CMIA方法篩查兒童抗梅毒特異性抗體結果的解讀

宋秦偉，王婭琳，劉智圓，張 易，高 爽，馬麗娟

(首都兒科研究所附屬兒童醫院 檢驗科, 北京 100020)

梅毒(syphilis)是由蒼白密螺旋體(treponema pallidum,TP)又稱梅毒螺旋體引起的一種常見的性傳播疾病，主要通過性接觸傳播，亦可通過母嬰垂直和血液傳播[1]。檢測TP作為臨床常規篩查項目，其檢測方法種類繁多。血清學檢測TP是診斷TP的主要實驗室方法[2]，其中臨床常用的檢測方法主要包括：快速血漿反應素試驗(rapid plasma reagin test,RPR)和甲苯胺紅不加熱血清試驗(tolulized red unheated serum test,TRUST)等非特異性抗體篩查試驗以及酶聯免疫吸附試驗、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(treponema pallidum particle agglutination assay,TPPA)、化學發光法、熒光抗體吸收試驗和免疫印跡法(Western blot)等特異性抗體篩查和確認試驗[3-4]?；瘜W發光微粒子免疫分析法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)具有靈敏性高、重復性好、自動化程度高等優點，易于大樣本量篩查檢測，已廣泛應用于臨床實驗室。然而，臨床檢測中，時常出現假陽性結果[5-6]。其結果解讀給臨床帶來一定的困惑。尤其對于兒童群體，涉及的家庭人群范圍更廣，對家庭的影響也更大。如何排除假陽性和正確解讀結果具有重要意義。本研究將CMIA方法篩查出的陽性結果(S/CO>1)的兒童血清樣本，通過其他檢測方法進行復檢和分析，探討對該檢測結果的準確解讀，以指導臨床診斷。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 一般資料:2018年7月至2019年6月，首都兒科研究所附屬兒童醫院23 038例門診和住院患兒采用CMIA方法進行TP抗體篩查。CMIA陽性(S/CO>1)141例，男94例，女47例，平均年齡2.7歲(1天～15.5歲)。此研究經首都兒科研究所醫學倫理委員會批準(倫理審批編號：SHERLL2017029)，并取得所有涉及此項研究患者監護人的知情同意。

1.1.2 試劑和試劑盒:儀器配套的CMIA法用抗梅毒螺旋體抗體試劑(美國雅培公司)；TPPA試劑盒(日本富士株式會社)；TRUST試劑盒(上海榮盛生物藥業有限公司)；Western blot用TP-IgG抗體檢測試劑盒和TP-IgM抗體檢測試劑盒(德國歐蒙醫學實驗診斷股份公司)。

1.2 方法

1.2.1 標本采集：采集空腹靜脈血2 mL，3 500 r/min離心10 min，分離血清，完成CMIA初篩檢測，初篩陽性樣本于當天完成TPPA和TRUST方法復檢，剩余血清樣本-80 ℃分裝凍存，用于Western blot方法檢測。

1.2.2 4種方法檢測TP抗體：CMIA方法用全自動免疫分析儀，儀器工作正常、質控在控等條件下，按照儀器操作說明進行檢測；TPPA方法、TRUST方法和Western blot均需將4 ℃冷藏保存試劑盒平衡室溫后使用，所有檢測操作和結果判定均按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學分析

分析采用SPSS18.0軟件，計數資料采用百分率表示，率的比較采用卡方檢驗。

2 結果

2.1 CMIA方法篩查陽性率及其他檢測方法復檢結果

CMIA方法陽性(S/CO>1)141例，陽性率為0.61%(141/23 038)；復檢結果：TRUST陽性2例(1.42%，2/141)，TPPA陽性7例(4.96%，7/141)，IgG陽性13例(9.22%，13/141)，可疑8例(5.67%，8/141)，IgM陽性6例(4.25%，6/141)，可疑4例(2.83%,4/141)(表1)。

表1 141例 CMIA方法篩查陽性樣本其他檢測方法復檢結果Table 1 Retest results of 141 CMIA positive samples by other testing methods(n)

2.2 按S/CO值分組驗證CMIA篩查陽性結果

S/CO值大于10，共有11例，其中7例TPPA陽性(同時2例TRUST陽性)；S/CO值≥10組，其他各方法復檢陽性符合率均明顯高于S/CO值為1～10組(均P<0.05)(表2)。

