育齡女性葉酸代謝相關基因位點多態性研究

陳延冰 梁杰 張艷霞

(廣東省婦幼保健院， 廣東 廣州 511440)

《中國出生缺陷防治報告(2012)》中提到，我國出生缺陷發生率高達5.6%，葉酸在出生缺陷的防護起到關鍵作用?？茖W合理的葉酸增補，可降低出生缺陷發生率(例如神經管畸形、唐氏綜合征、先天性心臟病等)、孕婦貧血、妊娠高血壓、早期流產、復發性流產、早產等[1,2]。因此，建議育齡婦女自孕前3個月開始持續增補葉酸。

葉酸匱乏的其一普遍原因是孕婦機體葉酸的利用能力低下。葉酸的利用能力與葉酸相關代謝基因有密切關聯[2-6]。具體而言，亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(methionine synthase reductase，MTRR)在葉酸代謝過程中起到關鍵作用。MTHFR基因和MTRR基因存在多種基因多態性位點，其基因的多態性會導致酶的生物活性發生改變，進而影響葉酸水平及同型半胱氨酸水平等[3]。本研究旨在利用基因檢測技術，通過分析育齡期婦女MTHFR基因的典型突變位點C677T A1298C的多態性分布，篩查出異常的葉酸相關代謝基因，并且進一步篩查出機體葉酸利用障礙的高風險育齡婦女，為其合理增補葉酸提供科學依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020年1 月至 2020年 8 月在廣東省婦幼保健院門診自愿進行葉酸利用能力基因檢測的育齡婦女作為研究對象，共計85 998 例，年齡范圍19～45 歲，均獲得受檢者知情同意。

1.2 實驗方法

1.2.1 DNA提取 采用乙二胺四乙酸鹽(ethyl-enediaminetetraacetic acidm，EDTA)抗凝管抽取受試者3 ml靜脈血， 用廈門致善公司基因組DNA試劑盒提取DNA， TE ( Tris- EDTA)緩沖液溶解，調節DNA濃度100 gl。

1.2.2 四色熒光探針(見表1)熒光定量PCR檢測MTHFRC677T、A1298C的位點多態性。相關儀器購于美國AB公司，試劑購買于北京六合華大基因科技有限公司。反應結束后在AB ViiA7型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點熒光。根據熒光信號分析C677T、A1298C基因多態性，利用分析軟件(Quant StudioTM Real-Time PCR Software)確定各個樣本的基因分型結果。

表1 四色熒光探針

2 結果

MTHFRC677T A1298C基因多態性分布，統計5386例正常育齡婦女MTHFR基因C677T A1298C位點的基因型分布發現，MTHFR基因C677T位點在育齡婦女中的多態性，CC、CT、TT基因型頻率分別為53.5%、 37.4%、9.1%(見表1)；MTHFR基因A1298C位點在育齡婦女中的多態性，AA、AC、CC基因型的頻率分別為59.7%、35.1%、5.2%(見表2)。

表2 育齡婦女中MTHFR基因C677T位點基因型分布

表3 育齡婦女中MTHFR基因A1298C位點基因型分布

表4 廣東地區育齡女性與其他地區育齡女性MTHFR基因型頻率比較[例(%)]

位點基因型頻率與其他地區女性比較，具有明顯的地域差異。其中χ2檢驗結果顯示，8個地區的MTHFR(C677T)基因型分布有統計學差異(P<0.05)，其中CC型瓊海地區最高，占61.9%；CT型遵義地區最高，占50.5%；TT型淄博地區最高，占43.6%。8個地區的MTHFR(A1298C)基因型分布有統計學差異(P<0.05)，其中AA型淄博地區最高，占79.0%；AC型南寧地區最高，占37.9%；CC型陽江地區最高，占7.9%，見表3。

3 討論

MTHFR酶在葉酸代謝過程中起到關鍵作用。MTHFR基因位點的突變可導致機體葉酸水平的降低及同型半胱氨酸的升高，進而導致出生缺陷、孕婦貧血、妊娠高血壓、早期流產、復發性流產、早產等[4-7]。

本研究通過分析育齡婦女MTHFR基因，發現MTHFRC677T位點CC、CT、TT基因型頻率分別為53.5%、37.4%、9.1%。TT型所占比例與已知的南寧地區 TT 基因型頻率(7.7%)接近[11]， 低于延邊、淄博、廊坊地區TT基因型頻率(分別為31.1%、43.6%、33.9%)[12-17]。筆者認為，采樣人群不同研究地區不同都可能造成研究結果的差異。研究結果與我國神經管畸形患病率北高南低的分布特征基本一致[18]。有研究發現，攜帶677TT純合子基因型時其體內MTHFR酶活性僅為45%， 1298AC雜合子基因型其體內MTHFR酶活性為 68%，而(677CT1298AC)復合雜合子基因型個體MTHFR酶活性為41% ，677CT和677TT變異基因型發生較高人群的血清葉酸濃度會顯著降低， 同型半胱氨酸水平會升高， 這些改變與巨幼細胞性貧血密切相關[19-23]。

研究結果表明，葉酸代謝相關基因多態性檢測可用于直接篩選葉酸利用能力有缺陷的個體，為制定個性化葉酸增補方案， 降低出生缺陷率及實現優生提供科學量化的指導依據。