關于藥物溶液穩定性試驗的驗證方法與價值研究

劉曾飛 馬曉玉 廖春生

【摘要】本文主要綜述在高效液相色譜法（HPLC）中，如何有效、科學地進行藥物溶液穩定性試驗，采用的基本方法是從主峰、雜質峰和峰總和等的峰面積的變化或峰面積百分比變化等數據指標進行分析，并觀察是否有新的雜質峰出現，以此來判斷藥物溶液穩定性情況。藥物溶液的穩定性試驗非常重要，其影響運用此分析方法得到的數據、結果的準確性、可靠性和有效性，進而影響評判藥物的質量優劣。各藥品研發、生產、檢驗機構或企業須要將其重視起來，并要注意應用過程中的注意事項。

【關鍵詞】溶液穩定性試驗;高效液相色譜法;價值研究;

對于藥物溶液穩定性試驗來說，它雖然不屬于分析方法學驗證中八大驗證指標（專屬性、準確度、精密度、檢測限、定量限、線性、范圍及耐用性）之一，但在實際操作中，分析方法學驗證過程中，需要考察溶液穩定性，因為其特殊的作用和影響。溶液穩定性試驗與方法學驗證中各項指標都有密切的關系，例如：若溶液在精密度驗證時間內不穩定，其精密度驗證將無法完成，變異系數（RSD）將超過限值或驗證結果失去可靠性、有效性。為了保證分析方法的可靠性和有效性，不僅要進行八大驗證指標的驗證，也要進行溶液穩定性的驗證。本文就針對藥物溶液穩定性試驗的展開、過程和結果判定存在問題和注意事項進行分析和研究。

1.需要進行溶液穩定性考察的項目

在高效液相色譜法（HPLC）中，有關物質、溶出度、含量均勻度和含量測定等項目，凡涉及溶液配制完成后，需要等待一段時間進樣或長時間持續重復進樣的，均需要進行溶液穩定性試驗。溶液的穩定性研究用于證明根據相應方法制備的樣品溶液和標準品溶液在規定的儲存條件下在一定時間內保持穩定。如果方法中沒有規定有效期，樣品溶液和標準品溶液需進行穩定性研究。

在此過程中，如果測定的有關物質和含量是同一個溶液（相同成分、相同濃度且相同溶劑配制）的時候，那么只需要對有關物質的溶液進行考察就可以。但需要特別注意含量與有關物質的區別和指標的差異，例如：有關物質重點關注的是降解雜質、有毒雜質等雜質的變化;含量重點關注的是主峰面積或目標峰面積的穩定性。需要全面考慮，不可一概而論。

雖項目相同，但是其配制方法、配制濃度、配制溶劑不同，存放條件不同的，均需要分別進行溶液穩定性考察。以驗證樣品溶液或標準品溶液在此配制方法、此溶劑配制此濃度，在此條件下存放一定時間的穩定性。

2.需要進行溶液穩定性考察的溶液

凡在定量計算中涉及到、應用到的數據，均應驗證其數據的準確性、可靠性，即產生此數據的溶液的穩定性。

例如：在運用外標法進行計算時，含量（CX）=CR*（AX/AR），其中CX為供試品溶液濃度;CR為對照品溶液濃度;AX為供試品溶液目標峰峰面積;AR為對照品溶液目標峰峰面積。由計算公式中應用到的AX和AR可知，對供試品和對照品溶液，均需要進行溶液穩定性試驗考察。以保證在進樣時間內，供試品和對照品產生的目標峰峰面積數據是準確、可靠的;不因進樣時間不同，溶液穩定性差，導致不同時間測定的峰面積不同，計算得到的結果不同。同理可知，在運用內標法時，應進行供試品和對照品溶液的穩定性考察;在運用加校正因子的主成分自身對照法和不加校正因子的主成分自身對照法時，需進樣主成分對照溶液和樣品溶液的穩定性考察;在運用面積歸一化法時，只需對樣品溶液進行穩定性考察，計算各峰面積占總峰面積的百分率變化。