表2 不同S/CO值分組其他復檢方法檢測結果Table 2 Test results of other methods in different S/CO value groups

2.3 11例S/CO值≥10病例臨床資料和檢測結果

81.82%(9/11)的病例年齡小于6個月，父母均有TP病史，且IgG均為陽性；編號11號病例年齡最大為9歲，其父母均為現癥病例，該病例被確診現癥感染；編號10號病例年齡2.3歲，其他方法復檢均為陰性，該病例臨床診斷為川崎病，CMIA方法同時檢測丙型肝炎病毒抗體結果亦為陽性(S/CO>1)，其S/CO值為3.4，通過其他檢測方法和臨床資料已排除梅毒和丙肝感染，考慮為自身免疫性疾病引起的假陽性(表3)。

表3 11例S/CO值≥10病例臨床資料和檢測結果匯總Table 3 Summary of clinical data and test results of 11 cases with S/CO value ≥ 10

3 討論

目前血清學檢測是臨床診斷TP感染的主要實驗室檢測方法，可分為非特異性(TRUST)和特異性(CMIA、TPPA和Western blot)抗TP抗體試驗[7]。CMIA方法靈敏性高、重復性好、自動化程度高，不區分IgG和IgM抗體類型，時常出現假陽性結果[3,5-6]。TRUST方法中的定性結果，可用于現癥TP診斷；定量結果可用于療效觀察和判定是否治愈。然而，很多疾病或生理狀態可導致假陽性[8-9]，如單核細胞增多癥、病毒性肺炎和肝損傷等。TPPA方法能夠測定抗體效價，特異性強，敏感性略低；不能區分IgG和IgM抗體類型；且不能自動化檢測，條件受限實驗室可用于確認試驗[10-11]。Western blot特異性強，靈敏性高，可分別檢測IgG和IgM抗體，但操作復雜，不利于大樣本量檢測，主要用于確認試驗[8,10]。這些檢測方法均不能完全滿足臨床診斷和療效觀察的高敏感性，高特異性且操作簡便的需求，多種檢測方法的聯合應用是最好的解決途徑。

本研究顯示，CMIA方法在兒童病例中的TP初篩陽性率(0.61%)明顯低于成人(2.0%～4.5%)[11-12]，這歸因于TP的主要傳播途徑是性傳播。CMIA方法檢測結果的S/CO值越大，其他方法復檢的陽性符合率越高，被診斷為TP感染的可能性越大。本實驗室的結果顯示，S/CO值≥10可作為一個臨界值，用于預判TP感染，S/CO值≥10再結合父母有TP病史，可以確定兒童血清樣本中存在抗TP抗體，但不能斷定是TP感染。由于檢測人群的不同以及儀器、試劑和環境等差異，各實驗室應該建立自己實驗室的臨界值[6,10-12]，用于結果預判和復檢規則的設定。兒童的年齡對臨床診斷亦有重要參考價值，本研究顯示，6個月以下嬰幼兒及新生兒，母傳IgG抗體的可能性最高，需要復檢IgM抗體，IgM抗體陽性對先天TP感染的確診有重要意義[13-15]，但IgM抗體陰性不能排除胎傳TP感染，需要后期隨訪復檢。另外，存在自身免疫性疾病等特殊病癥引起的假陽性情況，需要結合臨床癥狀，父母病史進行排除。CMIA方法TP初篩陽性，需要采用其他檢測方法復檢，建議采用Western blot復檢，條件受限實驗室可用TPPA方法，但要考慮到其靈敏性稍低可能會存在假陰性。由于本研究存在一定的局限性，如陽性樣本量較小，需要繼續積累增加樣本量，以便更加深入的探討。

總之，CMIA方法用于兒童群體的TP篩查檢測，S/CO值<10時存在假陽性的比率較高，建議用Western blot或TPPA方法復檢；其父母的梅毒病史是必須考慮的要素，還要考慮患兒年齡。兒童TP感染診斷比成人更加復雜，做出明確診斷需要慎重，除考慮上述幾種因素和正確解讀實驗室檢測結果，還要充分結合其他臨床資料進行綜合判斷。