急性心肌梗死病人PCI術后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相對表達水平及其與主要不良心血管事件發生的關系

王玉婷 丁文滔 華曉芳

摘要 目的：分析急性心肌梗死（AMI）病人行經皮冠狀動脈介入（PCI）術后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相對表達水平及其與主要不良心血管事件（MACE）發生的關系。方法：選取2018年1月—2021年1月我院收治的150例因患AMI進行PCI術的病人，同時選取同期100名健康體檢者為對照組。采用熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）檢測血清miR-135b-3p、miR-375-3p表達水平；采用Pearson法分析血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及其與臨床資料的相關性；受試者工作特征（ROC）曲線評價血清miR-135b-3p、miR-375-3p對AMI病人PCI后發生MACE的預測價值。結果：相較于對照組，試驗組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平顯著升高（P＜0.05）。與非MACE組相比，MACE組C反應蛋白（CRP）、白細胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、miR-135b-3p、miR-375-3p水平顯著上升（P＜0.05）。AMI病人血清miR-135b-3p與miR-375-3p、CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相關（P＜0.05）；血清miR-375-3p與CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相關（P＜0.05）。ROC結果顯示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及二者聯合預測AMI病人PCI術后發生MACE的ROC曲線下面積（AUC）分別為0.78，0.756，0.869，其中聯合預測AUC顯著高于二者單獨預測（P＜0.05）。結論：AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平升高，且PCI術后發生MACE病人miR-135b-3p、miR-375-3p水平高于非MACE病人，可能成為AMI病人PCI術后發生MACE的預測因子。

關鍵詞 急性心肌梗死；miR-135b-3p；miR-375-3p；經皮冠狀動脈介入；預測價值

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.05.018

作者單位 恩施土家族苗族自治州中心醫院（湖北恩施? 445000）

通訊作者 華曉芳，E-mail：37629106@qq.com

引用信息 王玉婷，丁文滔，華曉芳.急性心肌梗死病人PCI術后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相對表達水平及其與主要不良心血管事件發生的關系［J］.中西醫結合心腦血管病雜志，2024，22（5）：868-872.

急性心肌梗死（AMI）是常見的心血管疾病，發病率和死亡率較高，給社會和家庭造成巨大的經濟負擔［1］。AMI是因缺氧損害心肌細胞引起的，分為ST段抬高型心肌梗死（STEMI）和非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）兩種類型［2］。目前，臨床首選經皮冠狀動脈介入（PCI）對AMI病人進行治療，雖可降低病人死亡率，但因AMI病人PCI術后易發生各種心血管疾病事件，嚴重影響預后［3］。因此，尋找與AMI關系密切的生物標志物用于臨床對AMI的識別與研究，改善AMI預后，對提高病人生存率具有重要的意義。microRNA（miRNA）是由18～25個核苷酸組成的非編碼RNA（ncRNA），在細胞增殖、分化、凋亡、免疫和血管生成等各種生物學過程中發揮著重要作用［4］。有研

究顯示，miRNA在維持正常的心臟發育和心血管疾病的發病機制方面發揮著關鍵作用［5］。有研究顯示，通過調節miRNA-223-3p下調原發性新生大鼠心肌細胞中磷酸化蛋白激酶B（AKT）表達，可減輕心肌損傷［6］。因此，猜測miR-135b-3p、miR-375-3p可能與AMI有關。本探究旨在檢測AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p表達水平，探討二者聯合檢測對AMI病人PCI術后的預后價值，旨在為臨床AMI的防治和改善預后提供新的研究方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月—2021年1月我院收治的因患AMI進行PCI術的150例病人作為試驗組。納入標準：確診為AMI［7］；心肌酶及肌鈣蛋白超過正常范圍，且動態演變；心電圖有動態演變；胸痛持續時間較長。排除標準：合并腦血管疾??；合并外周血管疾??；合并惡性腫瘤、肝、腎功能不全；合并血液系統疾病、自身免疫性疾??；合并嚴重感染性疾病。選取同期健康體檢者100名為對照組。兩組一般資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。詳見表1。本研究經過醫院倫理委員會批準，所有研究對象均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）測定血清miR-135b-3p、miR-375-3p表達水平

