楊潔 曹旭蓉 林佳麗 吳春萍 趙二勞
摘 要:以大葉黃楊葉為原料,以微波輔助提取黃楊葉中黃酮和多糖,以超聲波輔助提取黃楊葉中多酚,分別測定其含量,并采用清除DPPH·法評價其抗氧化活性。結果表明:大葉黃楊葉中黃酮含量為31.10mg/g;多糖含量為37.85mg/g;而多酚含量為18.81mg/g。大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚清除DPPH·的IC50分別為5.45μg/mL、133.46μg/mL和2.91μg/mL,則其抗氧化能力的強弱順序為:多酚>黃酮>多糖。大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量較高,均具有較強的抗氧化活性,具有開發應用價值。
關鍵詞:大葉黃楊葉;抗氧化性;黃酮;多糖;多酚
中圖分類號:TS202.3 文獻標識碼:A DOI:10.11974/nyyjs.20180732001
我國地大物博,有極其豐富的植物資源,且大多具有藥理價值,有效開發應用這些植物資源具有重要的意義。大葉黃楊(Euonyus japonicus),又名“冬青衛矛”,為衛矛屬常綠灌木或小喬木,是我國許多城市中常見的綠籬樹種[1],栽培甚為普遍,資源豐富。我國《本草綱目》中記載,黃楊具有清熱活血、行氣解毒以及祛濕通絡等藥理活性[2]?,F代研究表明,大葉黃楊葉中含有黃酮類成分,是其主要功能成分之一[3]。目前有關大葉黃楊葉中活性成分的研究較少。本試驗提取測定大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量,并采用清除DPPH·法評價其抗氧化活性,為合理利用大黃楊資源,充分發揮其經濟價值提供依據。
1 材料與儀器
1.1 材料與試劑
材料:黃楊葉為大黃楊葉,2017年10月采集于忻州師范學院校區。自來水洗凈后,恒溫烘箱中45℃下烘干,藥材粉碎機粉碎,過60目篩保存備用。
試劑:DPPH·購自美國Sigma公司;蘆丁標準品購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;其余無水乙醇、葡萄糖、沒食子酸、苯酚、碳酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉,以及福林酚等試劑,均為國產分析純。
1.2 儀器
主要儀器見表1。
2 試驗方法
2.1 黃楊葉預處理
將粉碎的黃楊葉粉按1:15加入石油醚進行脫脂12h后,抽濾,濾渣置于50℃恒溫干燥箱中烘干,備用。
2.2 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚的提取
2.2.1 黃楊葉中黃酮的提取
精密稱取經預處理的黃楊葉粉1.0g,參考文獻[4]的方法,稍作改動,以體積分數為75%的乙醇為提取劑,在料液比為1:25(g:mL)、微波功率為390W的條件下,提取10min,提取液抽濾,收集濾液,用去離子水定容到100mL容量瓶中,得到黃楊葉黃酮提取液。
2.2.2 黃楊葉中多糖的提取
精密稱取經預處理的黃楊葉粉1.0g,參考文獻[5]的方法,稍作改動,以去離子水為提取劑,微波功率455W,料液比1:30(g:mL),微波提取8min,提取次數為2次。抽濾后合并濾液,并用去離子水定容到100mL容量瓶中,得到黃楊葉多糖提取液。
2.2.3 黃楊葉中多酚的提取
精密稱取經預處理的黃楊葉粉1.0g,參考文獻[6]的方法,稍作改動, 70%的乙醇為提取劑,超聲功率320W,料液比1:25(g:mL),在50℃下提取30min,提取液抽濾,用去離子水定容到100mL,得到黃楊葉多酚提取液。
2.3 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量的測定
2.3.1 黃楊葉中黃酮含量測定
以蘆丁為標準對照品,采用硝酸鋁比色法對黃楊葉黃酮進行測定。配制濃度為0.4mg/mL的蘆丁標準品溶液,參考文獻[7]方法,測定并繪制蘆丁標準曲線。精密移取1.0 mL黃酮提取液于10 mL比色管中測定其吸光度,并由回歸方程計算黃楊葉中黃酮含量。
2.3.2 黃楊葉中多糖含量的測定
以葡萄糖為標準對照品,采用硫酸-苯酚法對黃楊葉中多糖進行測定。配制濃度為0.24 mg/mL的葡萄糖對照品溶液,參考文獻[5]的方法,測定并繪制葡萄糖標準曲線。精密移取0.5mL多糖提取液于10mL比色管中測定其吸光度,并由回歸方程計算黃楊葉中多糖含量。
