天山堇菜花舔膏提取工藝及質量標準研究

黃麗淑 吾買爾江?伊迪熱斯 阿依努爾?吾布力卡斯木 艾克熱木江?托合提蓀 阿卜杜熱西提?麥麥提敏 艾力江?買買提 白克爾?麥麥提尼亞孜古再麗努爾?如則托合提 阿卜力克木?奧布力

【摘 要】 目的：優化天山堇菜花舔膏的提取工藝，建立薄層色譜鑒定方法，為其質量標準研究提供實驗室資料。方法：以浸膏得率為主要評價指標，使用單因素考察法和正交實驗來選擇最佳提取工藝。采用薄層色譜法（TLC）對天山堇菜花舔膏中的天山堇菜花、阿勃勒、新疆圓棗、破布木果等藥材進行定性鑒別。結果：天山堇菜花舔膏最佳提取條件為，采用加熱回流提取法，溶媒量第一次12倍，第二次10倍，提取時間1h，提取次數2次。結論：所建立的TLC鑒別方法簡便，快速，斑點分離度良好，符合藥品質量標準要求，可用于天山堇菜花舔膏的質量標準體系。

【關鍵詞】 天山堇菜花舔膏；提取工藝； 薄層色譜（TLC）

【中圖分類號】R29?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2024）02-0057-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.02.zgmzmjyyzz202402012

Study on Extraction Technology and Quality Standard of Loki Benafxa

HUANG Lishu Omarjan Idris Aynur Ubulkasim Akramjan Tohtitursun Abdurxit Mamitimin Alijan Mamat

Baker Matniyaz Guzalnur Ruztohti A Bu Li Ke Mu Ao Bu Li*

The Hospital of Traditional Uyghur Medicine in Hotan，Hotan 848000，China

Abstract：Objective Optimize the extraction technology of Loki Benafxa，establish a thin-layer chromatography （TLC） identification method，and provide a laboratory data for its quality standard research.Methods The single factor and orthogonal test were used to optimize the extraction process as the extraction rate was the main index.Qualitative identification of the medicinal materials including Viola tianshanica Maxim.，Cassia fistula L.and Ziziphus jujuba Mill.Var.spinosa （Bunge） Hu ex H.F.Chou was carried out by TLC.Results The optimum extractionconditions were determined to be： extraction times 2 times，menstruum dosage was 12 and 10 times respectively for the first and second time，andextraction time 1 hour under reflux.Conclusion The results showed that the established TLC method is simple and rapid with good separation efficiency，and fulfills the demands of the drug quality standards.It could be used for the establishment of a quality standard system for the Loki Benafxa.

Keywords：Loki Benafxa;Orthogonal Experiment;Thin-Layer Chromatography （TLC）

天山堇菜花舔膏出自維吾爾醫藥學古籍《卡拉巴丁卡迪日》［1］，維吾爾語中稱“羅歐克比乃非謝”，又名清肺止咳舔膏。由天山堇菜花、阿勃勒、破布木果等五味藥組成，其主要適用于降低異常膽液質刺激性，調節血液質，消炎，化痰，鎮咳。用于治療慢性支氣管炎等病癥［2］。在臨床上主要以單人單方形式制備使用，但原先制備工藝中存在制備條件模糊，無參數標準，制備過程完全靠制備者經驗，沒有現代化質量標準等一系列問題。

因此，本文將以浸膏得率為主要評價指標，通過單因素和正交試驗對天山堇菜花舔膏的提取工藝進行優化［3］。為確保制劑的安全性與有效性，本文采用薄層色譜法（TLC）［4-5］，對天山堇菜花舔膏中的天山堇菜花、阿勃勒、新疆圓棗等藥材進行定性鑒別，為其質量標準研究提供初步的實驗室研究資料。

1 儀器與藥材

1.1 儀器 JX5001電子天平（上海浦春計量儀器有限公司）；101型電熱鼓風干燥箱（北京科委永興儀器有限公司）；TH-Ⅱ型薄層加熱器（上?？普苌萍加邢薰荆?；EV342旋轉蒸發儀（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）；VP50真空抽濾泵（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）；HB-05加熱鍋（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）；硅膠Ｇ薄層板（青島海洋化工有限公司，規格：10 cm×10 cm，批號：20220207）；硅膠H薄層板（青島海洋化工有限公司，規格：10 cm×10 cm，批號：20210203）。

