乳腺癌中Tspan8、ITGA5表達情況與臨床病理特征及預后的關系*

王秦西,車康明,郭千弘

甘肅省天水市第一人民醫院腫瘤外科,甘肅天水 741000

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤,發病率呈逐年上升趨勢,嚴重威脅女性生命健康[1]。乳腺癌的進展為多基因、多因素協同作用的結果,研究表明,該病預后與有無腋窩淋巴結轉移密切相關[2]。臨床常依據術中觀察是否有腋窩淋巴結轉移評估乳腺癌是否發生轉移,但仍會出現漏診、誤診,影響治療結果。所以尋找一種可準確評估乳腺癌轉移的靈敏指標至關重要。四跨膜蛋白8(Tspan8)屬于四跨膜蛋白超家族(TM4SF)成員,研究證實胃癌、肝癌中Tspan8呈過表達且參與腫瘤轉移、復發過程[3]。整合素α5(ITGA5)屬于整合素家族成員,位于染色體12q11-q13區域,胃癌、卵巢癌中ITGA5呈高表達且與不良預后有關[4-5]。但目前涉及Tspan8、ITGA5與乳腺癌關系的研究較少。因此,本研究主要探討Tspan8、ITGA5在乳腺癌中的表達情況及其與患者臨床病理特征及預后的關系,為乳腺癌早期診斷和治療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2018年4月至2020年4月本院收治的136例乳腺癌患者納入研究,年齡25～71歲、平均(51.37±5.28)歲。納入標準:(1)經病理檢查確診且符合《2020 CSCO版乳腺癌診療指南》中乳腺癌的診斷標準[6];(2)入院后接受乳腺癌根治術、腋窩淋巴結清掃術治療。排除標準:(1)術前有放化療、新輔助治療、內分泌治療史;(2)心、肝、肺、腎等組織器官功能異常;(3)合并其他惡性腫瘤、免疫缺陷疾病、血液系統疾病;(4)認知異?；蚓癞惓?(5)妊娠及哺乳期女性;(6)依從性差。納入研究的患者或直系親屬對本研究知情同意。本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1免疫組化法檢測組織標本中Tspan8、ITGA5的表達情況 收集患者癌組織標本及對應的癌旁組織標本,采用乳腺癌組織及癌旁組織中Tspan8、ITGA5的表達情況。采用4%多聚甲醛常規固定乳腺癌組織和癌旁組織標本,組織標本經脫水、石蠟包埋、切片處理后,制得厚度為4 μm的組織切片。將組織切片進行二甲苯脫蠟、不同梯度乙醇脫水處理后,使用檸檬酸鈉溶液在高壓高溫條件下進行抗原修復,冷卻后加入磷酸鹽緩沖液(PBS),沖洗3次,每次5 min。隨后加入5%山羊血清抗體封閉液進行封閉,滴加兔抗人Tspan8多克隆抗體(1∶50,美國Biorbyt公司)、兔抗人ITGA5多克隆抗體(1∶100,美國Biorbyt公司),4 ℃冰箱內孵育過夜,加入PBS沖洗3次,加入羊抗兔二抗IgG(1∶1 000,北京中杉金橋公司),37 ℃下孵育30 min,PBS沖洗3次。采用DAB染色試劑盒顯色,蘇木精復染,乙醇脫水,樹脂膠封片,高倍顯微鏡下觀察。陽性細胞的判定:顯微鏡下觀察,細胞質內出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細胞。陽性細胞百分比評分:陽性細胞<5%、5%～<25%、25%～<50%、50%～<75%、≥75%分別計為0、1、2、3、4分。染色強度評分:無著色、淺黃或黃色、棕黃色、棕褐色分別為0、1、2、3分。染色指數(SI)=陽性細胞百分比評分×染色強度評分,蛋白陽性或陰性表達的判定:SI>3分為陽性,SI≤3分為陰性[7]。

1.2.2隨訪 通過電話、門診復查等方式對出院的乳腺癌患者行連續36個月的隨訪,記錄患者生存狀況,隨訪截止時間為2023年4月。第1年每2個月隨訪1次,第2、3年每4個月隨訪1次,死亡或到隨訪截止時間即可終止隨訪。

1.3統計學處理 采用SPSS23.0統計軟件進行數據處理。計數資料采用例數或百分率表示,組間比較采用χ2檢驗。采用多因素Cox回歸分析乳腺癌患者腋窩淋巴結轉移的危險因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1乳腺癌組織和癌旁組織Tspan8、ITGA5陽性表達率的比較 乳腺癌組織Tspan8、ITGA5陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05),見表1,圖1、2。

表1 乳腺癌組織和癌旁組織中Tspan8和ITGA5表達情況比較[n(%)]

注:A為乳腺癌組織(×40);B為癌旁組織(×40);A1、B1為A、B的局部放大。

注:A為乳腺癌組織;B為癌旁組織。

2.2Tspan8、ITGA5表達情況與乳腺癌臨床病理特征的關系 不同年齡、月經狀況的乳腺癌患者Tspan8、ITGA5表達情況比較,差異無統計學意義(P>0.05)。低分化、腫瘤最大徑≥3 cm、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有腋窩淋巴結轉移、其他分子分型的乳腺癌患者Tspan8、ITGA5陽性表達率高于中/高分化、腫瘤最大徑<3 cm、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無腋窩淋巴結轉移、三陰性分型的乳腺癌患者(P<0.05)。見表2。

