血常規指標在母犬妊娠診斷中的臨床應用價值

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摘要：為了研究妊娠母犬和空懷母犬的血常規，采用血細胞計數法測定了20只妊娠母犬及20只空懷母犬血液中紅細胞、白細胞、血小板的數量，并進行了鑒別。結果表明：妊娠母犬血液中紅細胞、血小板的數量顯著低于空懷母犬，白細胞數量極顯著高于空懷母犬。經過臨床應用測試，證實試驗結論可作為母犬妊娠早期診斷的重要參考指標并可應用于臨床。

關鍵詞：母犬；妊娠診斷；血常規；臨床應用

中圖分類號： S858.292.72文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2015）01-0206-03

收稿日期：2014-03-04

基金項目：河南省商丘市科技計劃（編號：20112027）。

作者簡介：郭全海（1980—），男，河南淮陽人，碩士研究生，講師，主要從事分子生物學、免疫學及動物疫病防治等方面的研究。E-mail：guohan611@163.com。犬一直被人們視為最忠實的朋友，可用來陪護老人、緩解工作壓力、培養兒童的愛心和增進少兒的動物保護意識等。隨著我國社會經濟的發展和人民生活水平的不斷提高，將犬作為生活的樂趣和親密的生活伴侶越來越普遍。近幾年來人們對寵物的喜好與養殖需求急劇增加，尤其是一些珍貴的犬種具有很好的市場前景，因此寵物犬的繁殖成為了人們高度關注的問題，而母犬妊娠情況的判斷是這一環節的核心問題。血常規指標變化用于妊娠判定在人、牛、豬等方面的研究已有不少報道，但用于母犬的妊娠判定尚未見報道。本試驗通過對妊娠早期母犬血液中紅細胞、白細胞及血小板數量的檢測，探討血常規指標變化在母犬早期妊娠診斷中的價值，以期為臨床母犬的早期妊娠診斷提供更為便捷、準確有效的方法。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1主要儀器及設備 4 ℃冰箱，上海西門子中外合資有限公司；生物顯微鏡，江南顯微鏡廠；電烘箱，成都電熱儀器廠；萬分之一電子分析天平，瑞士Mettler；Millipor純水系統，美國Millipor；改良紐巴氏計數板，上海醫用儀器廠；手動計數器，上海醫用儀器廠；血紅蛋白吸管，江蘇醫用器材廠。

1.1.2主要藥品及試劑 氯化鈉（化學純，重慶北碚化學試劑廠），氯化汞（化學純，天津化學試劑廠），結晶硫酸鈉（化學純，成都化學試劑廠），石碳酸（化學純，天津化學試劑廠），冰乙酸（分析純，重慶川東化學試劑廠），草酸銨（化學純，重慶北碚化學試劑廠）。

紅細胞稀釋液（姬姆氏液）的制備：取1.0 g氯化鈉，0.5 g氯化汞，5 g結晶硫酸鈉，200 mL蒸餾水，并加入數滴碳酸品紅溶液，混合溶解即可。

白細胞稀釋液的制備：精確量取1 mL冰乙酸，置于 100 mL 容量瓶內，用蒸餾水稀釋并定容。

血小板稀釋液的制備：精確稱取1 g草酸銨，用蒸餾水溶解，并用100 mL容量瓶定容。

1.1.3血樣的采取選擇商丘藏獒繁殖基地、商丘職業技術學院動物醫院、商丘市復康寵物醫院3個地方的犬作為采血對象，用臨床診斷、B超觀察的方法判斷母犬是否妊娠。采用頸靜脈采血法分別采集5 mL妊娠及未妊娠母犬全血，各采血樣20份，分別置于潔凈瓶內，于4 ℃保存備用。

1.2試驗方法

1.2.1紅細胞計數參照相關文獻[1]，具體如下。紅細胞計數原理：以適當的紅血球（red blood cell，RBC）稀釋液將血樣進行200倍稀釋，在特制的改良紐巴氏計數板上進行紅細胞計數，并換算成為 1 mm3 的含量。