很多的原料藥品，它是不含有任何輔料的，所以在這種情況下，對照品溶液和供試品溶液的狀態是基本相同的。但是如果在制劑的情況下，因為在供試品溶液中含有了一些輔料，導致對照品與供試品溶液的狀態存在差異性，此為“基質效應”。所添加的輔料當中，可能會有物質具有干擾性，可能促進主成分降解、雜質增加等。這也是為何要對照品和供試品溶液進行同時驗證的原因。

此外，因部分法定標準品、對照品等標準物質價格昂貴，有些甚至只有進口才能購買。同時《中國藥典》0291國家藥品標準物質通則中強調，國家藥品標準物質單元包裝一般供一次使用，標準物質應臨用前配制，否則，使用者應證明其適用性。當需要配制此類對照品或標準品溶液，保存至2～8℃或其他適宜條件下長期使用時，如30天，應證明其適用性，應重點考察其溶液穩定性。

3.溶液穩定性試驗的考察時間選擇

溶液穩定性考察的時間范圍，應完全包涵、覆蓋日常檢驗分析所需要用到的時間。需要考慮實際情況、特殊情況、多批次大量檢驗情況等，適當制定溶液穩定性考察的時間范圍;但也不是越長越好，耗費人力物力，需綜合考慮。

考察配制的供試品溶液與對照（品）溶液的穩定性至少8小時。8小時穩定的，各論中不必規定溶液配制后的進樣時間;6小時穩定但8小時不穩定的，各論中應規定溶液配制后的進樣時間;4小時不穩定的，各論中應規定臨用新制或配制后立即進樣;2 小時不穩定的，應考慮更換溶劑[3]。

例如：一般在對有關物質和含量測定的時候，采用HPLC檢測方法，可對其進行將近12個小時的穩定性考察。采樣的時間在前期的時候，間隔時間需要短一點，在后期的時候可以適當的加大間隔，一般可選點為0小時、2小時、4小時、6小時、8小時和12小時等。

因部分法定標準品、對照品等標準物質價格昂貴，對法定標準品、對照品溶液考察穩定性的，可選0天、3天、7天、15天、30天等。根據實際情況適當調整實際范圍。

4.溶液穩定性試驗的驗證方法和評價指標

對于考察時間相對短的（如12小時內），可采用同一系統環境進行，即保持流動相、色譜柱等試驗條件不變，高效液相色譜系統連續不間斷運行情況下，在各采樣時間點重復進樣同一溶液。通過采集各采樣時間點目標峰面積，進行計算和評價，一般用偏差、相對偏差、置信區間或相對標準偏差（RSD）表示。對于待測成分含量100%的含量測定，一般計算的結果RSD不超過2.0%，就可說明此藥物溶液的穩定性是很好的;反之，則說明穩定性是差的。在基質復雜、組分含量低或多成分分析中，可接受范圍可適當放寬;同時應考慮儀器進樣誤差。

對于考察時間相對較長的（如30天，法定標準品、對照品溶液考察穩定性），使用不同系統環境進行，即在不同時間點，使用重新配制的流動相進行試驗。樣品溶液或標準品溶液依據方法進行配制，在室溫或其他條件下（如冰箱2 ～8℃ ） 儲存適當的時間。每個間隔點，用新鮮配制的標準品溶液做對照，測定儲存的樣品溶液或標準品溶液。測定結果與初始結果進行比較，符合接受標準便可確認樣品溶液和標準品溶液在規定的儲存條件下在規定儲存時間是穩定的。通過采集各采樣時間點目標峰面積，進行計算和評價，一般用偏差、相對偏差、置信區間或相對標準偏差（RSD）表示。

