500例地中海貧血基因檢測分析

羅桂香，李戀湘，周穎娟，李磊

（珠海市婦幼保健院，廣東 珠海 519001）

地中海貧血屬于一種常見的單基因疾病，而引發這一疾病的主要原因是珠蛋白基因突變，或者各種合成α、β珠蛋白生成障礙所引發的遺傳性溶血性疾病，我院孕婦的地中海貧血發生率較高，被認為是造成胎兒早產、宮內死亡等不良妊娠結局的重要危險因素，并且可能引發內分泌失調、血栓栓塞等嚴重并發癥。所以在當前臨床工作中，需要重視對孕婦的地中海貧血基因檢測。在本次研究中，本文將選擇500例孕婦為研究對象，對其地中海貧血基因檢測的相關內容進行分析，相關內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以我院孕檢的500例孕婦為研究對象，本組孕婦的入選時間為2019年1月-2019年6月，平均年齡（28.6±3.9）歲。

1.2 研究方法 采用GAP-PCR多聚酶鏈擴增技術進行檢測，根據亞能生物技術（深圳）有限公司的說明書完成DNA采集、數據提取、電泳等實驗操作。之后將所獲取的樣本采用NGS測序法做進一步分析，主要路徑包括：（1）通過MAGEN試劑盒（上海伯易生物科技有限公司），采用磁珠法提取孕婦的DNA，并做常規核酸純化之后，對孕婦的DNA做定量檢測。（2）PCR擴增，加入引物之后實施PCR擴增，將擴增后的產物放置在瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測，根據檢測結果判斷PCR擴增效果是否滿意。（3）構建文庫，將相關擴增物（已鑒定）混合之后，建立地中海貧血文庫，并在其中選擇理想的Illumina測序分型方法完成文庫構建。（4）DNA末端修飾。通過加“A”對本組孕婦DNA資料進行處理，并通過Covaris打斷法隨機打斷之后完成柱式離心純化，并將片段化的DNA末端修復，修復后添加A反應，連接文庫。（5）文庫定量檢測與測序。在本次工作中，為確保文庫定量檢測與測序的質量，采用Agilent 2100對文庫質量進行測量，并結合Q-PCR方法定量檢驗文庫產量，根據最終數據判斷文庫制備結果是否滿足本次研究預期，對于檢測結果顯示合格者則可以形成DNA簇群，用于產生原始數據。（6）數據分析。在獲得原始數據之后可以直接將數據上傳，在數據下機后即可進行信息分析流程，先對下機的原始數據進行質量評估測量之后，除去其中低質量以及被污染的數據，之后按照primer與index分類情況做后續數據處理。最后，通過BWA軟件將reads數據對比到標準的基因序列中，通過基因序列對比方法，獲得堿基多態性分布結果。

1.3 統計學處理 采用SPSS 22.0軟件對本次研究的數據進行分析處理，計數資料以例和百分率表示，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

在本文所選擇的500例樣本中，共篩查出49例地中海貧血孕婦，其中包括α地中海貧血基因突變28例，β地中海貧血基因突變19例，α合并β地中?；蛲蛔?例，相關資料如表1、表2所示。

表1 500例孕婦地中海貧血的基因突變檢出結果（n=49）

表2 地中海貧血基因突變分布情況（n=49）

3 討論

地中海貧血是編碼珠蛋白基因變化而引發的一種或者多種珠蛋白肽鏈合成障礙，發病后會造成人體血紅蛋白成分的異常變化，最終造成溶血性貧血，在臨床上可以根據其不同類型劃分為α地中海貧血、β地中海貧血和異常血紅蛋白病等。其中α地中海貧血基因突變主要是因為α珠蛋白基因的缺失或突變而造成了α蛋白肽鏈合成受抑制，其中編碼α-珠蛋白基因主要存在于16號染色體短臂。而β地中海貧血基因突變主要是因為β-珠蛋白肽鏈合成受限制有被完全顯示而引發的貧血。從本次研究結果來看，在本文所選的500例孕婦中，共發現地中海貧血孕婦49例，其中α地中海貧血基因突變發病率最高、β地中海貧血基因突變次之，α合并β地中?；蛲蛔冏畹?，未發現γ地中海貧血基因突變等少見地中海貧血病例。

現代研究認為，我國地中海貧血具有顯著的地區差異性，其中兩廣及海南等地區的地中海貧血的發病率高于全國，在我國南方地區的自然人群中，地中海貧血的基因攜帶率較高，其中孕育中間型或重型地中海貧血的發生率較高[1]。所以在臨床上，為了能夠降低地中海貧血新生兒的出生率，在婚前、孕前以及產前進行篩查。在本文所選的500例孕婦中，地中海貧血的發生率為9.8%，略高于文獻[2]，考慮其原因可能為兩者之間的研究方法不同，其中文獻所采用的研究方法是對患者的平均紅細胞體積進行初篩，根據初篩結果對本組孕婦的地中海貧血情況進行判斷，因此只能發現集中相對常見的地中海貧血類型；同時在診斷期間，通過MCV方法對輕型地中海貧血的基因類型進行分析，敏感度較低，在臨床上容易出現誤診漏振等問題，這是目前臨床上在篩查地中海貧血時難以避免的問題。而在本研究中，本文所采用的方法不經過平均紅細胞體積初篩，而是直接進行301型地中海貧血基因檢測，與傳統方法相比，這種方法對地中海貧血具有更高的檢出率，不僅能夠對常見的地中海貧血情況進行篩查，也能發現部分罕見的地中海貧血基因突變情況[3]。

而在確診孕婦存在地中海貧血癥狀之后，需要第一時間對孕婦進行治療，常見的治療方法包括規范化輸血、移植造血干細胞等，而該病癥最核心的方法就是預防，其中輸血治療的關鍵就是要將紅血蛋白維持在100 g/L以上，這樣才能為孕婦提供正常的紅細胞，進入改善發病后所造成的髓外造血以及低氧血癥等，最終避免蓋面心臟以及骨骼畸形等情況的發生，最終達到延長患兒壽命的目的。相比之下，輕型地中海貧血對胎兒的生長發育的影響很小，普遍不需要采取輸血等治療干預；而中間型或者重型孕婦應該及時輸血治療[4]。移植造血干細胞是目前臨床上治療重型地中海貧血唯一的有效方法，該方法有助于延長壽命，并提高生活質量，所以對于有條件的患者應該實施造血干細胞移植治療，目前多數研究也證明，將移植造血干細胞應用在重型地中海貧血患兒臨床治療中，發現該治療方法可以延長患兒的生存時間，存活率滿意[5]。

綜上所述，我院孕婦的地中海貧血發病率較高，通過301型地中海貧血基因檢測保證了檢出率，在臨床上在積極預防的同時，對于確診地中海貧血的孕婦應該及時通過規范化輸血或者移植造血干細胞的方法來改善預后。