紅細胞測定方法：用2 mL吸管準確取2 mL紅細胞稀釋液于紅細胞稀釋管中，用Hb吸管準確吸取10 μL血樣，擦凈吸管周圍血液后插入試管底部，輕輕壓出血液于稀釋液中，再用上清液洗滌吸管數次，充分混合備用。用小玻棒取1滴稀釋后的血樣，置于計數板與蓋玻片交界處，讓其自然浸入，使稀釋血樣擴散于計數室內，靜置2～3 min后用顯微鏡檢測。

計數時用低倍鏡，計數中央大方格中4角和中央1個中方格（共5個中方格）、80個小方格中的紅細胞數。為避免重復和遺漏，計數時應按一定順序進行，壓在雙線上的細胞計算在內，計數時應按“數左不數右，數上不數下”的原則，切不可重復計數。將計數的結果代入下列公式，得出1 mm3紅細胞的數量：1 mm3血液內紅細胞總數=A×10 000。式中：A為5個中方格中紅細胞總數，個。

1.2.2白細胞計數參照相關文獻[2]，具體如下。白細胞測定原理：用冰乙酸破壞紅細胞，用血細胞計數板計數1 mm3內的白細胞總數。白細胞計數方法：用1 mL吸管取0.4 mL白細胞稀釋液于康氏試管中，再用Hb吸管吸20 μL血樣，用潔凈紗布擦去吸管周圍附著的血液，然后插入小試管底部，輕輕壓出血液后用上清液洗滌吸管數次，充分混勻備用。用小玻棒取1滴稀釋后的血樣，置于計數板與蓋玻片交界處，讓其自然浸入，使稀釋血樣擴散于計數室內，靜置2～3 min后用顯微鏡檢測。白細胞計數方法與紅細胞計數方法相同，按4角大方格中的白細胞數量計數，并將計數結果代入下列公式，得出 1 mm3 血液內白細胞總數：1 mm3血液內白細胞總數=B×50。式中：B為4角大方格中白細胞總數，個。

1.2.3血小板計數參照文獻[3]進行，具體如下：血小板計數原理：將血液稀釋后在計數室內計數，按紅細胞計數的方法，數5個中方格的血小板總數乘以10 000，即換算出被檢出的血小板絕對值；血小板計數方法：用2 mL吸管吸取2 mL 1%草酸銨溶液于試管中，再用Hb吸管精確吸取10 μL血樣，并將其吹入試管中，輕輕搖勻，用小玻棒取1滴充入計數室內，靜置15 min；按紅細胞計數法計數，血小板在鏡中呈橢圓形或不規則的折光小體。將計數結果代入下列公式，得出1mL血樣中血小板的數量：血小板值=N×10 000。式中：N為5個中方格中血小板總數，個。

1.2.4數據處理 將所得的數據經SPSS統計分析軟件處理，用“平均值±標準差（x±s）”表示各試驗組和對照組的平均值和標準差，并用非配對t檢驗法，比較各試驗組和對照組的平均值之間的差異。

1.3臨床應用

利用本試驗的數據結果，在商丘市商丘職業技術學院動物醫院等5家寵物醫院進行妊娠犬的前期懷孕判斷，利用本試驗的檢測原理和結果進行判斷，共隨機測試了18只配種后早期和中期的母犬。利用B超測試這些母犬配種后的懷孕情況，并對2種檢測結論進行比對。

2結果與分析

2.1妊娠母犬與未妊娠母犬血液中紅細胞數量變化

調查的40只母犬中，血液檢測未妊娠母犬（20只）紅細胞的數量為（817.00±144.90）萬個/mm3，妊娠母犬（20只）血液中紅細胞的數量為（678.06±172.53）萬個/mm3。結果表明，妊娠母犬血液中的紅細胞數量顯著低于未妊娠母犬（P<0.05）。妊娠犬、未妊娠犬紅細胞數量的變化范圍分別為340萬～1 017萬個/mm3、540萬～1 112萬個/mm3，妊娠犬紅細胞數量變化范圍明顯有別于未妊娠犬（表1）。從測定的變異系數看，妊娠犬紅細胞數量變異系數明顯高于未妊娠犬，造成這種現象的原因可能與妊娠犬的種類不同、妊娠犬體內胎兒大小差異等有關。

