電針足三里對功能性消化不良大鼠胃腸 動力調節機制研究

李躍兵 賀子毅 劉奕君 李姝悅 彭艷

〔摘要〕 目的 探討電針干預功能性消化不良的可能作用機制。方法 將25只SD大鼠隨機分為空白組、模型組、電針組、電針非穴位組、多潘立酮組，每組5只。除空白組外，其余各組采用多因素干預法制造功能性消化不良大鼠模型。造模成功后，模型組不采用干預措施，電針組采用電針足三里穴，電針非穴位組采用電針足三里外2 mm處非穴位點，多潘立酮組采用多潘立酮灌胃，均干預14 d。干預結束后，觀察各組大鼠行為學、食量與體質量增長情況、腸道敏感性、胃排空率、小腸推進率、胃動素、胃泌素、血管活性肽的變化。結果 與空白組比較，模型組大鼠體質量與食量降低，活動度減少，腸道敏感性、胃內殘留率增加，小腸推進率、胃動素、胃泌素降低，血管活性肽升高（P<0.05）;與模型組相比，電針組、多潘立酮組、電針非穴位組大鼠體質量與食量升高，活動度增加，腸道敏感性、胃內殘留率降低，小腸推進率增加，胃動素、胃泌素升高，血管活性肽降低（P<0.05）;與電針非穴位組比較，電針組、多潘立酮組大鼠體質量與食量升高，活動度增加，腸道敏感性、胃內殘留率降低，小腸推進率增加，胃動素、胃泌素升高，血管活性肽降低（P<0.05）;與多潘立酮組比較，電針組大鼠體質量與食量升高，活動度增加，腸道敏感性、胃內殘留率降低，小腸推進率增加，胃動素、胃泌素升高，血管活性肽降低（P<0.05）。結論 電針能改善功能性消化不良大鼠食欲和運動行為、增加體質量與食量、降低腸道敏感性，促進胃的排空和小腸的推進功能，電針上述作用可能是通過升高血清中胃動素及胃泌素的含量、降低血管活性肽的含量來實現的。

〔關鍵詞〕 電針;足三里;功能性消化不良;胃腸動力;胃動素;胃泌素

〔中圖分類號〕R245? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.06.021

Regulation Mechanism of Electroacupuncture at Zusanli （ST36） on Gastrointestinal

Motility in Rats with Functional Dyspepsia

LI Yuebing， HE Ziyi， LIU Yijun， LI Shuyue， PENG Yan

（College of Acupuncture and Massage， Hunan University of Chinese medicine， Changsha， Hunan 410208， China）

〔Abstract〕 Objective To explore the possible mechanism of electroacupuncture （EA） intervention on functional dyspepsia. Methods 25 SD rats were randomly divided into blank group， model group， EA group， EA non acupoint group and domperidone group， with 5 rats in each group. In addition to the blank group， the other groups were made functional dyspepsia rat model by multi factor intervention. After successful modeling， the model group was not intervened， the EA group was treated with EA at Zusanli （ST36）， the EA non acupoint group was treated with EA at non acupoint 2 mm outside Zusanli （ST36）， and the domperidone group was treated with domperidone by gavage for 14 days. After the intervention， the changes of behavior， food intake and body weight growth， intestinal sensitivity， gastric emptying rate， intestinal propulsion rate， motilin， gastrin and vasoactive peptide were observed. Results Compared with the blank group， the weight and food intake of rats in the model group decreased， the activity decreased， the intestinal sensitivity and the gastric residual rate increased， the intestinal propulsion rate， the motilin and gastrin decreased， and the vasoactive peptide increased （P<0.05）; compared with the model group， the body weight and food intake of rats in EA group， domperidone group and EA non acupoint group increased， the activity increased， the intestinal sensitivity and the gastric residual rate decreased， the intestinal propulsion rate increased， the motilin and gastrin increased， and the vasoactive peptide decreased （P<0.05）; compared with the EA non acupoint group， the body weight and food intake of rats in the EA group and domperidone group increased， the activity increased， the intestinal sensitivity and the gastric residual rate decreased， the intestinal propulsion rate increased， the motilin and gastrin increased， and the vasoactive peptide decreased （P<0.05）; compared with the domperidone group， the body weight and food intake of the EA group increased， the activity increased， the intestinal sensitivity and the gastric residual rate decreased， the intestinal propulsion rate increased， the motilin and gastrin increased， and the vasoactive peptide decreased （P<0.05）. Conclusion EA can improve appetite and exercise behavior， increase body weight and food intake， reduce intestinal sensitivity， promote gastric emptying and intestinal propulsion in rats with functional dyspepsia. The above effects of EA may be achieved by increasing the contents of motilin and gastrin in serum and reducing the contents of vasoactive peptide.

