采用HPLC-RID 法評估市售注射用奧美拉唑鈉專用溶媒中PEG400 含量

劉曉強，付金鳳，魯 涓

（常州市食品藥品纖維質量監督檢驗中心，江蘇 213102）

注射用奧美拉唑臨床多作為當口服療法不適用時十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎及Zollinger-Ellison 綜合征的替代療法，臨床效果顯著，應用十分廣泛［1-3］。注射用奧美拉唑（推注型）配有專用溶媒，溶媒中含有聚乙二醇400（PEG400）以及pH 調節劑等。PEG400 與生物膜具有良好的組織相容性和親和性，可顯著提高藥物在體內的血藥濃度，是一種常用的保濕劑增溶劑，多用于口服液、滴眼液、注射液液體制劑等［4］。但靜脈注射PEG400 可導致溶血反應，因此明確該溶媒中PEG400 含量對藥物安全性研究具有重要意義。

1 儀器與試藥

1.1 試藥 PEG400 對照品（批號20191009，南京威爾化工有限公司）；實驗用水：去離子純凈水（自制）；注射用奧美拉唑（推注型）來源于4 個廠家：批號A102541、A102542、A102543 來源生產企業A（原研廠家），批號B114837、B114838、B114839 來源于生產企業B，批號V137625、V137626、V137627 來源于生產企業C，批號X342684、X342685、X342686 來源于生產企業D。

1.2 儀器 電子天平：METTLER TOLEDO XS105DU；高效液相色譜儀：島津LC-20A+示差檢測器；Milli-Q 純水機（美國Merck）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為PL aquagel OH 20（300 mm×7.5 mm，5 μm）色譜柱1 及PL aquagel OH 20（300 mm×7.5 mm，8 μm）色譜柱2，流動相為水，柱溫為45 ℃，流速為1.0 ml/min，進樣量為10 μl，檢測器溫度為40 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照溶液的制備

2.2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取PEG400 對照品約40 mg，置10 ml 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為4 mg/ml 的對照品溶液。

2.2.1.2 線性溶液的制備 精密稱取PEG400 對照品約10 g，置100 ml 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為100 mg/ml 的對照品儲備溶液。依次取上述對照品儲備液適量2、3.2、2、4.8 和3 ml，分別置100、100、50、100 和50 ml 量瓶中，加水逐級稀釋配制成含PEG400 濃度分別為2、3.2、4、4.8 和6 mg/ml 的系列溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品2 ml，置200 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻即得。

2.2.3 系統適用性溶液的制備 同對照品溶液的制備方法制備。

2.3 專屬性試驗 取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項下色譜條件進樣，采集色譜圖。結果表明，空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液均未在待測成分PEG400 處出峰，未干擾檢測。見圖1。

圖1 空白溶劑（A）溶媒（B）對照品（C）供試品（D）色譜圖

2.4 線性試驗 按“2.2.1.2”項下方法制備溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，制備標準曲線。以對照品峰面積（Y）對濃度（X）作權重回歸計算，結果如下：Y=58 875X+3 069（r=0.999 99）。結果表明：PEG400在2.0～6.0 mg/ml 的范圍內線性關系良好，符合要求。

2.5 檢測限與定量限 定量限溶液的制備方法：精密量取標準曲線1 溶液5 ml，置50 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻即得（0.2 mg/ml）。取上述溶液按“2.1”項下色譜條件進樣。結果表明PEG400 的信噪比為17.7，定量限為0.2 mg/m（l進樣量為10 μl），滿足檢測要求。檢測限溶液的制備方法：精密量取標準曲線1 溶液4 ml，置100 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻即得（0.08 mg/ml）。取上述溶液按“2.1”項下色譜條件進樣。結果表明PEG400 的信噪比為6.9，檢測限為0.08 mg/m（l進樣量為10 μl），滿足檢測要求。

2.6 重復性試驗 按“2.2.2”項下方法平行制備供試品（批號為B114839）溶液6 份，按“2.1”項下色譜條件進樣，測得含量依次為402.46、400.12、402.60、400.49、401.64 和399.66 mg/ml，均值為401.16 mg/ml，RSD 為0.7%，重復性良好。