2.2妊娠母犬與未妊娠母犬血液中白細胞數量變化

經測定，20只未妊娠母犬血液中的白細胞數量為（6 710.00±681.72）萬個/mm3，而20只妊娠母犬血液中的白細胞數量則為（15 299.42±2 629.75）萬個/mm3。經t檢驗，妊娠母犬血液中的白細胞數量極顯著高于未妊娠母犬（P<001）。所測定的妊娠、未妊娠犬血液中白細胞數量變化范圍分別為5 150～20 450、5 369～8 035個/mm3，妊娠犬白細胞數量變化范圍明顯不同于未妊娠母犬。從測定的變異系數看，妊娠犬白細胞數量變異系數明顯高于未妊娠犬（表1）。

2.3妊娠母犬與未妊娠母犬血液中血小板數量變化

血樣經血小板稀釋液稀釋后，在計數室內計數測定，20只未妊娠母犬血液中血小板的數量為（23.56±3.45）萬個/mm3，而20只妊娠母犬血液中血小板的數量則為（18.30±4.09）萬個/mm3。經t檢驗，妊娠母犬血液中的血小板數量顯著低于未妊娠母犬（P<0.05）。由表1可以看出，所測定的妊娠、未妊娠犬血液中血小板數量變化范圍分別為10萬～27萬個/mm3、17萬～31萬個/mm3，妊娠犬血小板數量變化范圍明顯有別于未妊娠母犬。從測定的變異系數看，妊娠犬血小板數量變異系數明顯高于未妊娠犬（表1）。表1妊娠母犬與未妊娠母犬血液中的紅細胞、白細胞、血小板數量

2.4臨床應用結果

在母犬妊娠后的不同時間，利用本試驗血常規和B超2種診斷方法進行妊娠檢測（表2）。

表2母犬配種后13、32 d血常規和B超診斷妊娠結果

檢測方法測試犬數

（只）陽性數

（只）實際陽性數

（只）準確率

（%）血常規檢測1816/1417/1794.1/82.4B超檢測180/1717/170/100.0注：“/”前后分別為母犬配種后13、32 d的檢測結果。

臨床試驗結果表明，利用血常規在母狗妊娠早期進行妊娠診斷，具有較高的準確率，而B超不能在早期檢測；而在母犬懷孕的中后期利用B超可以方便地測出母犬懷孕情況，利用血常規檢測方法雖能較準確地測出結果，但操作相對繁瑣。

3討論與結論

妊娠是一個復雜的生理過程，妊娠期母體各器官要發生一系列變化，以適應胎兒發育成長需要。卵子與精子在輸卵管壺腹部結合成為受精卵，然后侵入宮腔，經過一系列的生理反應，最后完成孕卵“著床”。孕卵著床后逐漸發育成胚胎及與母體建立聯系的附屬物（胎盤、胎膜、臍帶及羊水等）。胚胎進一步發育成胎兒，胎兒發育成熟后娩出，整個妊娠過程終結[4]。

母犬整個妊娠期約58～64 d[5]。妊娠期中1～30 d為妊娠前期，這期間受精卵完成著床、胚胎的發育，其中1～15 d為妊娠的早期。妊娠期中的30～45 d、45～60 d分別為妊娠的中期、后期，主要完成胎兒的發育、成熟等過程。養犬生產中，妊娠母犬的早期診斷往往要求在妊娠30 d或之前進行，30 d 以后對妊娠母犬的檢查多用于胎兒發育情況、胎位等情況的監測，這期間還可用X線透視或攝影等方法診斷胎兒的個數、大小等。