〔Keywords〕 electroacupuncture; Zusanli （ST36）; functional dyspepsia; gastrointestinal motility; motilin; gastrin

功能性消化不良（functional dyspepsia， FD）是指具有上腹痛、上腹脹、早飽、噯氣、食欲不振、惡心、嘔吐等不適癥狀，經檢查排除引起上述癥狀的器質性疾病的一組臨床綜合征[1]。流行病學調查[2]顯示，FD廣泛存在，普通人群中本病的患病率達30.6%，就診率為62.1%，且FD難以治愈，容易反復發作，嚴重降低患者的生活質量，并耗費大量的醫療資源，已成為困擾人們生活和工作的一大疾病。目前，由于FD的發病原因尚未明確，現代臨床醫學主要采用促胃腸動力、保護胃黏膜、抑酸、抗HP等療法對癥治療，雖具有一定療效，但難以根治本病，且長期用藥易致不良反應。針灸因其獨特的理論體系、顯著的治療效果，在FD的治療中有著特殊的優勢。針灸治療FD具有適應癥廣、不良反應小、多途徑調節、雙向平衡調節、心身共治、總有效率高、遠期療效穩定的優勢，能夠更廣泛而有效地運用于FD的防治[3]。本研究以FD大鼠為受試對象，以電針為干預方法，從大鼠行為學、食量與體質量增長情況、腸道敏感性、胃排空率、小腸推進率等探討電針對FD大鼠胃腸動力良性調節作用。

1 材料與方法

1.1? 動物來源

SD大鼠40只，SPF級，均湖南中醫藥大學動物實驗中心提供。飼養溫度20～25 ℃，濕度50%～70%，體質量200～250 g，雌雄各半。由湖南省太平生物有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2020-0009。

1.2? 主要試劑與儀器

大鼠胃動素（motilin， MTL）ELISA試劑盒（江蘇菲亞生物科技有限公司，批號：FY3367-B）;大鼠胃泌素（gastrin， GAS）ELISA試劑盒（江蘇菲亞生物科技有限公司，批號：FY8501-B）;大鼠血管活性腸肽（vasoactive peptide， VIP）ELISA試劑盒（江蘇菲亞生物科技有限公司，批號：FY3321-B）。

酶標儀（上海巴玖實業有限公司，型號：352型）;洗板機（上海巴玖實業有限公司，型號：AC8）;微量高速離心機（江蘇菲亞生物科技有限公司，型號：TG16W）;隔水式恒溫培養箱（江蘇菲亞生物科技有限公司，型號：GNP-9080型）;一次性無菌針灸針（北京中研太和醫療器械有限公司，型號：0.25 mm×25 mm）;韓式穴位神經刺激儀（南京濟生醫療科技有限公司，型號：HANS-200A）。

1.3? 模型造模方法

將35只SD大鼠按多因素干預法[4]造模，具體方法如下：將大鼠每天上午9：00置于束縛盒中限制3 h;下午2：00置于冰水（0±1） ℃中游泳10 min;隔日喂食（單日禁食，雙日足量給食），連續3周。造模成功標志：在造模過程中，大鼠呈現毛發枯亂發黃，大便稀溏，飲食量下降，體質量增長緩慢甚至下降，活動量明顯減少，反應遲鈍，情緒由煩躁、緊張、易激怒轉變成情緒低下。選取造模成功20只SD大鼠分為模型組、電針組、電針非穴位組、多潘立酮組，每組5只。將5只未造模的大鼠設為空白組進行對照觀察。