1.2 藥材 天山堇菜花（批號：H30297102，新疆麥迪森藥業有限公司），阿勃勒（批號：M30173824，新疆麥迪森藥業有限公司），破布木果（批號：M30138203，新疆麥迪森藥業有限公司）和綠葡萄干（批號：M30266103，新疆麥迪森藥業有限公司），新疆圓棗（批號：KXKFZ-YP-210818，新疆新綠寶藥業有限公司）。大黃酸對照品（批號：D-202001043，中國食品藥品檢定研究院）。

2 提取方法與結果

2.1 方法 天山堇菜花、阿勃勒、新疆圓棗和綠葡萄干等藥材置圓底燒瓶，以溶媒量、提取時間、提取次數為主要因素，用單因素考察法和正交實驗篩選最佳提取工藝。

2.2 正交實驗優選提取工藝 在單因素條件的基礎上，為了篩選更優選的提取條件，選取溶媒量（A）、提取時間（B）和提取次數（C）三個因素，每個因素3個水品，按照L9（34）正交表實驗設計，以浸膏得率為評價指標進行實驗。正交試驗因素與水平設計見表1，正交試驗結果與方差分析結果見表2及表3。

由直觀分析結果可知，各因素對試驗結果的影響程度為C（提取次數）>A（溶媒量）>B（提取時間），以提取次數影響最大，提取時間的影響最小，各因素的最佳水平為A3B3C3。以提取時間為誤差項，對其余三因素進行方差分析。由方差分析結果得出：A、B和C因素對提取效果均無顯著性影響（P＞0.05）。根據單因素與正交試驗結果以及經濟性綜合考慮，天山堇菜花舔膏最佳提取選擇溶媒量第一次12倍，第二次10倍，提取時間1 h，提取次數2次。

2.3 驗證實驗 按單因素實驗和正交實驗篩選出的最佳提取工藝，制備3批樣品，測定浸膏得率。結果表明單因素實驗和正交實驗優選結果可靠，提取后的浸膏得率相對穩定。結果如表4所示。

3 TLC鑒別方法與結果

3.1 天山堇菜花薄層色譜鑒別 取樣品50 g，用正丁醇萃取兩次，每次30 mL，取正丁醇層，合并，減壓蒸干，加20 mL無水乙醇超聲溶解，過濾，濾液蒸干，加5 mL甲醇溶解，用0.45 μL微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。按照上述方法準備天山堇菜花陰性對照溶液。取天山堇菜花對照藥材（自身對照）5 g，搗碎，加20倍水，回流提取2 h，過濾，濾液蒸干，加30 mL甲醇，超聲溶解，過濾，濾液濃縮至2 mL，作為對照藥材溶液。照《中國藥典》 （2020年版）［5］薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點在統一硅膠G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶4.5∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱數分鐘，置自然光和紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，無陰性干擾。結果如圖1、圖2所示。

3.2 阿勃勒薄層色譜鑒別 取樣品50 g，用正丁醇萃取兩次，每次30 mL，取正丁醇層，合并，減壓蒸干，加20 mL無水乙醇超聲溶解，過濾，濾液蒸干，加5 mL甲醇溶解，用0.45 μL微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。按照上述方法準備阿勃勒陰性對照溶液。取阿勃勒對照藥材5 g，搗碎，加5倍開水，浸泡4 h，過濾，濾液減壓蒸干，加30 mL甲醇，超聲溶解，過濾，濃縮至5 mL，作為對照藥材溶液。取大黃酸對照品配置成1 mg/mL溶液，作為對照品溶液。按照《中國藥典》 （2020年版）［5］薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取大黃酸對照品溶液和阿勃勒對照藥材溶液5 μL，陰性對照溶液和供試品溶液10 μL，點在分別點在統一硅膠G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（6∶3∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱數分鐘，置紫外光燈（365 nm）和自然光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的橙黃色熒光斑點。結果如圖3、圖4所示。

