2 （C-4″），72.0 （C-5″），17.7 （C-6″）。以上數據與文獻［22］ 基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物12： 黃色無定形粉末，分子式C21H20O12，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 463.0 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 7.71 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），7.58 （1H，dd，J＝8.5，2.1 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.38 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.19 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.26 （1H，d，J＝7.6 Hz，H-1″），3.72 （1H，dd，J＝12.0，2.2 Hz，H-6″a），3.58 （1H，dd，J＝12.0，5.5 Hz，H-6″b），3.49 （1H，overlap，H-3″），3.43 （1H，overlap，H-2″），3.35 （1H，overlap，H-4″），3.23 （1H，ddd，J＝9.6，5.5，2.2 Hz，H-5″）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：159.0 （ C-2），135.6 （ C-3），179.5 （ C-4），163.0 （C-5），99.8 （C-6），166.0 （C-7），94.7（C-8），158.4 （C-9），105.7 （C-10），123.0 （C-1′），117.5 （C-2′），145.9 （C-3′），149.8 （C-4′），116.0 （C-5′），123.2 （C-6′），104.2 （C-1″），75.7 （C-2″），78.4 （C-3″），71.2 （C-4″），78.1 （C-5″），62.5 （C-6″）。以上數據與文獻［23］ 基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物13： 黃色無定形粉末，分子式C21H20O12，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 463.0 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 7.85 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），7.58 （1H，dd，J＝8.5，2.1 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.38 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.19 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.17 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），3.86 （1H，d，J＝3.3 Hz，H-4″），3.83 （1H，dd，J＝9.7，7.8 Hz，H-2″），3.65 （1H，dd，J＝11.2，6.0 Hz，H-6″a），3.58 （1H，overlap，H-6″b），3.57 （1H，overlap，H-3″），3.49 （1H，m，H-5″）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ： 158.7 （C-2），135.7 （C-3），179.5 （C-4），163.0 （C-5），99.8 （C-6），166.0 （C-7），94.7 （C-8），158.4 （C-9），105.6（C-10），122.8 （C-1′），117.7 （C-2′），145.8（C-3′），149.9 （ C-4′），116.1 （ C-5′），122.9（C-6′），105.4 （C-1″），73.2 （C-2″），75.1 （C-3″），70.0 （C-4″），77.2 （C-5″），61.9 （C-6″）。以上數據與文獻［24］ 基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷。

化合物14： 黃色無定形粉末，分子式C25H26O13，5%香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙黃色，ESI-MSm/z： 534.1 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 7.62 （1H，dd，J＝8.5，2.2 Hz，H-6′） 7.60 （1H，d，J＝ 2.2 Hz，H-2′），6.84（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.40 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.21 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.29 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），4.06 （2H，t，J＝6.5 Hz，H-1?），3.74 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-5″），3.59 （1H，dd，J＝9.6，8.8 Hz，H-4″），3.53 （1H，dd，J＝9.0，7.8 Hz，H-2″），3.46（1H，dd，J＝9.0，8.8 Hz，H-3″），1.50 （2H，m，H-2?），1.25 （2H，m，H-3?），0.83 （3H，t，J＝ 7.4 Hz，H-4?）；13C-NMR （ 150 MHz，CD3OD）δ： 159.1 （C-2），135.3 （C-3），179.2（C-4），163.1 （C-5），99.9 （C-6），166.1 （C-7），94.7 （C-8），158.4 （C-9），105.6 （C-10），122.8 （ C-1′），117.1 （ C-2′），146.0 （ C-3′），149.9 （ C-4′），115.9 （ C-5′），123.5 （ C-6′），104.4 （C-1″），75.3 （C-2″），77.5 （C-3″），72.7（C-4″），77.2 （C-5″），170.2 （C-6″），66.2 （C-1?），31.5 （C-2?），19.9 （C-3?），13.9 （C-4?）。以上數據與文獻［25］ 基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸丁酯。

化合物15： 淡黃色無定形粉末，分子式C15H12O6，5% 香草醛-濃硫酸TLC 顯色為橙紅色，ESI-MSm/z： 288.0 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ： 7.36 （2H，d，J＝8.5 Hz，H-2′，6′），6.83 （2H，d，J＝8.5 Hz，H-3′，5′），5.92（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），5.88 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），4.98 （1H，d，J＝11.6 Hz，H-2），4.98 （1H，d，J＝11.6 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ： 85.0 （C-2），73.6 （C-3），198.5 （C-4），165.3 （C-5），97.3 （C-6），168.7 （C-7），96.2 （C-8），164.5 （C-9），101.8（ C-10 ），130.4 （ C-1′），129.3 （ C-2′，6′），116.1 （C-3′，5′），159.2 （C-4′）。以上數據與文獻［26］ 基本一致，故鑒定為香橙素。

5 α-葡萄糖苷酶抑制活性

參照文獻［27］ 報道方法，采用PNPG 法對總提取物、各萃取部位浸膏和分離得到的化合物進行α-葡萄糖苷酶抑制活性測定并計算IC50值。以阿卡波糖為陽性對照，其IC50值為 （4.36±0.11）ng/mL，受試樣品以DMSO 溶解。結果顯示，總提取物、石油醚部位、氯仿部位、正丁醇部位和水層浸膏的IC50值分別為（1.83±0.04）、（2.14±0.14）、（1.29±0.15）、（1.71±0.03）、（3.68±0.17）μg/mL?；衔? 的IC50值為 （29.48 ± 1.86）μmol/L，表現出較弱的抑制活性； 化合物4 ～5 對α-葡萄糖苷酶有一定程度的抑制活性，其IC50值分別為（0.50±0.07）、（0.71±0.07） μmol/L； 化合物2～3 和6～15 的IC50值均大于25 μmol/L。

6 結論

青錢柳是一種古老的物種，目前僅分布于我國南部、東南部等地區，其葉長期被制成茶飲，用于防治糖尿病等代謝性疾病。為了進一步的明確青錢柳葉降糖的物質基礎，本實驗對其化學成分開展研究，綜合運用多種色譜方法、計算ECD 等技術，從青錢柳葉的乙醇提取物中分離并鑒定了15 個化合物，包括1 個新的三羥基四氫萘醇苷（1），6 個首次從青錢柳葉中分離得到的黃酮類化合物4 ～5、8～10、14。其中，化合物4～5 的骨架結構是黃烷-3-醇與苯丙酸雜合而成，為一對比較少見的黃酮木脂素類化合物。目前，此類化合物僅在兔眼越橘（Vacciniumashei）［11］、鈍葉號角樹 （Cecropia obtusifolia）［12］、刺籬木（Flacourtiaindica）［13］、尖葉飽食桑英 （Brosimumacutifolium）［14］和Ocotea diospyrifolia［28］中被發現，上述化合物的發現進一步豐富了青錢柳葉中化學成分類型。此外，為了探究青錢柳葉的降糖作用，采用PNPG 方法評價其提取物以及分離純化得到的化合物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性。結果顯示，青錢柳95% 乙醇總提取物具有一定的活性，其中氯仿和正丁醇部位比總提取物抑制活性好，石油醚部位和水層比總提取物抑制活性差； 新化合物1 抑制活性相對較弱，化合物4 和5 均具有潛在的抑制活性。