抽取研究對象體檢清晨空腹靜脈血5 mL，血清保存于－80 ℃待測。使用RNeasy Mini Kit（QIAGEN，Hilden，德國）純化血清總RNA，并用PrimeScript RT-PCR試劑盒反向轉錄。計算A260/A280比率評估RNA質量和純度。在推薦的熱循環設置下，使用RotorGene 6000系統（Corbett Life Science，德國QIAGEN）上使用SensiFASTTMSYBRNo-ROX試劑盒（Bioline）進行qPCR。以U6為內參?；蛳嚓P序列見表2。反應結束后采用2－△△Ct法計算miR-135b-3p、miR-375-3p mRNA相對表達量。

1.2.2 觀察指標

記錄病人年齡、性別、吸煙史、體質指數、收縮壓、舒張壓、高血壓、高脂血癥、糖尿病、心功能Killip分級［8］等。采用邁瑞BC-6800血液分析儀進行血常規檢測，包括：術前血糖、平均血小板體積（MPV）、血小板計數（PLT）、C反應蛋白（CRP）；采用酶聯免疫吸附法（ELISA）試劑盒（萊爾生物技術有限公司）檢測血清中白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）；采用全自動生化分析儀（AU5400，日本）檢測三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白。

1.3 研究方法

1）比較試驗組與對照組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平；2）比較預后良好組與預后不良組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平；3）比較預后良好組與預后不良組臨床特征，分析AMI病人PCI術后預后的影響因素。

1.4 隨訪

對PCI術后試驗組病人進行1年隨訪，所有病人均無失訪。隨訪方式：門診就診、電話；隨訪內容：觀察病人PCI術后主要不良心血管事件（MACE，包括心絞痛、心力衰竭、心律失常、再梗死、心源性死亡等）發生情況，將發生MACE的病人設為MACE組，未發生MACE的病人設為非MACE組。

1.5 統計學處理

采用SPSS 25.0軟件進行數據分析。符合正態分布的定量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；定性資料以例數、百分比（%）表示，采用χ2檢驗。受試者工作特征（ROC）曲線評價血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平對AMI病人PCI后發生MACE的預測價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 對照組與試驗組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平比較

相較于對照組，試驗組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平顯著升高（P＜0.001）。詳見表3。

2.2 不同預后組臨床資料比較

與非MACE組相比，MACE組CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、miR-135b-3p、miR-375-3p水平升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳見表4。

2.3 miR-135b-3p、miR-375-3p水平與臨床檢測指標的相關性

AMI病人血清miR-135b-3p與miR-375-3p、CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相關（r值分別為0.625，0.616，0.594，0.553，0.539，0.641，P＜0.05）；血清miR-375-3p與CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相關（r值分別為0.585，0.633，0.596，0.574，0.608，P＜0.05）。

2.4 血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平對AMI病人PCI術后MACE發生的預測價值

以AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平為檢驗變量，以AMI病人PCI術后是否發生MACE（否＝0，是＝1）為因變量，繪制ROC曲線。結果顯示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及二者聯合預測AMI病人PCI術后發生MACE的ROC曲線下面積（AUC）分別為0.784，0.756，0.869，其中聯合預測AUC高于二者單獨預測AUC（Z值分別為4.940，4.446，P＜0.05）。詳見圖1、表5。