性激素影響紅細胞的生成，其中睪酮可促進紅細胞生成素的生成，而雌激素則抑制其生成。母犬妊娠期間，體內增加的雌激素會抑制紅細胞生成素的形成，影響妊娠母犬機體紅細胞的生產[6-8]。另一方面，母犬妊娠期間，母體代謝活動的增強，對紅細胞的衰老有促進作用。這兩方面因素的作用，造成了母犬妊娠機體紅細胞數量偏低。試驗結果表明，所調查的母犬中，未妊娠母犬血液中紅細胞的數量為（817±14490）萬個/mm3，而妊娠母犬血液中紅細胞的數量僅為（678.06±172.53）萬個/mm3，妊娠母犬血液中的紅細胞數量顯著低于未妊娠母犬（P<0.05）。張秀玲等對妊娠婦女血液中紅細胞進行了測定，結果均顯著低于非妊娠婦女血液中紅細胞數值[9]。劉續春對1 328例妊娠婦女血液中血紅蛋白進行了分析，表明產前孕婦血紅蛋白含量明顯低于正常人[10]。本試驗研究結果與上述報道相符，從妊娠診斷的角度，妊娠母犬血液中紅細胞的數量降低，可以作為健康母犬妊娠與否的早期診斷指標之一。

白細胞在動物機體免疫保護中起著重要的作用。如淋巴細胞是免疫細胞，主要發揮體液免疫和細胞免疫作用，對病源微生物有殺滅作用[11]。臨床中白細胞總數增多，一般與機體感染性疾病有關。

關于妊娠是否會引起婦女或母畜容易發生感染性疾病的報道還很少，但卻有妊娠婦女血液中白細胞總數增高的報道。劉續春對1 328例孕婦血液中白細胞數量進行了測定，結果顯示80%以上的孕婦嗜中性白細胞增多[10]。張秀玲等對妊娠中、晚期婦女血液中白細胞數量進行了測定，發現妊娠中期婦女血液中白細胞極顯著性高于未妊娠婦女[9]。在本試驗中，20只未妊娠母犬血液中的白細胞數量為（6 710.00±68172）萬個/mm3，而20只妊娠母犬血液中的白細胞數量則為（15 299.42±2 629.75）萬個/mm3。妊娠母犬血液中的白細胞數量極顯著高于未妊娠母犬，這一結果與上述報道相符。妊娠期白細胞增高雖然是一個較復雜的生理現象，但從妊娠診斷的角度看，上述研究結果表明母畜血液白細胞總數增多可作為妊娠陽性判斷的參考指標之一。

血小板是形態不規則的小體，據文獻報道，血小板顯著減少是早孕的一種生理反應，根據血小板是否顯著減少就可對交配后數小時至數天內的母畜作出超早期妊娠診斷[12]。馬群山等對45頭配種后三江母豬外周血小板數值進行了測定，結果表明三江母豬妊娠后外周血小板數目明顯降低[13]；張壽用血小板計數法對60頭高原母豬進行了超早期妊娠診斷，結果表明妊娠與未妊娠診斷的符合率達到93%以上[14]；李助南等對20頭未妊娠奶牛和22頭妊娠奶牛外周血小板數值進行了測定，發現妊娠奶牛血小板數值極顯著低于未妊娠奶牛，對30頭配種后奶牛進行了超早期診斷，發現其符合率在83%以上[15]。本研究分別測定了20只未妊娠母犬及20條妊娠母犬血液中血小板的數量，結果表明妊娠母犬血液中的血小板數量顯著低于未妊娠母犬（P<0.05）。這一結果與上述報道相符，從母犬妊娠診斷的角度來看，健康母犬外周血液中血小板數目降低，可以作為妊娠診斷的臨床指標之一。

通過臨床試驗研究，表明測定配種后母犬外周血液中紅細胞、白細胞及血小板的數目，可以作為獸醫臨床母犬早期妊娠診斷的指標，具有較高的準確率。

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