蠶砂炒炭前后對小鼠出血和凝血時間的影響

★ 李瑩 黃金穗 徐媛 熊之琦 張志紅 葉喜德（.江西中醫藥大學附屬醫院 南昌0006；.南昌醫學院 南昌 0004；.江西中醫藥大學 南昌 0004；4.江西省兒童醫院 南昌0006）

蠶砂來源于蠶蛾科昆蟲家蠶（Bombyx moriL.）幼蟲的干燥糞便［1］，別名蠶矢，臨床常以晚蠶之屎質佳，又稱晚蠶砂，或原蠶砂。其味甘辛、性溫，入肝、脾胃經，具祛風除濕，和胃化濁，活血通絡之功。蠶砂臨床應用歷史悠久，始載于《名醫別錄》曰：“主腸鳴，熱中消渴，風痹，癮疹?！保?］從歷代本草的記載來看，蠶砂主治半身不遂、中風、腸鳴、消渴癥、血崩和血虛等。蠶砂主含生物堿類、黃酮類、木質素類、萜類、氨基酸、植醇和葉綠素鹽及其他等，具有抗腫瘤、保肝、抗病毒、補血、抗炎和抗菌等多種藥理作用［3-5］。

蠶砂臨床應用廣泛，在經驗處方中，許多醫者常用蠶砂炒炭與其他藥物合用，用于治婦科疾?。?］。如《本草綱目》云“治消渴，癥結，及婦人血崩”，《儒門事親》載“婦人病證第七，治血崩，上為末”等。臨床實踐證明［7］，蠶砂炒炭后治療婦女血崩取得良效。除單味藥使用外，蠶砂炒炭與其他中藥如鹿角霜、杜仲、桂枝等配伍而成的蠶砂固經湯，止血效果顯著。然而，蠶砂的這種炮制作用變化，目前文獻只是局限于處方配伍中的協同作用，雖然對化學成分和復方應用研究較多［8-10］，但涉及蠶砂炒炭等炮制方面的研究較少?；诖?，本研究借助現代研究手段和方法，開展蠶砂炒炭止血方面的研究，通過研究炒炭前后對小鼠出血時間和凝血時間的影響，來探討蠶砂止血作用機理，并為深入研究蠶砂提供數據支撐。

1 材料

1.1 實驗動物 昆明種小鼠SPF級70只，體質量（18±2）g，雄性，濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供，許可證號：SCXK（魯）2014－0007。

1.2 實驗試劑與儀器 蠶砂（代富安蟲草參茸行，批號：1892013），經江西中醫藥大學龔千鋒教授鑒定為蠶蛾科昆蟲家蠶（Bombyx moriL.）幼蟲的干燥糞便。0.9 %氯化鈉溶液（江西科倫藥業有限公司，批號C219011903-2）。 JY12001型電子天平（d=0.1 mg，上海衡平儀器儀表廠）；C21-RT2140型電磁爐（美的集團）；HH-6數顯恒溫水浴鍋；帆船牌載玻片（25.4 mm×76.2 mm）；小鼠灌胃器、注射器、手術剪、濾紙等常規實驗室用品。

2 方法

2.1 供試品制備 生品制備：分別稱取蠶砂20.0 g、30.0 g、40.0 g，用紗布包好，置于燒杯中，加入10倍量的水，放置在95 ℃的水浴鍋中加熱30 min，過濾，往燒杯中加入8倍量的水，加熱20 min，合并兩次煎煮液，減壓過濾，在水浴鍋中加熱濃縮到40 mL，制備得蠶砂生品低、中、高各劑量的濃度，分別為0.5、0.75、1.0 g/mL。

炒炭品制備：稱取蠶砂210.0 g，用武火（160 ℃，1 000 W）分7次炒，每次30.0 g，炒至外表焦黑色，倒入鐵盤中平攤，放涼，得到蠶砂炒炭品137.4 g，得率65.4 %。依照生品供試品的制備方法，制備得炒炭品藥液，炒炭品低、中、高藥液濃度與生品相對應。

2.2 動物分組與給藥 動物分組：昆明種SPF級雄性小鼠70只，體質量（18±2）g，隨機分為7組，每組10只，分別為空白組，蠶砂生品低、中、高各劑量組，蠶砂炭品低、中、高各劑量組（低、中、高各劑量組濃度分別0.5、0.75、1.0 g/mL）。

