凝聚胺法及微柱凝膠法在輸血檢驗中的應用分析

李瑾艷

常州市武進中醫醫院檢驗科，常州 213161

輸血是臨床上常用的治療方法，可在嚴重創傷大出血等情況下顯著提高患者的存活率并改善預后[1-2]。輸血主要涉及紅細胞、血小板、血漿等物質的輸注，通過補充失血、改善氧運輸和凝血功能來維持體內穩定狀態[3-4]。輸血治療是一種能夠迅速給患者補充血量的重要治療方法。通過輸注血液成分，包括紅細胞、血小板、血漿等，可以增加血容量，滿足患者的基本機體需求，提高血壓，防止出血性休克的發生。此外，輸血治療還能通過輸送帶有氧能力的紅細胞緩解由紅細胞減少或帶氧能力降低導致的急性缺氧病狀。紅細胞攜帶的血紅蛋白可以與氧結合，在體內運輸和釋放氧分子，以滿足組織和器官的氧需求，從而改善患者的氧合功能[5-6]。在輸血治療前必須進行相關對的檢驗，以保證輸血的安全性，避免傳染性疾病以及其他意外情況的發生。必要的檢查項目包括血型、血常規、凝血常規、轉氨酶、乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒、交叉配血試驗等。凝聚胺法和微柱凝膠法都是常用的交叉配血試驗方法，且各有其優缺點。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2021 年5 月至2022 年5 月在我院接受臨床輸血治療的240 例患者作為研究對象。其中，男性患者有130 例，女性患者有110 例?；颊吣挲g范圍從18～73 歲，平均年齡為（42.07±9.83）歲。所有被選取的患者均符合了接受輸血治療的指征。研究方案已經通過我院倫理委員會的審批并獲得了批準。

納入患者標準：①接受臨床輸血治療的患者。②年齡范圍符合研究要求，患者為18 歲及以上成年人。③符合輸血治療指征的患者。④能夠提供必要的資料和血液樣本。⑤已經獲得患者或其監護人的知情同意。

排除患者標準：①患者有與輸血不相關的其他嚴重疾病。②患者有輸血相關的明確禁忌證。③患者曾經接受過輸血反應或血液不相容的反應。④患者有血液系統疾病或其他相關疾病的合并癥。⑤患者無法提供必要的血液樣本或資料等。

1.2 方法 所有患者均進行凝聚胺法和微柱凝膠法檢查，取患者靜脈血3 ml，對樣本進行抗凝、分離處理，等待檢驗。凝聚胺法：在進行凝聚胺法檢驗時，樣本紅細胞需先配成3%～5%的細胞懸液。操作過程中，需要按照一定的加樣量進行操作，其中血清加樣2 滴，紅細胞懸液加樣1 滴。主管使用受血者血清與供者紅細胞懸液混合，次管使用受者紅細胞懸液與供者血清混合。將所有試管中加入0.6 ml 低離子介質，并進行充分混勻。之后，讓試管在室溫中靜置1 min。隨后，加入凝聚胺溶液2 滴，并再次混勻。試管繼續在室溫中靜置15 s。使用離心機以3000 rpm 離心10 s。此時，需要清除上層的清液，而底部大約保留2 滴液體。輕輕搖動試管，并觀察是否有凝塊出現。如果未形成凝塊，則需要重新進行之前的試驗步驟。如果實驗中出現凝塊，在接下來的操作中，需要加入2 滴重懸液進行混合。這時，如果凝塊在1 min 內完全分散，那么試驗結果為陰性，即供者和受者的血液可以配合。如果凝塊未能完全分散，則試驗結果被判定為陽性，表示供受者的血液不相容。微柱凝膠法：在進行微柱凝膠法檢驗時，使用專用稀釋液將受供者的血液配制成0.5%的紅細胞懸液。隨后，取出微柱凝膠卡，并在主次側進行標記。揭開封條，將主側管依次置入供血者配制好的細胞懸液50 μl 和受血者血清50 μl。同時，在次側管中依次加入受血者配制好的細胞懸液50 μl和供血者血清50 μl。將裝有標本的微柱凝膠卡置于37℃的環境中孵育15 min。通過孵育過程，血液樣本與凝膠發生反應，形成特定的凝塊。使用專用離心機以設定條件離心5 min。離心完成后，取出微柱凝膠卡，觀察結果。在微柱凝膠法中，如果觀察到紅細胞完全沉降于凝膠管底部，試驗結果被判定為陰性，表示供受者的血液相容，可以進行輸血配對。與此相反，如果紅細胞凝集塊位于凝膠表面或在凝膠中形成，試驗結果被判定為陽性，表示供受者的血液不相容，存在血型不匹配的風險，不適合進行輸血配對。

