東莞地區兒童呼吸道病毒感染流行特征分析

鄧沛汶 潘俊均 修寧寧 隋 洪（通訊作者）

（東莞康華醫院檢驗科，廣東 東莞 523000）

隨著抗生素的發展和臨床的廣泛使用，在兒童急性呼吸道感染（Acute respiratory infection，ARI）中由病毒引起感染的比例明顯高于細菌感染[1]。同時已有報道，引起呼吸道感染的病毒中可在不同區域和季節呈現一定的差異[2]。通過對兒童在一年四季中感染呼吸道病毒的主要類型進行研究，可及時了解到本地區兒童呼吸道病毒感染情況，不僅給臨床提供診斷依據，同時可提前對該種病毒進行預防以減少感染，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集本院兒內科和新生兒科2019年1月至2019年12月因呼吸道感染而住院兒童3953例，其中男孩2404例，女孩1549例。一年四季分組如下：春季公歷3～5月，夏季公歷6～8月，秋季公歷9～11月，冬季公歷11月～次年2月。

1.2 儀器與試劑：奧林巴斯BX51 熒光顯微鏡，試劑盒Diagnostic Hybrids 7 項呼吸道病毒檢測試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 標本采集與處理：經培訓后由護士對當天入院兒童進行采集標本，采樣耗材使用美國進口絨植拭子從鼻孔進入后水平深入到鼻咽部順時針旋轉一圈后取出拭子裝進配套管中迅速送檢。標本接收后立即加入3mL 1X PBS 細胞保存液。

1.3.2 細胞玻片準備：將加了細胞保存液的標本放置渦旋振蕩器上充分震蕩10 秒，使絨植拭子上細胞脫落，用鑷子取出拭子丟棄，500g 離心5min，吸棄上清液，重復以上步驟洗滌2 次。在沉淀中加入500mL 細胞保存液反復吸吹以懸浮細胞層。每孔吸取25uL 加到8 孔玻片，小心放到40℃加熱板中烘干。待玻片全干后，放入預先冷卻丙酮中浸泡7min，進行固定細胞。

1.3.3 免疫熒光染色：試劑盒中七種試劑分別滴一滴約25uL 到每一個孔中，留一孔不加任何試劑作為空白對照，將玻片放入黑色盒中放到37℃培養箱中孵育20min。40X PBS 洗滌液小心沖洗，再用反滲水沖洗一次，放到加熱板中烘干。滴上封閉油，蓋上蓋玻片，在暗房里使用熒光顯微鏡觀察，顯微鏡的激發峰490nm，發射峰為520nm。

1.3.4 結果判斷：每批次使用試劑盒配套的質控片，與標本同樣處理。200 倍顯微鏡下觀察，每孔中每視野找到≥2 個綠色熒光細胞即為陽性，否則為陰性。陽性細胞可被相應的FITC 熒光素標志的單克隆抗體識別，在細胞核和（或）細胞質呈現果綠色熒光，FluA、FluB 為胞核型或胞漿型，ADV 為顆粒樣的胞漿型、RSV 是胞漿型、PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ為胞漿型，陰性細胞被Evans Blue 染成紅色。

1.4 統計學處理：運用SPSS12.0 軟件包處理數據，率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 七種病毒的檢出情況：在3953例患兒中七種病毒總檢出率是29.70%，男孩檢出率29.95%，女孩檢出率29.31%，兩組差異比較無統計學意義（χ2=0.185，P=0.667），詳見表1。

表1 七種呼吸道病毒的檢出情況

2.2 不同季節病毒的檢出情況：四個季度中春季檢出率28.35%，夏季檢出率24.80%，秋季檢出率57%，冬季檢出率44.79%，不同季節檢出率比較，差異有統計學意義（χ2=146.038，P＜0.05），詳見表2。

表2 不同季節呼吸道病毒的檢出情況

3 討論

在兒科里，由呼吸道病毒引起的ARI 很常見，而且ARI 也是引起嬰幼兒死亡的主要原因之一。有報道[3]，在兒童中由病毒引起呼吸道感染占70%～80%。目前，引起ARI 最常見病毒類型有腺病毒（ADV）、甲型流感（FluA）、乙型流感（FluB）、副流感1 型（PIVⅠ）、副流感2 型（PIVⅡ）、副流感3 型（PIVⅢ）、合胞病毒（RSV）。呼吸道病毒的檢出方法有多種，病毒的分離培養是診斷的“金標準”，本實驗使用的直接免疫熒光法已廣泛在臨床試驗室使用。

本研究主要收集東莞本地區2019年1月至2019年12月因呼吸道感染而入院的患兒共3953例，7 種呼吸道病毒的總檢出率為29.70%。本研究中3953例患兒在四個季節中陽性檢出率比較差異有統計學意義，其中冬季的檢出率最高（44.79%），秋季最低（20.57%）。冬季的主要檢出類型是FluA占冬季總檢出率51.80%，其次是RSV 占32.61%。流感病毒屬正粘病毒科，有A、B、C 三種類型，A 型可引起大范圍的疾病傳播。流感病毒的感染有明顯的季節性，FluA 主要發生在冬季，易感人群集中在1～3歲。

不同地區兒童感染呼吸道病毒類型有差異，本地區兒童感染病毒的高發季節是冬、春季，主要人群為＜3歲的小齡兒童，RSV 主要感染病毒類型，1～3歲年齡階段感染率最高，3～12歲隨著年齡增長，感染率降低。隨著社會環境改變，居住條件不同，人口遷移、一年四季環境氣候等多種因素，兒童感染呼吸道病毒類型的改變也會有一定改變，定期對兒童呼吸道病毒感染類型數據進行統計分析，可加深對本地區病毒流行特點的了解與認識，可給臨床提供及時準確診斷依據，從而給予患兒及時有效的治療，為患者爭取做到早期診斷，早期治療，同時也有助于防止抗生素的濫用[4]，減少患者醫療負擔、監控疾病的大規模感染。