3 討 論

隨著社會經濟的快速發展和生活方式的改變，心血管疾病已成為全球人類的主要死因，約占我國總死亡人數的40%［9］。數據顯示，2016年我國約397萬例病人死于心血管疾病，較1990年增加了146萬例［10］。冠心病是指冠狀動脈粥樣硬化，導致血管管腔變窄甚至阻塞，AMI是冠心病的嚴重類型，是由冠狀動脈急性持續缺血和缺氧引起的心肌壞死，臨床表現為心力衰竭、惡性心律失常和心源性休克等，具有起病快、死亡率高的特點［9］。PCI可迅速恢復血流，開通阻塞的冠狀動脈血管，緩解缺血缺氧癥狀，挽救病人生命，是臨床治療AMI的主要方法［11-12］。然而，經PCI治療的AMI病人支架內再狹窄、血栓形成和術后并發癥概率較高，嚴重影響病人預后。因此，尋求與AMI關系密切，并對其預后有預測價值的生物標志物成為研究熱點。

miRNA是內源性短（20～22個核苷酸）、非編碼RNA，已證實參與多種細胞過程，包括癌癥、心血管疾病和炎癥性疾病，其在心肌損傷期間上調或下調，顯示出其作為AMI和缺血再灌注損傷（I/R）生物標志物的潛力［13-14］。有研究顯示，I/R與AMI的發生、發展有關，導致大量亞鐵離子（Fe2＋）流入和活性氧產生，是細胞損傷、發病的主要機制［15］。大鼠實驗中發現，miR-135b-3p在心肌I/R大鼠心肌組織和缺氧/復氧（H/R）心肌細胞中上調，通過抑制谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）表達，促進鐵死亡，加重細胞損傷，靶向miR-135b-3p可能是心肌I/R損傷的潛在治療方法［16］。本研究結果表明，與對照組相比，試驗組miR-135b-3p水平顯著上升，提示高水平miR-135b-3p促進AMI發展；進一步研究發現，MACE組血清miR-135b-3p表達水平顯著高于非MACE組，其預測AMI病人PCI術后發生MACE的AUC為0.784，提示血清miR-135b-3p與AMI病人PCI術后預后關系密切，對AMI病人PCI術后MACE的發生具有一定的預測價值。Garikipati等［17］研究顯示，miR-375水平升高與心肌梗死的嚙齒動物及心力衰竭病人有關，抗miR-375療法靶向少數由磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-1（PDK-1）/AKT信號傳導機制介導的多種細胞類型，減輕炎癥反應，減少心肌細胞死亡，改善左心室功能并增強血管生成。Zhuang等［18］研究顯示，在I/R大鼠模型和繼發性心肌纖維化（CF）細胞模型中，高表達miR-375-3p通過介導GPX4加速心肌細胞鐵死亡，從而促進心肌纖維化，miR-375-3p是預防和治療CF的新型潛在生物標志物。本研究結果顯示，試驗組miR-375-3p水平顯著高于對照組，且MACE組AMI病人血清miR-375-3p水平顯著高于非MACE組，提示miR-375-3p參與AMI的發生、發展。miR-375-3p預測AMI病人PCI術后發生MACE的AUC為0.756；進一步ROC分析顯示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平聯合預測AMI病人PCI術后發生MACE的AUC及敏感度較高，可能為預測AMI病人PCI術后發生MACE提供參考。

AMI的發展加劇炎癥反應，有研究顯示，AMI無回流現象病人血液超敏C反應蛋白顯著升高［19］。在AMI小鼠中，AMI誘導炎性細胞因子產生，引起IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高［20］。Kristono等［21］研究顯示，IL-6、IL-8在AMI病人中表達上調，可獨立預測不良心血管事件。本研究結果顯示，MACE組血清CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平顯著高于非MACE組，可參與AMI病人預后；進一步研究發現，miR-135b-3p與miR-375-3p具有相關性，且與CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平呈正相關?？赡芡ㄟ^miR-135b-3p與miR-375-3p共同作用，增強病人機體炎癥反應，進一步使CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α表達水平升高，具體機制仍需進一步研究。

綜上所述，AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p表達升高，促進AMI進程，增加病人機體炎癥反應，進一步提高CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α表達水平。二者可能成為AMI病人PCI術后MACE發生的預測因子。本研究未分析miR-135b-3p、miR-375-3p與AMI病人PCI術后發生心血管不良事件的具體作用機制，今后需進一步深入研究。

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（收稿日期：2023-03-14）

（本文編輯薛妮）