對于有關物質供試品溶液的穩定性考察，應重點關注降解雜質、毒性雜質等雜質的變化情況，還有新雜質的產生情況。藥物溶液穩定性僅通過對主峰峰面積變化的觀察還是無法實現的，還需要結合歸一化法觀察主峰峰面積占總峰面積百分比的經時變化和每個雜質峰面積、雜質總峰面積和分別占總峰面積比的變化，并結合觀察是否有新雜質峰產生來實現。主要是因為當藥物有微量降解的時候，主峰峰面積是很大的，而且儀器進樣也存在誤差，藥物的微量降解通過主峰峰面積的百分比、各雜質峰面積占總峰面積的百分比和雜質的產生進行驗證，相對值能非常清晰的表現出來。

5.關于藥物溶液穩定性試驗的注意事項及價值研究

第一，在對藥物溶液進行穩定性試驗的時候，還可以對溶液pH值穩定性進行考察。正常情況下，pH值測定時溶液的配置方法和限度范圍是有一定參考標準的，如果沒有的話，也可以自行建立相應的標準。在此過程中，建議要考慮主藥所用的溶劑，配制的溶液的pH值是否一直處于穩定性狀態，同時需要做好10分鐘的連續記錄。如果pH值所呈狀態不穩定，那么想要實現溶液穩定還是非常困難的。所以在配制溶液pH值不穩定的時候，需要對溶劑進行進一步的篩選，一直到穩定為止。

第二，藥物溶液穩定性不好，可以從以下兩個方面來實現：其一，根據主成分的結構，去選擇穩定的溶劑。如當主藥具有酸性的時候，最好是選擇酸性溶液;其二，如果降解程度還可以接受，也不會給最終的試驗結果帶來重大影響，則可以在質量標準中明確注明，需要在溶液配制后及時進樣或進樣時限，避免因為時間問題而影響最終結果的準確性和可靠性。

第三，對于制劑的含量測定和溶出度檢查，可以選擇UV測定法來實現，此方法在檢查過程中，只需要在一定時間內對相關溶液的吸收度是否穩定進行判斷即可。

第四，在對12個小時后的藥物溶液穩定性進行試驗的時候，一定要避免因為溶劑的揮發給峰面積帶來的影響，應有必要的措施防止此類影響。

第五，藥物溶液穩定性的好壞，必須質量標準中進行體現。若需要在溶液配制完成以后立即進樣，在藥物溶液不穩定的時候，也沒有及時進樣，那么是會影響到最終測定結果的，可能導致有關物質超出限度，進而給后續一系列的環節帶來錯誤判斷，如生產、流通以及檢驗等等。藥物溶液穩定性考察的驗證是非常重要的，各藥品研發、生產、檢驗機構或企業和人員提高重視程度。

結束語

綜上所述，我們詳細闡述了關于藥物溶液穩定性實驗的驗證方法與價值研究，并通過以上分析我們可以知道藥物溶液穩定性實驗的重要性，它的驗證方法和過程是需要研發和實驗人員高度重視起來的。同時，要知道藥物溶液穩定性與試驗的準確性和最終實驗結果的科學性是有非常密切關系的，只有仔細分析和研究藥物溶液穩定性實驗中存在的問題并解決，才能達到穩定性目標。

參考文獻：

[1]藥品GMP指南，國家食品藥品監督管理局藥品認證管理中心 編著，2011.8。

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[4]趙飛燕，王晟，秦媛媛，等.12種中藥注射劑與4種常用輸液連續滴注后混合液的穩定性考察[J].抗感染藥學，2020，17（7）：5-6.

[5]陶婉君，李根，郭文玫.注射用重組人干擾素α-1b溶解后活性穩定性及霧化粒徑研究[J].中國藥業，2020，29（7）：3-4.

作者簡介：劉曾飛，男，漢，貫籍：福建省龍巖市武平縣，大學本科，學士學位，執業藥師，現在藥品生產研發企業（力品（廈門）藥業股份有限公司）從事藥品檢驗工作，現任質量控制部主管崗位。