1.4? 干預方法

1.4.1? 空白組? 正常飼養，足量喂食，連續2周。

1.4.2? 模型組? 造模成功后正常飼養，足量喂食，連續2周。

1.4.3? 電針組? （1）取穴定位：參照“十三五”國家規劃教材《實驗針灸學》[5]，大鼠標準穴位圖譜定位及擬人對照法定位[5]：足三里位于小腿外側，膝關節后外側，腓骨小頭下約5 mm。（2）電針方法：所有穴位均用直刺，選擇電針方法。大鼠清醒固定，各穴針直刺深度0.2～0.3寸，進針后，接韓式電針治療儀，疏密波（3 Hz，波頻率100 Hz），強度以針柄輕微抖動為度，每次留針20 min，于造模成功后第2天開始針刺，每日1次，7次為1個療程，共2個療程（14次）。

1.4.4? 電針非穴位組? 取穴定位在足三里穴水平向外2 mm，電針方法同電針組。

1.4.5? 多潘立酮組? 將多潘立酮片（西安楊森制藥有限責任公司）研成細粉末，溶于蒸餾水中，制備濃度為0.27 mg/mL的多潘立酮溶液，置于冰箱，4 ℃恒溫保存備用，用時充分搖勻。多潘立酮（9 mg/kg）采用灌胃給藥，每天1次，連續給藥2周，時間與電針組治療時間一致。

1.5? 檢測方法及檢測指標

造模成功后隔日觀察大鼠宏觀表征，檢測食量、體質量、大鼠行為學及腸道敏感性。于實驗第15天，禁食24 h后，進行胃排空試驗、小腸推進試驗，解剖取血清、胃組織進行檢測。血液樣品的收集與處理：腹主動脈采血，常溫放置2～3 h，4 ℃ 3 000 r/min，半徑13.5 cm，離心10 min，取上清液，-80 ℃保存，待測。胃組織取材及處理：取全部胃組織（約100 mg），冰生理鹽水沖洗后速入液氮中凍存，用于分子生物學檢測;取整個胃組織，然后放入4%多聚甲醛中4 ℃固定24 h時，石蠟包埋備用，用于免疫組化檢測。

1.5.1? 大鼠體質量增長情況測量? 實驗開始后隔日上午7：00用電子秤稱量大鼠體質量，并根據體質量調整給藥量（多潘立酮9 mg/kg）。計算各組大鼠體質量增長情況并進行比較。體質量變化（g）=束縛后每次體質量（g）-每次束縛前體質量（g）[6]。一般狀態觀察：每日仔細觀察大鼠的精神狀態、行為特點、神經反射等情況。

1.5.2? 大鼠食量增長情況測定? 實驗開始后隔日用電子秤稱量大鼠食量，計算每周各組大鼠食量增減情況并進行比較。大鼠每天的平均食量（g）=放入的食物重量（g）-拿出的食物重量（g）/一籠大鼠的個數[6]。

1.5.3? 大鼠行為學的測定? 采用曠場實驗[7]，自制曠場反應箱高30～40 cm，底邊長100 cm，內壁涂黑，底面平均分為25個4 cm×4 cm小方格，正上方2 m處架一數碼攝像頭，其視野可覆蓋整個曠場內部。內側壁及底面為黑色，用白線劃分為15 cm×15 cm面積相等的20塊，沿側壁的格稱為外周格（12個周邊正方形），其余為中心格（8個中心正方形）。實驗開始后每周在安靜、四周由全封閉的遮光簾隔離并杜絕參照物的環境條件下進行。實驗前先將大鼠放置于測試曠場箱內適應3 min，操作者握住大鼠尾根部1/3處，輕輕將大鼠放入曠場箱的正中格內，觀察5 min內大鼠的活動情況。

1.5.4? 內臟敏感性評估? 將石蠟油潤滑后的8F導尿管經肛門插入，將球囊末端放在距離肛門1.0 cm左右，用棉線把導尿管和大鼠尾巴根部固定。將其放在平臺上，待大鼠適應環境后，逐漸注水使球囊擴張，觀察大鼠腹部抬起并且背部拱起時（AWR評分3分）所需的注水量，每次直腸擴張持續30 s，重復進行3次，數據取均值[8]。

1.5.5? 胃排空率的測定? 治療結束后，各組大鼠禁食24 h后，給予每只大鼠按1 mL/100 g灌胃容積灌服營養性半固體糊（羧甲基纖維素鈉5 g，奶粉8 g，糖4 g，淀粉4 g，活性炭3 g，蒸餾水約150 mL），30 min 后處死動物，打開腹腔，分離出胃。沿胃幽門處剪取胃，拭干，稱全重（M1），再沿胃大彎處剪開胃，用生理鹽水洗凈內容物，用濾紙拭干，稱胃凈重（M2），計算胃殘留率。

