子宮內膜異位癥不孕患者異位內膜組織PAQR3、CAMS、HIF-1α表達及與生育指數關系

陳曉霞 權麗麗

河南省三門峽市中心醫院(472000)

子宮內膜異位癥(EMs)發病率為10%～15%，患者多伴有不孕癥，不孕率達40%[1-2]。EMs是一種具有惡性生物學行為的良性婦科疾患，大量研究證實，新生血管的形成為EMs的發生、發展奠定了基礎關系密切[3]，多種惡性腫瘤及癌前病變組織中而現今缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)已被諸多學者證實其在多種惡性腫瘤及癌前病變中過度表達高表達，因此臨床普遍認為HIF-1α是腫瘤血管生成環節中的形成過程中心啟動分子子[4]。EMs的確切發病機制尚不清楚，但多數學者認可子宮內密種植學說。黏附作用是EMs發生過程中的一個重要環節，是通過一系列位于細胞表面的細胞黏附分子(CAMS)來完成[5]。孕激素和脂聯素分子受體3(PAQR3)在多種腫瘤中可結合絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B-Raf與C-Raf，從而抑制絲裂原細胞外信號調節激酶(MEK)信號通路高爾基體上的膜蛋白，進而調節腫瘤相關生物學行為[6]。本研究檢測EMs不孕患者PAQR3、CAMs、HIF-1α表達情況，并探究與EMs不孕的可能關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年4月-2020年4月就診于本院、術后經病理檢查證實為EMs合并不孕患者42例，年齡(39.3±5.2)歲(28～50歲)，取其異位內膜組織作為異位內膜組，依據美國生殖醫學會(ASRM)分期分為Ⅰ期10例、Ⅱ期15例、Ⅲ期10例、Ⅳ期7例。選擇同期收治的EMs患者30例為在位內膜組，行切開手術或刮宮或切開手術30例EMs患者收集手術時獲得在位內膜作為在位內膜組，年齡(41.3±4.7)歲(27～53歲)；20例另選擇同期因子宮肌瘤患者為正常內膜組，行子宮切除術的20例正常子宮內膜作為正常內膜組，年齡(39.6±5.1)歲(28～49歲)。3組對象月經周期規律穩定，均處于月經增生期，在術前3個月均未應用激素治療，均不存在內分泌性疾病以及內外科相關疾病。本研究經倫理委員會審批?；颊吆炇鹬橥鈺?。

1.2 PAQR3、CAMs與HIF-1α檢測

收集內膜組織，部分經液氮處理30 min后置-80℃保存待用，另一部分經10%濃度甲醛固定，石蠟包埋，5 μm連續切片切片，常規HE染色；免疫組織化學染色分析。小鼠抗人單克隆抗體(Abcam公司)。①PAQR3陽性：為細胞漿內可見淺紫藍色顆粒，陽性細胞數≤10%、≤30%、≤70%和>70%分別記0、1、2、3分；陽性著色強染色為細胞漿內可見可觀察到淺紫藍色顆粒狀染色顆粒且顏色顏色與背景色對比明顯明顯高于背景底色、細胞漿內見可觀察到較紫藍色顆粒狀染色顆粒、細胞漿內可以觀察到有大量紫藍色顆粒狀染色情況時需要依次分別記記為1、2、3分；陽性細胞數評分與陽性細胞染色評分上述兩種記分相加為最終結果，≥3分為陽性，否則為陰性。②CAMs陽性：以腺上皮細胞胞漿或者胞膜中檢出CD44表達為標準，即依據上述位置出現顏色，無色、淡黃、黃色、深黃色分別賦0、1、2、3分；染色范圍<5%、5%～20%、20%～50%、>50%分別賦0、1、2、3分。兩記分相加，≥2分為陽性，否則為陰性。③HIF-1α陽性：著色弱但且染色與陰性對照組強明顯強于陰性對照者、染色著色情況清晰、染色著色程度強等依次分別記為1、2、3分；陽性細胞與切片中總細胞數 <10%、10%～50%，51%～80%，>80%分別賦0、1、2、3分。以上兩項評分相加，≥3分為陽性，否則為陰性。

1.3 EMs生育指數(EFI)

利用EFI評估EMs合并不孕患者腹腔鏡手術分期后自然妊娠情況，評分越高妊娠概率越高。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 不同內膜組織中 PAQR3、CD44、HIF-1α表達

異位內膜組織中PAQR3、HIF-1α、CD44蛋白表達陽性率均低于在位內膜組織及正常內膜組織(均P<0.05)，但不同分期患者異位內膜組織各蛋白表達無差異(P>0.05)。見表1。