表2 Tspan8、ITGA5表達與乳腺癌臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3不同臨床病理特征的乳腺癌患者3年生存率的比較 連續隨訪36個月后,136例乳腺癌患者中94例存活,3年生存率為69.12%(94/136)。低分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有腋窩淋巴結轉移、其他分子分型及Tspan8、ITGA5陽性表達患者的3年生存率低于中/高分化、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無腋窩淋巴結轉移、三陰性分型及Tspan8、ITGA5陰性表達患者(P<0.05),見表3。

表3 不同臨床病理特征的乳腺癌患者3年生存率的比較[n=94,n(%)]

2.4乳腺癌患者腋窩淋巴結轉移的多因素Cox回歸分析 將乳腺癌患者腋窩淋巴結轉移作為因變量,將單因素分析有意義的指標作為自變量進行多因素Cox回歸分析,結果顯示,TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、其他分子分型及Tspan8、ITGA5陽性表達是乳腺癌患者腋窩淋巴結轉移的危險因素(P<0.05),見表4。

表4 乳腺癌患者腋窩淋巴結轉移的多因素Cox回歸分析

3 討 論

乳腺癌屬于激素受體依賴型惡性腫瘤,我國乳腺癌發病率呈逐年上升趨勢,為女性癌癥相關死亡的重要原因之一[8]。晚期乳腺癌會向遠處轉移,累及多臟器,腋窩淋巴結轉移是導致乳腺癌遠處轉移、術后復發的主要因素,會增加患者死亡風險。研究證實,病灶范圍、腫瘤大小、TNM分期、淋巴結轉移為評估乳腺癌患者預后的重要依據[9]。臨床對乳腺癌患者實施腋窩淋巴結清掃術治療,但手術創傷大、并發癥較多,而且對腋窩淋巴結無轉移的患者而言屬于過度治療,不會改善局部控制率和生存率。所以,為乳腺癌預后提供新的預測標志物,能為疾病診斷和治療提供新思路。

四跨膜蛋白超家族成員參與惡性腫瘤轉移、浸潤過程,Tspan8可作為腫瘤診斷、預后評估指標[10]。有研究通過在結腸癌細胞中的實驗研究發現,Tspan8為細胞膜蛋白,不影響腫瘤細胞生長、分裂,其參與癌細胞運動,Tspan8水平升高,癌細胞轉移活性、浸潤能力增強[11]。另一研究認為,Tspan8通過c-Met、Notch、Rhokinase等信號通路,促進腫瘤新生血管的形成[12]。本研究結果顯示,乳腺癌組織Tspan8陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05);不同分化程度、TNM分期、分子分型、有無腋窩淋巴結轉移的乳腺癌患者Tspan8表達情況比較,差異有統計學意義(P<0.05),Tspan8與腋窩淋巴結轉移有關,提示Tspan8在乳腺癌中呈高表達且與病情進展有關。有研究發現,腸癌細胞株中Tspan8呈過表達,與消化系統腫瘤轉移、浸潤有關,與本研究結果相似[13]。另一研究報道,胰腺癌轉移灶細胞系Tspan8 mRNA表達水平高于原發灶細胞系[14]。分析原因:經血管內皮細胞生長因子受體(VEGFR)、成纖維生長因子受體(FGFR)、c-Kit等靶點阻斷磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/絲氨酸蘇氨酸激酶(AKT)、VEGFR/ Janus激酶2(JAK2)/信號轉導和轉錄激活因子3(STAT3)等信號通路,可抑制癌細胞增殖、遷移,促使癌細胞死亡。Tspan8表達上調,會促進腫瘤細胞生長、轉移,該作用與PI3K/AKT、MAPK/AKT等信號通路有關[15]。本研究結果顯示,Tspan8陽性表達患者的3年生存率低于Tspan8陰性表達患者(P<0.05),提示Tspan8過表達與乳腺癌預后不良有關,有望成為評估乳腺癌預后的標志物。

整合素為細胞表面的黏附分子,包含α亞基、β亞基。整合素家族為跨膜二聚體蛋白,具有細胞黏附、信號通路受體功能,ITGA5亞基或二聚體可結合細胞外結構、基質蛋白,從而調控細胞周期,調控細胞增殖、侵襲、遷移等,其有組織、功能特異性[16-17]。ITGA5經依賴黏附、非黏附途徑促進乳腺癌發生、發展。本研究結果顯示,乳腺癌組織ITGA5陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05);ITGA5陽性表達與分化程度、TNM分期、腋窩淋巴結轉移、分子分型有關(P<0.05)。這提示ITGA5高表達與乳腺癌發生、發展有關。免疫組化實驗顯示,ITGA5在肝癌組織中的表達高于普通肝組織,與本研究結果一致[18]。研究表明,乳腺癌骨轉移瘤中ITGA5呈高表達,其可促進癌細胞向骨組織黏附,但肺、肝、腦轉移癌中ITGA5呈低表達[19]。有研究示,抑制ITGA5可延緩肺癌細胞遷移。本研究結果顯示,ITGA5陽性表達患者的3年生存率低于ITGA5陰性表達患者(P<0.05),提示ITGA5高表達與乳腺癌預后不良有關。有研究發現,膠質瘤中ITGA5表達升高且隨膠質瘤WHO分級增加而升高,ITGA5表達與腫瘤增殖、惡性程度相關[20]。多因素Cox回歸分析顯示,TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、其他分子分型及Tspan8、ITGA5陽性表達是乳腺癌患者腋窩淋巴結轉移的危險因素(P<0.05),提示Tspan8、ITGA5表達升高導致乳腺癌細胞侵襲能力增強,細胞黏附性下降,易發生腋窩淋巴結轉移、侵襲,監測Tspan8、ITGA5水平變化可反映乳腺癌浸潤、轉移的風險。綜上所述,Tspan8、ITGA5在乳腺癌患者中呈高表達,均與患者臨床病理特征及預后有關。