胃殘留率（%）=（M1-M2）/灌胃量×100%[9]

1.5.6? 小腸推進率的測定? 治療結束后，各組大鼠禁食、灌胃方法同前，30 min后處死動物，打開腹腔，分離出腸。用鑷子輕輕提取上端至幽門、下端至回盲部的腸管，平鋪于試驗臺上，不牽扯，輕輕將小腸拉成直線，用直尺測量小腸推進指標。量小腸全長（L1）以及幽門至炭末所達最前端的長度（L2），計算腸推進率，小腸推進率（%）=L2/L1×100%[9]。

1.5.7? 胃動力相關蛋白檢測? 用Elisa法檢測胃組織中MTL、GAS、VIP的濃度[10]。

1.6? 統計學方法

所有數據均輸入計算機，用SPSS 22.0軟件進行處理。各檢測指標統計數據均用“x±s”表示，計量資料符合正態分布、方差齊性者，組間比較用單因素方差分析，若存在差異，進一步的組間兩兩比較采用LSD檢驗，方差不齊則選用Tamhanes T2檢驗。不符合正態分布時的組間比較選用選秩和檢驗，進一步的兩兩比較選用Kruskal-Wallis檢驗。均以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1? 各組大鼠造模前后體質量和食量變化情況比較

造模前，空白組與其余4組大鼠的體質量、食量比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。造模后，與空白組比較，模型組大鼠體質量與食量降低（P<0.05）;與模型組比較，電針組、電針非穴位組、多潘立酮組大鼠體質量與食量增加（P<0.05）;與電針非穴位組比較，電針組、多潘立酮組大鼠體質量與食量增加（P<0.05）;與多潘立酮組比較，電針組大鼠體質量與食量增加（P<0.05），說明電針組較多潘立酮組和電針非穴位組更能改善大鼠食欲、增加大鼠體質量。見表1。

2.2? 大鼠造模前后行為學變化情況比較

造模前，空白組與其余4組大鼠的行為學在爬格子數、起立數、修飾數三方面比較，差異無統計學意義（P>0.05）;造模后，與空白組比較，模型組大鼠的行為學爬格子數、起立數、修飾數均明顯減少，差異有統計學意義（P<0.05）;與模型組比較，電針組、電針非穴位組、多潘立酮組大鼠爬格子數、起立數、修飾數增加（P<0.05）;與電針非穴位組比較，電針組、多潘立酮組大鼠爬格子數、起立數、修飾數增加（P<0.05）;與多潘立酮組比較，電針組大鼠爬格子數、起立數、修飾數增加（P<0.05），說明電針組較多潘立酮組和電針非穴位組更能改善大鼠運動行為。見表2。

2.3? 大鼠造模前后腸道敏感性變化情況比較

造模前，空白組與其余4組大鼠腸道敏感性比較，差異無統計學意義（P>0.05）;造模后，與空白組比較，模型組大鼠腸道敏感性增加（P<0.05）;與模型組比較，電針組、電針非穴位組、多潘立酮組大鼠腸道敏感性降低（P<0.05）;與電針非穴位組比較，電針組、多潘立酮組大鼠腸道敏感性降低（P<0.05）;與多潘立酮組比較，電針組大鼠腸道敏感性降低（P<0.05），說明電針組較多潘立酮組和電針非穴位組腸道敏感性降低更明顯。見表3。

2.4? 大鼠造模前后胃內殘留率和小腸推進率比較

與空白組相比，模型組大鼠的胃內殘留率升高、小腸推進率下降，差異有統計學意義（P<0.05），說明造模后各組大鼠胃排空時間延長、小腸推進功能緩慢;與模型組比較，電針組、電針非穴位組、多潘立酮組大鼠胃內殘留率下降，小腸推進率升高（P<0.05）;與電針非穴位組比較，電針組、多潘立酮組鼠胃內殘留率下降，小腸推進率升高（P<0.05）;與多潘立酮組比較，電針組大鼠胃內殘留率下降，小腸推進率升高（P<0.05），說明電針組較多潘立酮組和電針非穴位組更能促進胃的排空和小腸的推進功能。見表4。