表1 各蛋白在不同內膜組織中陽性表達比較[例(%)]

2.2 PAQR3、CD44、HIF-1α表達與患者EFI評分

異位內膜組患者，PAQR3表達陽性者EFI評分(7.26±1.11分)均高于表達陰性者(4.03±0.82分)，CD44、HIF-1α表達陽性者EFI評分(6.00±1.03分、5.55±0.76分)均低于表達陰性者(9.26±0.47分、8.82±0.64分)(t=10.676、6.922、9.164，均P=0.000)。

2.3 PAQR3、CD44以及HIF-1α表達情況與EMs不孕的相關性

PAQR3與EFI評分呈正相關(r=0.312，P<0.05)，CD44、HIF-1α均與EFI評分呈負相關(r=-0.354、-0.305，均P<0.05)。

3 討論

現今EMs公認的病理機理主要有經血逆流、淋巴及靜脈播散、免疫內分泌、遺傳等學說[7]。女性月經周期中存在低氧狀況，子宮內膜功能層的腺細胞和基質細胞中HIF-1α高表達導致細胞大量表達缺氧誘導細胞因子，進而調節靶基因表達情況，使細胞對于缺氧耐受能力提高[8]。本研究結果顯示，相對于正常內膜組，發現HIF-1α蛋白在異位內膜組和及在位內膜組組織中HIF-1α蛋白的表達陽性率較高高于正常子宮內膜組，提示HIF-1α在EMs不孕的發生發展中存在某種作用。EMs疾病涉及多種基因的變異與異常表達，目前認為與子宮內膜細胞異位種植有關的典型生物學因子為CAMS，CAMS為一類細胞膜表面糖蛋白，在組織間黏附中起介導作用，目前研究證實CAMS與腫瘤的侵襲、種植以及轉移有關[9]。EMs雖屬于良性疾病，但能通過細胞增殖作用、生成新生血管、造成局部侵犯和破壞[10]。作為CAMS一員的CD44，能夠與透明質酸結合，維持組織或器官的結構，促進腫瘤細胞浸潤和介導腫瘤細胞遷移[11]。本研究中CD44在異位內膜組中的表達陽性率高于正常內膜組，表明CD44在異位內膜有更強的黏附作用，增加了細胞游走性，加快細胞遷移，并能夠逃過腹腔中自然殺傷細胞的作用，繼而導致腹膜的侵襲并種植，參與EMs進展。吳水梅等[12]研究證實，PAQR3在多種惡性腫瘤中具有明顯的抑癌作用。PAQR3主要通過將Raf-1激酶錨定在高爾基體上，阻斷其與上下游信號分子結合，繼而阻斷 Ras/Raf/MEK/ERK信號聯級通路，抑制使機體腫瘤細胞病灶中細胞增殖、以及遷移過程被抑制與轉化[13]；另外，PAQR3可發揮明顯抑癌作用，作用機制為PAQR3可誘使機體能夠抑制血管內皮生長因子自分泌信號通路激活被抑制，進而負調控由抑制對應信號通路血管內皮生長因子介導的參與血管生成，進而抑制腫瘤細胞增殖血管內皮細胞及血管生成，從而發揮抑癌作用[14]。

本研究中，PAQR3在異位內膜組中的表達陽性率均低于另外兩組，EMs發生風險相對較高。另外，本研究還對PAQR3、CAMs以及HIF-1α與EMs不孕的關系進行探討，以EFI評分作為不孕概率的評價指標，發現PAQR3、CD44、HIF-1α表達陽性患者EFI評分均高于或低于表達陰性患者，且PAQR3、CD44、HIF-1α均與EFI評分相關，提示PAQR3表達陽性率越高，EMs患者妊娠幾率越高，CD44以及HIF-1α表達陽性率越高患者不孕的幾率越大，三者可共同反映EMs患者的不孕與妊娠的概率；另外，不同分期EMs合并不孕患者PAQR3、CD44、HIF-1α表達均未見差異，可能與本研究納入的樣本量較少有關，需進一步擴大樣本量再分析。

綜上所述，EMs合并不孕患者內膜組織PAQR3、CAMs、HIF-1α均表達異常，提示3者可能促進了EMs的發生，進而導致患者不孕；EMs患者PAQRS表達陽性率越高妊娠幾率越高，CD44、HIF-1α表達陽性率越高患者不孕的幾率越大，三者可共同反映EMs患者的不孕與妊娠概率情況。