1.3 療效標準 對比兩種方法檢驗時間，檢驗結果（主側陽性、次側陽性、總陽性、假陽性）并分析配血不符合的病因。①檢驗時間：比較凝聚胺法和微柱凝膠法的檢驗時間，包括樣本處理、試劑加入、孵育時間、離心等步驟的耗時情況。較短的檢驗時間通常更能提高工作效率和快速得出結果。②檢驗結果：比較兩種方法的檢驗結果，包括主側陽性（受血者血清+供者紅細胞懸液）的數量，次側陽性（受者紅細胞懸液+供者血清）的數量，總陽性的數量以及假陽性的發生率。

1.4 統計學方法 將數據納入SPSS17.0 軟件中分析，計量資料比較采用t檢驗，并以±s表示，計數資料采用χ2檢驗，并以率（%）表示，P＜0.05 為差異顯著，有統計學意義。

2 結果

2.1 凝聚胺法與微柱凝膠法檢驗時間對比 將譜細胞鑒定結果作為金標準，凝聚胺法檢驗時間（12.20±2.59）min 短于微柱凝膠法（33.68±3.24）min，t=80.224，P＜0.001。

2.2 凝聚胺法與微柱凝膠法檢驗結果對比 微柱凝膠法檢出陽性不合格率高于凝聚胺法（P＜0.05），見表1。

表1 凝聚胺法與微柱凝膠法檢驗結果對比 [例（%）]

2.3 配血不合病因分析 凝聚胺法配血不合中血液疾病占比25.00%、免疫性或溶血性貧血占比12.50%、輸血妊娠史血占比12.50%；微柱凝膠法配血不合中血液疾病占比50.00%、免疫性或溶血性貧血占比25.00%、腎病占比12.50%、輸血妊娠史血占比12.50%，見表2。

表2 配血不合病因分析 [例（%）]

3 討論

輸血作為臨床重要的治療方法，若操作不當可能引發多種不良并發癥，如發熱、寒顫、血管血腫、過敏性休克等。此外，不當的輸血管理可能導致病毒傳播和溶血反應的發生，給患者帶來額外風險[7]。隨著醫療水平的不斷提高，人們對體內血液的研究和認識越來越深入。對于輸血治療的安全性也日益受到重視。目前，國際上廣泛認可的紅細胞血型系統已達到30 多種，其中最為常見的是ABO 和Rh 血型系統。然而，令人驚訝的是，根據國際輸血協會2017 年的數據，已經識別出多達346 個紅細胞抗原。這種深入了解各種紅細胞血型抗原的重要性在于，不同個體之間的血型差異可能會影響輸血的安全性。在進行輸血過程中，選擇合適的血液供者和接受者之間的配型非常關鍵，以減少發生不良輸血反應的風險。準確了解患者和供血者的血型，以及血型抗原的匹配情況，可以大大降低溶血反應和免疫相關反應的發生率[8-9]。不僅紅細胞具有血型系統，白細胞、血小板也存在不同的血型和抗原。一般情況下，臨床上所稱“同血型”僅指紅細胞ABO 系統和Rh 系統中的RhD 血型相同或是相容，仍有一定概率存在不匹配的抗原或抗體，導致患者在輸血后發生溶血反應。所以輸血前不僅需要接受血型檢驗、傳染病等常規檢查，還必須實施交叉配血試驗進一步對血液的相容性進行確認，以保證輸血治療的安全性。