2.3.3 黃楊葉中多酚含量的測定
以沒食子酸為標準對照品,采用福林酚法對黃楊葉中多酚進行測定。配制濃度為0.1 mg/mL的沒食子酸對照品溶液,參考文獻[6]的方法,測定并繪制沒食子酸標準曲線。精密移取0.5mL多酚提取液于10mL比色管中測定其吸光度,并由回歸方程計算黃楊葉中多酚含量。
2.4 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚抗氧化活性測定
本試驗參考文獻[7]采用清除DPPH·法評價黃楊葉黃酮、多糖和多酚的抗氧化活性。準確移取質量濃度為0.10 mg/mL的DPPH·溶液2.0mL,置于10mL比色管中。再加入一定量的黃酮提取液,然后用去離子定容到5mL,搖勻,避光放置30min,在517nm最大波長下,分別測定其吸光度。按照公式:清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100,計算其對DPPH·的清除率。其中:A0為只加DPPH·溶液的吸光度;A1為加DPPH·溶液和黃酮提取液的吸光度;A2為只加黃酮提取液的吸光度。
按同樣方法分別測定多糖、多酚對DPPH·的清除率。
3 結果與分析
3.1 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量
按照試驗方法,得蘆丁標準曲線回歸方程為:A=10.533c-0.0041,R2=0.9994,線性范圍為0 ~ 0.072mg/mL;
得葡萄糖標準曲線回歸方程為:A=35.048c-0.0478,R2=0.9992,線性范圍為 0 ~ 0.0288mg/mL;得沒食子酸標準曲線回歸方程為A=55.768c+0.0149,R2=0.9991,線性范圍為 0 ~ 0.014mg/mL。測得大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量分別為31.10mg/g、37.85mg/g和18.81mg/g??梢?,大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量均較高,且多糖含量>黃酮含量>多酚含量。表明大葉黃楊葉具有開發價值。
3.2 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚的抗氧化活性
按照試驗方法,分別測定黃楊葉中黃酮、多糖和多酚對DPPH·的清除率,結果見圖1至3??梢?,無論是黃酮、多糖還是多酚,隨著濃度的增大,其對DPPH·的清除率也隨之增大,具有明顯的量效關系。計算知黃楊葉中黃酮清除DPPH·的IC50為5.45μg/mL;黃楊葉中多糖清除DPPH·的IC50為133.46μg/mL;黃楊葉中多酚清除DPPH·的IC50為2.91μg/mL。表明黃楊葉中黃酮、多糖和多酚均具有較強的抗氧化活性,且多酚的抗氧化活性最強。
4 結論
黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量分別為31.10mg/g、37.85mg/g和18.81mg/g。上述3種成分清除DPPH·的IC50值分別為:5.45μg/mL、133.46μg/mL和2.91μg/mL。結果表明黃楊葉中具有開發研究價值,值得進一步深入研究。
參考文獻
[1]張亮,曹叢華,任榮珠,等.大葉黃楊葉綠素的提取及穩定性研究[J].安徽農業科學,2010,38(17):8923-8925,8943.
[2]洪軍,劉俊紅,管玉周.超聲波輔助提取大葉黃楊總黃酮的工藝及其抗氧化活性研究[J].食品工業科技,2014,35(13):266-270.
[3]張雪輝,唐蕊.大葉黃楊不同生長期葉片中類黃酮含量的測定[J].邢臺學院學報,2017,32(02):183-184.
[4]楊喜花,陳敏,張華珺,等.微波法提取沙棘葉總黃酮的工藝研究[J].中草藥,2006(4):535-537.
[5]陳義勇,馮燕紅.微波輔助提取銀杏葉多糖工藝及其體外抗氧化活性研究[J].食品科學,2012,33(6):24-28.
[6]陳樹俊,胡潔,王振文,等.超聲波輔助響應面法提取藜麥多酚及抗氧化性研究[J].山西農業科學,2016,44(11):1708-1714,1737.
[7]王妮,閆唯,李佳,等.溫度對旱柳葉黃酮提取率及抗氧化活性的影響[J].農業與技術,2017,37(23):5-7.
作者簡介:楊潔(1987-),女,博士,講師,從事天然產物活性成分研究。