蒙醫溫針調節神經遞質及皮質醇含量治療抑郁大鼠機制研究

阿茹娜，包青林，賽音朝克圖，阿古拉，斯楞格*

（1.內蒙古醫科大學蒙醫藥學院，呼和浩特 010110；2.內蒙古自治區國際蒙醫醫院，呼和浩特 010013；3.內蒙古科技大學包頭醫學院，內蒙古 包頭 014040）

抑郁癥主要表現為認知、情感與軀體的多方面綜合障礙，為臨床相對常見的精神疾患，研究提示，目前人類患抑郁癥總人數超過3 個億[1]。其中抑郁癥的軀體癥狀臨床上尚無明確的病理征象，多以機體痛苦感與致殘情況等感覺為評估標準[2]，其屬于精神障礙最常見癥狀[3]。研究提示約75%抑郁癥患者存在有不同類型的失眠、疲勞以及頭暈等癥狀[4]。針對抑郁癥發生機制研究提示，下丘腦-垂體-腎上腺軸在其發生發展過程中發揮十分重要的作用[5]，一旦被過度激活，則將導致機體分泌皮質醇水平的顯著升高，改變患者的認知能力，造成患者失眠等癥狀[6]。

臨床上抗抑郁藥物有許多種，其中主要以5-HT 受體拮抗劑和攝取抑制（SARIs）、三環類抗抑郁藥（TCAs）以及NE/DA 再攝取抑制劑（NDRIs）等藥物主。研究顯示，臨床中應用的抗抑郁藥物雖然種類繁多，但約有30%～60%的抗抑郁藥物治療效果不盡人意，近40%的患者服用后6 ～12 周未見療效，50%以上的患者未被治愈[7-8]。而且這類藥物在服用后雖有短期療效，隨著服用時間的延長，會出現不同程度的不良反應，嚴重的甚至會增加患者的自殘、自殺風險。蒙醫溫針療法具有幾千年的悠久歷史[9-10]，以針對機體固定穴位實施針刺治療，加以熱刺激等發揮治療和預防疾病、促進傷體康復等目的[11]。其中所用銀針其導熱性能十分良好，結合熱刺激特定穴位后發揮調節機體寒熱，改善氣血循環等作用[12-13]。近年來針對抑郁癥復雜的發病機制，利用蒙醫溫針多角度、多層次、多途徑等獨特的治療特點，研究證實了蒙醫溫針療法對抑郁大鼠胃腸功能、神經營養因子、腦腸肽的影響。但是蒙醫溫針對抑郁大鼠皮質醇含量的影響目前尚無研究報道?；诖?，本研究通過分別建立抑郁大鼠動物模型，探討蒙醫溫針對動物皮質醇以及機體緊張焦慮等狀況的改善，闡述蒙醫溫針治療抑郁的可能機理，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物與分組 清潔SD 雄性大鼠，體質量160 ～180 g，共45 只（由內蒙古大學實驗動物中心提供），隨機分為3 組，按隨機方法分成蒙醫溫針組、西藥治療組（金耀氨基酸有限公司，天津，中國，編號：439-14-6）和生理鹽水組，每組15 只。本研究通過內蒙古醫科大學生物醫學科研倫理審批（審批標號：YKD202301169）。1） 蒙醫溫針組：共15 小籠，每籠1 只孤養，接受各種不同的應激刺激28 d。每日進行應激刺激后1 小時，給予蒙醫溫針干預，將大鼠固定后，用特制蒙醫銀針進行針刺，之后連接蒙醫智能針灸治療儀，電流強度為100 mA，溫度為40 ℃，干預15 min。穴位取頂會、赫依、心、腸、巴達干、胃等6 個穴，按頂會/赫依（鎮赫依）、心/腸（通白脈）、巴達干/胃（調胃火）進行配伍，按此順序，每日1次，每次15 min，共計治療28 d。2） 西藥治療組：共15 小籠，每籠1 只孤養，接受各種不同的應激刺激28 d。每日進行應激刺激后1 小時給予腹腔注射百憂解（注射劑量：2 mg/kg， 每日1 次，生理鹽水稀釋1 mL）；3） 生理鹽水組：共15 小籠，每籠1 只孤養，接受各種不同的應激刺激28 d。每日進行應激刺激后1 小時給予腹腔注射生理鹽水（注射劑量：2 mg/kg，每日1 次）。