3.3 新疆圓棗的薄層鑒別 取樣品10 g，加50 mL石油醚（60～90 ℃）超聲40 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加2 mL甲醇溶解，作為供試品溶液。另取新疆圓棗陰性對照樣品和新疆圓棗藥材，按上述方法配置成新疆圓棗陰性對照溶液和對照藥材容溶液。按照《中國藥典》 （2020年版）［5］薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取對照藥材溶液10 μL，陰性對照溶液和供試品溶液12 μL，點在分別點在統一硅膠H板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（12∶5∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱數分鐘，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，無陰性干擾。結果如圖5所示。

3.4 破布木果的薄層鑒別 取樣品50 g，用正丁醇萃取兩次，每次30 mL，取正丁醇層，合并，減壓蒸干，加20 mL無水乙醇超聲溶解，過濾，濾液蒸干，加5 mL甲醇溶解，用0.45 μL微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。取破布木果對照藥材（自身對照）5 g，搗碎，加20倍水，回流提取2 h，過濾，濾液蒸干，加30 mL甲醇，超聲溶解，過濾，濾液濃縮至2 mL，作為對照藥材溶液。照《中國藥典》 （2020年版）［5］薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點在統一硅膠GF254板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸-乙酸（5∶3∶0.2∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同斑點，無陰性干擾。結果如圖6所示。

4 討論

研究通過單因素考察法和正交實驗探究了天山堇菜花舔膏的最佳提取工藝，并建立了薄層色譜鑒定方法。在單因素考察法中，發現加熱回流提取法和不同溶媒量、提取時間、提取次數等因素對于提取率有著顯著的影響。而正交試驗結果顯示無顯著性差異。為此，以單因素結果為準，結合藥物生產過程中的經濟性，確定最佳提取條件。

此外，研究還建立了薄層色譜鑒定方法，通過對天山堇菜花舔膏中的藥材進行定性鑒別［6-9］，可以快速而準確地確認制劑中天山堇菜花、阿勃勒、新疆圓棗、破布木果等藥材的存在［10-12］，這對于天山堇菜花舔膏的質量控制具有重要意義。

因本方采用加熱回流提取法制備，制劑中水溶性成分較多，且在舔膏劑中含大量蔗糖，從而提高了供試品的前處理難度。為了除去樣品中的蔗糖，本試驗采用有機溶劑分層法，多次沉淀、干燥、再溶等手段達到除去供試品中蔗糖等雜質的目的。

新疆圓棗（Ziziphus jujuba Mill. Var. spinosa （Bunge） Hu ex H. F.Chou）富含白樺脂酸和熊果酸，可作為藥材質量標準研究的特征性化合物［13-14］，研究過程中用白樺脂酸和熊果酸作為對照化合物，嘗試建立新疆圓棗的薄層鑒定方法，但在供試品溶液中沒有發現相應的斑點，原因可能是天山堇菜花舔膏基于水煎液濃縮制成，而白樺脂酸和熊果酸不溶于水或微溶于水［15-16］，其在供試品溶液中的量很少，不能顯現在薄層色譜上。因此，采用自身對照藥材來開展制劑的相關薄層研究。

研究［17-18］表明破布木果富含迷迭香酸。以迷迭香酸為標準化合物，嘗試建立天山堇菜花舔膏中破布木果藥材的薄層鑒定方法，但陰性干擾嚴重。原因可能是制劑中其它藥材也含有迷迭香酸，不能作為破布木果藥材的專屬化學成分，同樣采取藥材自身對照法來建立破布木果藥材薄層鑒別方法。

天山堇菜花舔膏在中醫（維吾爾醫）長期治病過程中，廣泛用于治療各種急、慢性支氣管炎、不明原因的發熱以及各種原因導致的咳嗽等疾病。其治療效果較好，廣受患者青睞。但是，其沒有進行過系統的現代藥學研究，缺乏工藝和質量標準等方面的研究資料等原因沒能批量生產，無法滿足臨床需求量。本研究能夠滿足天山堇菜花舔膏在后期生產的工藝參數要求，所建立的薄層鑒定方法可以作為該制劑質量標準體系的一部分，能夠為該制劑后期的院內制劑研發以及新藥開發提供基礎研究資料。

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（收稿日期：2023-04-24 編輯：徐雯）