給藥：各劑量組按照體質量灌胃給藥，給藥量為0.4 mL/20 g，連續5 d，每天灌胃給藥1次?？瞻捉M給予等量的生理鹽水，在灌胃前用水浴鍋把藥液加熱到常溫。

2.3 小鼠出血時間測定 第5天給藥結束1 h后，在距離尾尖3 mm處剪去小鼠尾巴，有血液流出時開始計時，每隔10 s用濾紙輕輕拭血1次，直至拭后不再出血為止，所用時間為出血時間。

2.4 小鼠凝血時間測定 第5天給藥結束1 h后，用手術剪減去小鼠的睫毛和胡須，防止毛發中的蛋白質融入血液中。將預先準備好的毛細管，從小鼠右眼內眥球后靜脈叢處插入，直至有血液泵出，并于此時開始計時，至血液充滿整個毛細管為止。抽出毛細管，取棉球擦拭小鼠眼部，按壓約30 s，防止血液外濺。將含有整管血液的玻璃毛細管平放于試驗臺上，每隔10 s于適當位置折斷，并緩慢向左右兩側拉開，觀察折斷面是否有血凝絲，重復多次，直到有明顯的血凝絲出現為止，停止計時，所用時間即為凝血時間。

2.5 統計學方法 采用SPSS 22.0軟件進行統計分析，數據均采用均數±標準差（）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05 為組間差異有統計學意義。

3 結果

3.1 對小鼠出血時間的影響 與空白組對比，蠶砂炭品低、中、高各劑量組的出血時間明顯減少，組間差別具明顯統計學意義（P＜0.01），其中以高劑量組減少尤為明顯，其次為中劑量和低劑量組，說明蠶砂炒炭對小鼠出血時間的影響，與劑量存在關聯。蠶砂生品低、中、高各劑量組稍微升高，但差異不具統計學意義（P＞0.05）。具體見表1。

表1 各組小鼠出血時間的比較（，n=10）

表1 各組小鼠出血時間的比較（，n=10）

注：與空白組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 藥液質量分數/g .mL-1 出血時間/s空白組 - 455.41±17.38蠶砂生品低劑量組 0.5 459.63±26.60蠶砂生品中劑量組 0.75 463.60±18.54蠶砂生品高劑量組 1.0 459.45±28.89蠶砂炭品低劑量組 0.5 338.83±28.11**蠶砂炭品中劑量組 0.75 256.64±28.19**蠶砂炭品高劑量組 1.0 211.31±27.13**

3.2 對小鼠凝血時間的影響 與空白組對比，蠶砂炭品低、中、高各劑量組凝血時間明顯減少，組間差異均具明顯統計學意義（P＜0.01），并隨著劑量的增大，凝血時間減少越明顯。蠶砂生品低劑量組凝血時間減少，但不具統計學意義（P＞0.05），生品中、高劑量組略有升高，但均不具統計學意義（P＞0.05），蠶砂炭品各劑量組與生品各劑量組的差別具明顯統計學意義（P＜0.01），具體見表2。

表2 各小組凝血時間的比較（，n=10）

表2 各小組凝血時間的比較（，n=10）

注：與空白組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 藥液質量分數/g .mL-1 凝血時間/s空白組 - 153.56±13.29蠶砂生品低劑量組 0.5 151.96±20.80蠶砂生品中劑量組 0.75 165.28±20.40蠶砂生品高劑量組 1.0 160.88±15.72蠶砂炭品低劑量組 0.5 112.85±12.56**蠶砂炭品中劑量組 0.75 105.20±12.95**蠶砂炭品高劑量組 1.0 64.39±13.42**

4 討論

資料表明，蠶砂炒炭品在復方應用中具止血之效，常用于功能性子宮出血［11］，但這種作用是由于蠶砂單味藥作用，還是協同作用，仍缺乏現代研究基礎。且在現代應用中多見于生品，炒炭品在中藥炮制法中并不常見。目前對中藥止血藥理作用研究，主要考察對受試動物出血時間和凝血時間的影響。由于出血時間與毛細血管、血小板的功能和數量、纖溶等因素有關，反映的是止血狀態；凝血時間主要與各種凝血因子的含量和功能有關［12-13］。

基于此，本文通過考察蠶砂炒炭前后對小鼠出血時間和凝血時間的影響，以研究其炒炭后的止血作用，以便為蠶砂在復方應用提供理論依據。本研究發現，蠶砂生品對小鼠出血和凝血作用影響甚少，但炒炭后可明顯縮短小鼠的出血時間和凝血時間，其中蠶砂炭高劑量組對小鼠出血時間和凝血時間影響最大，說明蠶砂經炒炭后具有明顯的止血功效。這對于從炮制角度來研究蠶砂的臨床應用，意義重大。但這種作用機理還需進一步研究，希望本文能為深入研究蠶砂提供基礎。