ABO 血型系統是人類最常見的血型分類系統之一，基于紅細胞膜表面所含有的凝集原A 和凝集原B進行判定。根據A 和B 凝集原的有無，可以將血型分為A 型、B 型、AB 型和O 型。在A 型血中，紅細胞膜上只含有A 凝集原。因此，A 型血的血清中會含有抗B 凝集素，可將B 凝集原識別為異物。同樣地，在B 型血中，紅細胞膜上只含有B 凝集原。因此，B 型血的血清中會含有抗A 凝集素，可將A凝集原識別為異物。AB 型血的特殊之處在于，紅細胞膜上同時含有A 和B 凝集原[10-12]。因此，AB 型血的血清中既沒有抗A 凝集素，也沒有抗B 凝集素。而在O 型血中，紅細胞膜上沒有A、B 凝集原。因此，O 型血的血清中同時含有抗A 凝集素和抗B 凝集素。這種血型抗原與血型抗體的對應關系，決定了血液在輸血配對過程中的相容性。輸血時，應避免輸入患者體內含有其相應抗體的血液，以防止出現嚴重的溶血反應。據此原理，在同血型輸血前也必須進行交叉配血試驗，主要包括主側和次側配血，主側配血是指將受血者血清和供血者紅細胞混合，觀察是否有凝集反應。次側配血是將供血者血清和受血者紅細胞混合，觀察是否有凝集反應。交叉配血試驗是一種非常重要的實驗室檢測方法，不僅用于再次確認血型的鑒定結果，還可以評估供者與受者之間是否存在相容性和預測可能的輸血反應。交叉配血試驗的主要目的是檢測供者與受者之間是否存在不兼容的抗原抗體反應。通過混合供者的紅細胞與受者的血清（或反過來），如果出現凝集現象，則表明存在不相容的抗原-抗體反應。這種凝集現象可能提示存在不規則抗體、亞型、免疫性抗體以及ABO 血型系統以外的其他血型抗體。對于具有特殊抗體的患者來說，交叉配血試驗尤為重要。如果患者體內存在反向抗體（即Rh 陰性的個體體內產生了抗Rh 陽性抗體），在輸血時，必須仔細選擇與所產生抗體不相容的供者，以避免溶血反應。此外，交叉配血試驗也可用于檢測供者與受者在HLA 系統（人類白細胞抗原）上的相容性，它是免疫系統相關的重要因素。HLA 抗原的不相容性可能導致移植排斥反應或輸血后的免疫反應。隨著醫療技術的發展，交叉配血試驗的方法越來越多樣，準確性也得到了顯著的提升，主要有如鹽水介質法、酶技術配血法、微柱凝膠法、抗球蛋白法、凝聚胺法等[13-14]。凝聚胺法主要是檢測IgM 和IgG 兩種抗體，能夠較為準確的發現受供者雙方血液中是否存在可引起溶血性輸血反應的抗體。紅細胞表面具有很多負電荷，讓紅細胞之間相互排斥，不易發生凝聚。但是當紅細胞懸浮于電解質中時，陽離子就會被紅細胞的負電荷吸引，紅細胞被擴散的雙層離子云圍繞，形成Zeta 電位，Zeta 電位決定紅細胞之間的排斥作用。凝聚胺法正是依靠低離子介質降低溶液的離子強度，使紅細胞附近的陽離子云減少，加速血清中抗原和抗體結合。再置入具有亞電荷的聚陽離子聚合物-聚胺溶液，抵消紅細胞表面的負電荷，使Zeta 電位降低，縮短紅細胞間距，在離心力作用下，紅細胞會形成可逆性、非特異性聚集，讓IgG 抗體直接凝集紅細胞。然后加入具有負電荷的重懸液，僅由多胺引起的非特異性聚集會被電荷中和分散，若由抗體介導的特異性聚集則無法分散，進而能快速準確的檢測紅細胞IgG 型抗體和相關抗原[15]。微柱凝膠法將微柱凝膠技術和免疫血清學進行了有效的融合，是一種新型的免疫檢測方法，近年來在臨床上的應用逐漸增加。它主要利用了生物化學凝膠過濾技術和離心技術，將游離和凝聚的紅細胞進行分離，將凝膠和IgM 抗體或其他抗體置入微柱中離心，抗原抗體反應形成的凝集塊經離心后無法通過凝膠間隙，使其留在凝膠上層，呈現陽性反應；未凝集的紅細胞離心后能夠通過凝膠間隙，聚集在凝膠管底部，呈現陰性反應。對比其他的檢查方法來說，微柱凝膠法靈敏度比凝聚胺法和抗球蛋白酶法都要高。部分檢查方法對弱抗體檢出率較低，容易造成漏檢，也無法較為全面的檢驗出所有血型系統的抗體，鹽水介質法甚至只能檢測IgM 抗體，微柱凝膠法則能夠同時檢測出IgM 和IgG 抗體，特異性比較高，避免不規則抗體而引發不良輸血反應。它能夠清晰地觀察到微弱的抗原抗體反應，其他檢查方法則可能需要運用專業的顯微鏡才能查看到，更好地保證了輸血治療的安全性。本研究對在我院接受輸血治療的240 例患者同時進行聚凝胺法和微柱凝膠法交叉配血試驗，結果顯示聚凝胺法檢驗時間明顯短于微柱凝膠法，將譜細胞鑒定結果作為金標準，微柱凝膠法檢出陽性不合格率高于聚凝胺法。聚凝胺法操作步驟比較少，操作方法也比較簡單，檢查所需的時間比較短，最快能在3～5 min 觀察結果，非常適用于急診患者的輸血前檢查。聚凝胺法能直接在室溫中進行操作和檢驗，對場地條件要求不高，成本比較低。但是它無法準確地體現出IgG 抗體的效價，不能檢出兩抗原結合位點結合在同一紅細胞上的IgG 分子。一些減弱的抗體反應可能需要在顯微鏡的觀察下才能看到，有的甚至無法檢出，容易造成假陰性反應。微柱凝膠法可利用儀器實現半自動化操作，減少了人為因素對檢查結果的影響，能夠更加清晰明了的觀察到陽性反應。它可以檢查出全部的IgG 抗體和絕大部分IgM 抗體，檢驗的準確率較高。但是微柱凝膠法使抗體抗原反應的靈敏度大大提高，導致測得的效價要高于實際效價，且其所用的檢查時間較長，成本也比較高。結果還顯示配血不合的原因主要有血液疾病、免疫性或溶血性貧血、腎病和輸血妊娠史血。

綜上所述，聚凝胺法的檢查時間較快，微柱凝膠法的準確率較高，兩種方法各有其優缺點，在輸血檢驗中根據實際情況結合使用能夠提高輸血治療的安全性。