2.5? 各組大鼠胃組織中MTL、GAS、VIP含量比較

與空白組相比，模型組大鼠胃組織中MTL、GAS含量降低，VIP含量升高，差異有統計學意義（P<0.05）;與模型組比較，電針組、電針非穴位組、多潘立酮組大鼠胃組織中MTL、GAS含量升高，VIP含量降低（P<0.05）;與電針非穴位組比較，電針組、多潘立酮組大鼠胃組織中MTL、GAS含量升高，VIP含量降低（P<0.05）;與多潘立酮組比較，電針組大鼠胃組織中MTL、GAS含量升高，VIP含量降低（P<0.05），說明電針組較多潘立酮組和電針非穴位組更能升高大鼠胃組織中MTL、GAS含量，降低VIP含量。見表5。

3 討論

FD屬于中醫學“胃脘痛”“痞證”等范疇[11]，中醫認為心情抑郁、飲食不潔、脾失健運是本病主要的病因病機。心情抑郁致使肝氣郁結，氣機運化失調，肝氣犯胃，脾胃運化無力，飲食不潔，損傷脾胃，致使脾胃運化失調，內外二因合而治病[11]。足三里穴是“足陽明胃經”的主要穴位之一，為足陽明胃經之合穴，主要功能為生發胃氣、燥化脾濕，主治胃腸病證?！鹅`樞·五邪第二十》中記載：“邪在脾胃，則病肌肉痛，陽氣有余，陰氣不足，則熱中善饑;陽氣不足，陰氣有余，則寒中腸鳴腹痛。陰陽俱有余，若俱不足，則有寒有熱。皆調于足三里?！?/p>

FD發病機制十分復雜，與多種因素有關，其中胃腸動力障礙是關鍵環節，胃腸動力障礙包括餐后飽脹不適、早飽感、腹痛、上腹燒灼感、胃排空減慢、小腸推進率降低、胃腸動力相關因子異常等[12]。研究[13]表明，30%～50%的FD患者出現餐后飽脹不適、早飽感、腹痛、上腹燒灼感等臨床表現。蘭蕾等[14]發現，與正常人相比，FD患者胃排空減慢15%，小腸推進率降低20%。劉巧媚等[15]研究發現，FD胃腸動力相關因子表達異常。綜上所述，胃排空減慢合小腸推進率降低是FD患者胃腸動力障礙的重要方面，且與FD臨床表現餐后飽脹不適、早飽感、腹痛、上腹燒灼感等有關。許多研究[16]證實電針對FD胃腸動力障礙具有良性調節作用。李躍兵等[17]研究發現，電針能夠顯著促進FD大鼠胃排空，提高小腸推進率。潘小麗等[18]研究證實，電針能夠降低FD患者胃電活動，并顯著緩解患者餐后飽脹不適與上腹燒灼感等癥狀。

本研究表明，與模型組相比，電針組、多潘立酮組、電針非穴位組大鼠體質量與食量升高，活動度增加，腸道敏感性降低，胃內殘留率降低，小腸推進率增加，胃動素升高、胃泌素升高，血管活性肽降低（P<0.05）;與電針非穴位組比較，電針組、多潘立酮組大鼠體質量與食量升高，活動度增加，腸道敏感性降低，胃內殘留率降低，小腸推進率增加，胃動素升高、胃泌素升高，血管活性肽降低（P<0.05）;與多潘立酮組比較，電針組大鼠體質量與食量升高，活動度增加，腸道敏感性降低，胃內殘留率降低，小腸推進率增加，胃動素升高、胃泌素升高，血管活性肽降低（P<0.05）。電針能改善FD大鼠食欲和運動行為、增加體質量與食量、降低腸道敏感性，促進胃的排空和小腸的推進功能，電針上述作用可能是通過升高血清中胃動素及胃泌素的含量、降低血管活性肽的含量來實現的。

電針足三里能夠良性調節FD大鼠胃腸動力等作用，本研究設立電針非穴位組，證實電針組對FD大鼠良性調節作用明顯優于電針非穴位組，表明腧穴具有特異性，也從科學實驗的視角證實經脈與臟腑相關理論的正確性，本研究只選取足陽明胃經一個穴位（足三里穴），后續將從整個胃經腧穴進行探索，為經脈與臟腑相關理論的科學性與正確性提供參考依據。

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