GC 法測定恩替卡韋殘留溶劑

楊昌華，胡文勝，覃 琴，鄧春雷

（湖南師范大學醫學院，長沙 410013）

恩替卡韋［1］，2-氨基-9-［（1S，3S，4S）-4-羥基-3-羥甲基-2-亞甲基環戊基］-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮-水合物，臨床治療慢性乙肝，化學結構式為：

本文擬用GC 法［2～4］測定其中的有機溶劑甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃和環己烷。

1 材料與方法

1.1 儀器 Agilent，7890B 氣相色譜儀，FID 檢測器，Agilent，7697A 頂空進樣器；MS205DU 梅特勒電子分析天平。

1.2 試劑 恩替卡韋，嘉實（湖南）醫藥有限公司，批號18112601，18112602，18112603。甲醇（西格瑪奧德里奇貿易有限公司，批號：WXBC2771V），乙醇（DIKMA，批號R141483），二氯甲烷（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20180612），乙酸乙酯（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20171128），四氫呋喃（GRACE，批號：6056785），環己烷（賽默飛世爾科技有限公司，批號：173029），二甲基亞砜（DMSO 阿拉丁，A1830084）。

1.3 方法

1.3.1 色譜方法 色譜柱為DB-624（30m×0.53mm，3μm）毛細管柱；柱溫40 ℃保持15min，10 ℃/min 至180℃保持5min；進樣口溫度：160℃；檢測器溫度：220℃；載氣：氮氣；流速：2.0mL/min；分流比2：1；頂空參數：頂空瓶溫度：90℃，頂空瓶保溫時間：45min，進樣循環時間：35min，LOOP 管（定量環）溫度：105℃，TR LINE（傳輸溫度）：115℃，加壓時間：0.50min；Loop EQ Time（定量環平衡時間）：0.05min，Loop Fill Time（定量環定量時間）：0.20min。

2 結果

2.1 專屬性 稀釋劑二甲基亞砜保留時間遠大于恩替卡韋與殘留溶劑（甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環己烷）；殘留溶劑間及與恩替卡韋無干擾。

2.2 準確度 精密稱取約60mg 甲醇、100mg 乙醇、12mg 二氯甲烷、100mg 乙酸乙酯、14.4mg 四氫呋喃和77.6mg 環己烷置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀釋至刻度，混勻。精密移取10mL 置20mL 量瓶，DMSO 稀釋至刻度，搖勻。精密量取5mL 置20mL 頂空瓶，測定，結果見表1。

2.3 線性和范圍 精密稱取約60mg 甲醇、100mg 乙醇、12mg 二氯甲烷、100mg 乙酸乙酯、14.4mg 四氫呋喃和77.6mg 環己烷置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀釋至刻度，混勻；精密移取2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL、12.0mL 分置100mL 量瓶，分別加DMSO 稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL 置頂空瓶，進樣3 次，測定；以峰面積（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標回歸，結果如表2。

表2 線性范圍與回歸方程

2.4 精密度 稱取約0.1g 恩替卡韋共6 份，精密稱定，分置20mL 量瓶，精密移取10mL 線性儲備液，DMSO 溶解并稀釋至刻度，搖勻，為對照液。精密量取5mL 上述各溶液至20mL 頂空瓶，測定；不同分析人員、不同日期測定得中間精密度，結果見表3。

表3 重復性與中間精密度

2.5 耐用性 精密量取對照品溶液5mL 置20mL 頂空瓶，改變流速（1.8mL/min、2.0mL/min、2.2mL/min）、柱溫（38℃、40℃、42℃）、頂空瓶溫度（88℃、90℃、92℃）、頂空瓶保溫時間（43min、45min、47min），測定，保留時間RSD%（n=3）見表4。最低分離度2.3。

表4 耐用性結果

2.6 溶液穩定性 取2.2 配置的對照品溶液，室溫下放置0h、6h、12h、18h、24h，測定回收率，結果見表5。

表5 溶液穩定性（RSD%）

2.7 系統適用性試驗 精密量取各對照品溶液5mL 分置20mL 頂空瓶，依1.3.1 色譜方法測定，結果如表6。

表6 系統適用性試驗結果

2.8 供試品測定 精密稱取不同批號的恩替卡韋約0.1g 3 份，置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5mL 至20mL 頂空瓶，測定。

表7 供試品測定結果

3 討論

3.1 樣品溶劑的選擇 有機溶劑N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜（DMSO）都有較高極性和沸點，常用于GC 法測定有機溶劑殘留量［6］。恩替卡韋生產中使用的有機溶劑較多，DMSO 沸點更高，有“萬能溶劑”之稱，試驗表明其對各種殘留溶劑的測定無干擾，故選作溶劑。

3.2 色譜柱的選擇 甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環己烷的極性差異較大，篩選了極性色譜柱HP-WAX、中等極性色譜柱DB-624 和非極性色譜柱DB-1，乙醇和二氯甲烷在極性色譜柱HP-WAX中達不到基線分離，而中極性色譜柱DB-624 的分離效果優于非極性色譜柱DB-1，因此選擇DB-624 色譜柱。

色譜柱為DB-624（30m×0.53mm，3μm）毛細管柱，柱溫40℃保持15min，10℃/min 升至180℃保持5min；進樣口溫度：160℃；檢測器溫度：220℃；載氣：氮氣；流速：5.0mL/min 分流進樣，分流比：2：1；頂空瓶溫度：90℃；頂空瓶保溫時間：45min；進樣循環時間：35min；LOOP 管溫度：105℃（定量環）TRLINE 溫度：115℃；加壓時間：0.50minLoop EQ Time：0.05min；Loop Fill Time：0.20min?？梢詫?、靈敏、準確地測定恩替卡韋中殘留的有機溶劑。