2.7 中間精密度試驗 由3 位實驗人員分別于3 d按“2.2.1.1”及“2.2.2”項下方法制備對照品溶液各1 份以及供試品（批號為B114839）溶液各6 份，分別采用儀器1、2、3 按“2.1”項下色譜條件進樣分析，測得含量依次為402.46、400.12、402.60、400.49、401.64、399.66、418.82、414.52、409.51、414.51、417.74、409.26、406.44、406.22、408.95、405.88、406.94 和406.25 mg/ml，均值為407.33 mg/ml，計算得RSD 為1.5%，該檢測方法中間精密度良好。

2.8 準確度（回收率）試驗 依次精密稱取PEG400對照品320、400 和480 mg，分別置100 ml 量瓶中，精密加入不含PEG400 的溶媒1 ml，搖勻，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，平行制備3 份。依次取上述溶液按“2.1”項下色譜條件進樣，結果PEG400 低、中、高不同濃度溶液準確度均在100%左右，均值為100.33%，RSD 為0.4%。平行性良好，該方法準確度良好。見表1。

表1 準確度試驗結果（n=9）

2.9 耐用性試驗

2.9.1 柱溫耐用性 依次改變柱溫（40 和50 ℃），取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項下色譜條件進樣，采集色譜圖。PEG400 與相鄰色譜峰之間的分離度符合要求。

2.9.2 流速耐用性 依次改變流速為0.8 和1.2 ml/min，取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項下色譜條件進樣，采集色譜圖。PEG400 與相鄰色譜峰之間的分離度符合要求。

2.9.3 儀器耐用性 依次采用waters2695+2414 示差檢測器舊款、waters2695+2414 示差檢測器新款，均使用色譜柱1，取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項下色譜條件進樣，采集色譜圖。PEG400 與相鄰色譜峰之間的分離度符合要求。

2.9.4 色譜柱耐用性 依次采用色譜柱1、色譜柱2、色譜柱1 和色譜柱2 串聯，采用儀器3 取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項下色譜條件進樣，采集色譜圖。PEG400 與相鄰色譜峰之間的分離度符合要求。

2.10 樣品測定 取4 個廠家12 個批次注射用奧美拉唑鈉樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，結果各廠家注射用奧美拉唑鈉專用溶媒中PEG400 含量均在390 mg/ml 左右。見表2。

表2 4 家生產企業樣品測定結果（n=2） mg/ml

3 討論

仿制藥一致性評價要求仿制藥與原研制劑質量一致，即處方無差異［5-8］。處方無差異即處方成分和含量均無差異。就注射用奧美拉唑鈉（推注型）這個品種，其專用溶媒中的PEG400 就是一致性評價關注的重點和難點之一。

PEG400 屬于大分子化合物，日常使用的C18、C8柱等均無法用于分析該化合物，目前尚無適用性較強的液相色譜檢驗方法。本試驗采用的是凝膠滲透色譜（GPC）/體積排阻色譜（SEC）柱，結合高效液相色譜法及示差檢測器，建立了可以用于定量分析注射用奧美拉唑鈉（推注型）專用溶媒中PEG400 含量的方法。試驗發現，使用中國食品藥品檢定研究院的PEG400對照品（供分子量與分子分布測定用）在現有試驗條件下進樣，可以出3 個色譜峰（分別對應3 個分子量的PEG400），推測該方法可以用于PEG400 的分子量與分子分布測定。

關于色譜柱的沖洗和存放，本試驗用的色譜柱最高僅能耐受50%甲醇水溶液，故在使用完色譜柱沖洗時，請避免使用常規柱沖洗方法，避免對色譜柱造成不可逆損害。官方建議的色譜柱保存條件是0.02%疊氮化鈉溶液，若無法滿足，也可保存在10%甲醇溶液中，若保存在10%甲醇溶液中，再次使用時需用足量的水沖洗該色譜柱以充分恢復柱效。

綜上所述，本試驗建立了注射用奧美拉唑溶媒中PEG400 的HPLC-RID 測定方法，并考查了其專屬性、線性、重復性、中間精密度、回收率、耐用性等，考查項目均符合檢測要求，可用于注射用奧美拉唑溶媒中PEG400 的含量測定。