1.2 蒙醫溫針方法及選穴 根據蒙醫調節三根理論和臨床上行之有效的穴位，蒙醫溫針療法的選穴原則是以蒙醫“辨證施治”學說為指導[14-16]，主要根據不同疾病的病因病機，并結合白脈分布、疼痛點、病變部位等具體情況辨證取穴。蒙醫溫針療法常用穴位是指根據文獻記載及臨床經驗，總結出的適應病癥范圍相對明確而療效確切的固定穴位，選穴原則：頂會穴、赫依穴、心穴，巴達干穴、胃穴、腸穴、頂會穴（位于頂骨正中）、赫依穴（第一胸椎下凹正中）、心穴（第七胸椎下凹陷正中）、巴達干穴（第三胸椎下凹正中）、胃穴（第十一胸椎下凹正中）、腸穴（第十三胸椎下凹正中）[17]， 使用特制銀針（內蒙古醫學院蒙醫藥學院，專利號：ZL201120058078.0）（直徑0.5 mm，長度3.0 cm）斜刺后， 接MLY-I 型蒙醫溫針儀（內蒙古醫學院蒙醫藥學院，專利號：ZL201120058078.0）。電流強度100 mA， 溫度40 ℃， 每次刺激15 min， 每隔3 d 治療1 次， 共5 次。

1.3 實驗方法

1.3.1 抑郁大鼠造模 以CUMS 模型為基礎，試驗大鼠均孤養，并接受28 天不同類型的應激刺激，包括冷水游泳、晝夜顛倒、禁食、夾尾、禁水、水平搖晃和籠位傾斜45°等，隨后通過觀察大鼠精神狀況、飲水量、進食量、糞便情況、測量體質量等一般情況及糖水消耗實驗進行評估，評定抑郁癥模型大鼠造模是否成功。

1.3.2 中樞神經遞質檢測方法[18]快速分離試驗動物的中樞神經系統，并在冰浴下對分離組織進行稱重，離心后置于玻璃器皿內打漿搖勻，隨后去上清液，滴入濃度為0.4 mol/L 的高氯酸鈉，快速放入-60℃低溫冰箱保存后備用。

1.3.3 血清皮質醇測定方法 在早上7 點的時候從尾靜脈取血液1 mL，用冷凍式離心機離心10 min，離心機轉速設置為3 000 r/min，離心后取其上清液保存于低溫冰箱，用于后續的檢測，具體檢測方法詳見參見文獻[19]。

1.3.4 大鼠海馬組織神經細胞的形態學觀察 將未麻醉的大鼠脫椎致死，迅速準確地切取分離出海羅馬狀組織，切片立即再投入已稀釋的4%多聚異甲醛試液箱中，固定約2 h，酒精稀釋的梯度分別是75%、85%、95%以及100%。干燥以后，二甲苯膜層是透明的，用石蠟進行包埋。切片厚度可達近5 mm，置于60 ℃的恒溫培養箱中干燥約4 h，備用。HE 染色方法：用石蠟進行切片，經脫蠟劑冷卻處理至表面干燥以后，用蘇木色素溶液浸染15 min，用無水乙醇和自來水沖洗干凈，再改用伊紅色素溶液浸染約2 min，用酒精處理，酒精稀釋的梯度分別是75%、85%、95%以及100%。等到二甲苯磺胺變得透明以后，用中性的樹脂進行封片，在顯微鏡下觀察分離出的大鼠腦組織。

2 結果

2.1 蒙醫溫針組、西藥治療組和生理鹽水組中樞神經遞質含量改變 結果見圖1。

圖1 蒙醫溫針組、西藥治療組和生理鹽水組中樞神經遞質含量改變

2.2 蒙醫溫針組和生理鹽水組應激前后體質量差值及隨時間的變化 見表1。

表1 不同治療對抑郁大鼠體質量的影響（± s，n = 15） g

表1 不同治療對抑郁大鼠體質量的影響（± s，n = 15） g

注：與生理鹽水組比較，# P ＜0.05

組別 時間 CUMS 應激時間0 h 24 h 48 h 72 h蒙醫溫針組 應激前 315.15±2.31 285.93±3.65 277.49±3.66 254.19±3.85應激后 19.38±1.96 # 18.93±2.20 # 17.15±1.75 # 16.53±1.32 #生理鹽水組 應激前 312.93±2.35 277.80±3.57 256.64±3.65 240.00±3.76應激后 14.93±0.63 16.55±2.01 13.02±1.72 12.12±0.95 Sum 應激前 296.45±2.41 286.47±3.69 268.52±3.53 254.69±3.88應激后 17.92±1.88 18.43±2.31 18.78±1.72 20.85±1.69

