高效液相色譜法測定水中微囊藻毒素

廖　楠

（遼寧省環境監測實驗中心遼寧沈陽110161）

高效液相色譜法測定水中微囊藻毒素

廖楠

（遼寧省環境監測實驗中心遼寧沈陽110161）

微囊藻毒素本身含有七肽類干毒素成分，促癌作用極為明顯，容易為居民用水帶來較大威脅。對此問題，較多學者致力于構建相應的檢測體系，使水中的微囊藻毒素得以確定，而所選用的檢測方法主要以高效液相色譜為主，其可依托于自身重現性、靈活性以及準確性等優勢，使微囊藻毒素測定更為精確。本文主要通過一定的試驗方式，判斷微囊藻毒素測定中高效液相色譜法的有效性。

高效液相色譜法；微囊藻毒素；測定

微囊藻毒素測定中HPLC的應用極為常見，其可直接引入如HPLC-FL、HPLV-UV或HPLC-CL等方式，其中前兩種方式在應用中盡管可滿足pg級檢測限要求，然而整個操作過程中較為復雜，且有較多的雜質干擾，所以不具備較強的實用性。而后者在應用中較為簡便易行，但因藻毒素在識別中容易因干擾問題而影響測定準確度。因此，本文在試驗過程中對HPLC的應用考慮將這三種方式進行配合應用，可使水中微囊藻毒素得以有效檢測。

1　水中微囊藻毒素檢測中的HPLC應用試驗分析

1.1試劑與儀器的選擇與色譜條件設定

試驗中在試劑選擇方面，主要以MC-YR、MC-RR、MC-LR為標樣，且選取相應的雙蒸水、甲醇、三氟乙酸等作為試劑。在儀器選用方面，可將Agilent1100型設備引入，并將其他相應的超聲波儀器、萃取柱以及可調氮吹儀等儀器引入。另外，試驗中所設定的色相分析條件主要為，色譜柱恒溫箱、進樣量分別設定在25℃與20uL，而甲醇主要以45：55（V/V）為主，且在流動相方面，使水溶液包含0.05%的三氟乙酸。同時，做好紫外檢測波長的設定，在此基礎上使MC-YR、MC-RR、MC-LR等峰面積能夠在譜圖中體現出來，最后根據標樣峰面積與譜圖中顯示的峰面積比值，便可判定藻毒素在水樣中的濃度[1]。

1.2相關標準液的制備

試驗過程中，可選擇2.00mL甲醇，使其與0.100mg藻毒素進行相溶，對于該溶液應保證在放置中做好避光冷凍工作，其可作為儲備液。因在標準液制備中，完全選用甲醇，將存在測定時間較短問題，容易影響最終結果。所以可考慮，在甲醇水溶液方面控制于55%，這樣藻毒素測定中，可使其出峰時間保持適中，且測定結果準確度較高。

1.3實際樣品的制備

在樣品制備中，主要需考慮到銅綠微囊藻冷凍、藻毒素提取以及樣品制備等問題。如在銅綠微囊藻方面，需將其置于一定環境下進行冷凍干燥，確保其在離心后能夠使沉淀物形成干藻粉。而在提取藻毒素過程中，需選擇10mL蒸餾水，將干藻粉置于其中，此時通過超聲波儀器完成清液的提取，并對清液做好存儲工作。另外，在制備樣品過程中，主要需將制備好的清液進行過濾，在此基礎上使10mL甲醇加入濾液中。此時需將萃取柱引入，使水樣按照一定的流速從的萃取柱進行流過，以此達到富集濃縮的目標。完成這些操作后，要求對樣品利用甲醇水進行凈化，直至萃取柱被吹干后，將過濾后的溶液收集于瓶內。最后，對甲醇水溶液進行分析，完成微囊藻毒素濃度判定過程[2]。

2　HPLC測定微囊藻毒素的結果分析

2.1流動相選擇與靈敏度判斷

通過試驗測定分析，在等度洗脫情況下，MC出峰在甲醇體積具有較高的分數時較早，以MC-RR為典型，其受到的干擾較為明顯，但在甲醇體積分數減小情況下，出峰時間較晚，尤其MV-LR較為明顯。另外，當流動相中甲醇體積分數為其55%情況下，無論MC-YR、MC-RR或MC-LR，在譜圖中都保持平滑的譜線，且分離效果較為明顯，雜質對測定結果的干擾影響較小。而從靈敏度情況看，根據試驗中的色譜分析條件，測定中可發現三種藻毒素都具有較高的分離度，假定以3為信噪比，可測得的絕對量檢測限可達到1ng。由此可見，在流動相、靈敏度等方面，HPLC測定方法的應用都可起到明顯的效果。

2.2樣品處理優化效果分析

試驗過程中選取甲醇水溶液進行雜質的清除，能夠判定在甲醇水溶液具有較高濃度的情況下，很容易使微囊藻毒素流失，不利于檢測結果準確性的提高。所以在試驗中考慮所選用的甲醇溶液水控制在10%用量上。另外在洗脫液方面，試驗中主要以100%甲醇為主，這樣可使濃縮時間得以縮短，雜質干擾問題因此得到解決，同時回收率與準確度等都可得到保障。所以HPLC方法運用下，樣品處理優化效果也較為明顯。

2.3HPLC方法精密度分析

在微囊藻毒素測定過程中，HPLC方法運用下可對其加標回收率進行判定，可得到MC-YR、MC-RR、MC-LR都超出94.0%的回收率。另外，在樣品分析過程中也可發現，HPLC方法測定微囊藻毒素過程中，檢測限可維持在0.01ug/L～0.05ug/L。由此得出HPLC在精密度、回收率等方面都較高[3]。

3　結語

微囊藻毒素的測定是保證水質的關鍵所在。實際測定中高效液相色譜法的應用可取得良好的效果，由文中試驗可發現，HPLC方法應用下，流動相、靈敏度、樣品處理優化以及精密度等方面都可得以保障，有利于微囊藻毒素的準確測定。

[1]施儉,景澍閩,陸峰,向華.在線固相萃取-二維高效液相-串聯質譜法測定水中微囊藻毒素-LR[J].凈水技術,2013,03: 52-54+58+66.

[2]林瑤,張瓊,李一丹.固相萃取-高效液相色譜法測定水中痕量微囊藻毒素[J].中國衛生檢驗雜志,2010,09:2174-2175.

[3]馮桂學,劉莉,王明泉,孫韶華,賈瑞寶.在線固相萃取-液相色譜法測定水中3種微囊藻毒素[J].化學分析計量,2014,06:34-36.

遼河流域水環境安全監控與監測體系建設(課題編號：2012ZX07505-003)。