2.3 蒙醫溫針對大鼠血清皮質醇含量的影響 見表2。2.4 蒙醫溫針和生理鹽水組試驗大鼠血清皮質醇隨時間變化的觀察 見表3。

表2 2 組間抑郁大鼠的血清皮質醇差值的比較（± s，n = 10） nmol/L

表2 2 組間抑郁大鼠的血清皮質醇差值的比較（± s，n = 10） nmol/L

注：與生理鹽水組比較，# P ＜0.05

組別 血清皮質醇差值蒙醫溫針組 1.78±0.89#生理鹽水組 4.39±0.72

表3 不同治療對抑郁大鼠血清皮質醇的影響（± s，n = 15） μg/dL

表3 不同治療對抑郁大鼠血清皮質醇的影響（± s，n = 15） μg/dL

注：與生理鹽水組比較， # P ＜0.05

組別 時間 CUMS 應激時間1 d 2 d 3 d 4 d蒙醫溫針組 應激前 10.15±0.85 11.67±1.21 12.93±1.11 13.16±1.38應激后 2.13±0.12 # 1.19±0.32 # 1.43±0.22 # 1.56±0.23 #生理鹽水組 應激前 11.58±0.86 12.46±1.15 13.59±1.13 16.15±1.39應激后 2.01±0.11 1.77±0.12 1.66±0.21 1.72±0.23 Sum 應激前 11.46±0.81 12.17±1.19 13.69±1.14 14.50±1.37應激后 2.01±0.09 1.44±0.21 1.85±0.20 2.15±0.38

2.5 抑郁后睡眠剝奪大鼠中樞海馬組織形態學觀察結果 蒙醫溫針治療組中樞海馬病理切片顯示（×100）：海馬區神經元呈梭形緊密排列，細胞輪廓仍較清晰（見圖2A），生理鹽水組中樞海馬病理切片（×100）顯示：神經元數目減少，排列紊亂，細胞輪廓模糊，出現大量空泡，錐體細胞形態不規則，細胞間隙增大（見圖2B）。

圖2 抑郁大鼠中樞海馬組織形態學觀察結果（HE 染色，×100）

3 討論

應激狀態下中樞神經GLU 含量降低被視為機體自身的保護機制[20]。谷氨酸對細胞的毒性作用是隨著濃度增加而增加的，同時其與人體的焦慮和抑郁的發生存在一定相關性[21]，有學者研究證實神經突觸間隙外谷氨酸的毒性作用可造成中樞神經元損傷，是導致動物個體出現精神障礙的重要原因[22]。而焦慮、抑郁的產生，在基底前腦、腦干、腹膜下側的前額葉區以及丘腦區域，都存在中樞神經遞質的表達，這導致了癥狀的加重[23]。通過本實驗發現，蒙醫溫針干預后，SD大鼠中樞神經遞質GABA 含量顯著升高，GLU 含量降低（與生理鹽水組對照）；糾正中樞神經興奮性/抑制性神經遞質比值，減輕GLU 的興奮性毒性作用引起的神經細胞損害；這可能是蒙醫溫針改善患者焦慮、抑郁狀態的神經內分泌機制之一。

現有研究提示SD 的應激將導致機體出現顯著的神經-內分泌方面的病理生理改變，其中最重要的改變在于下丘腦-垂體-腎上腺軸的變化[24]。研究提示實驗大鼠慢性應激后，長時間均處于顯著的疲勞狀態，且刺激下丘腦-垂體-腎上腺軸分泌大量的皮質醇類激素，故應激障礙者其出現緊張焦慮的比例顯著增高。而被激活的下丘腦-垂體-腎上腺軸，同時還將促使生長激素釋放激素與促腎上腺皮質激素釋放激素大量分泌，進一步影響機體的焦慮和抑郁狀態，干擾正常的情緒狀態，導致抑郁的加重。

本次實驗對給予大鼠進行72 h 連續睡眠剝奪慢性不可預知性應激刺激，大鼠引起的主要病理生理的變化是出現應激反應，能量消耗過多導致機體營養不良而衰竭死亡。本試驗在造模24 小時后，2 組大鼠的體質量和皮質醇含量呈現出差異，說明治療組對應激條件下動物的機能調節具有正面意義。另一方面從血清皮質醇升高的程度，亦表明蒙醫溫針對應激反應有良好的緩和作用，降低應激大鼠的焦慮、緊張情緒，從而調整其異常升高的基礎代謝率。目前臨床多見抑郁癥，伴隨焦慮、抑郁、失眠等精神障礙的患者，蒙醫溫針從整體機能狀態的調節入手，能阻斷HPA 興奮，下調HPA 軸興奮水平，恢復神經內分泌系統平衡，這也是蒙醫溫針通過多路徑達到治療抑郁癥的目的。