Perlecan在子癇前期患者外周血中的表達及與VEGF-165的關系分析

張忠霞,王茹,鄧乾葆,許琳,羅書

子癇前期是妊娠期特有疾病,多發生在妊娠20周后,其在世界范圍內發病率約2%～8%[1-2]。對于子癇前期患者,若其病情未得到及時有效控制,不僅會出現血小板減少、肺水腫、肝腎功能損害等多種并發癥,還會增加不良妊娠結局發生風險,如產后出血、胎膜早破、新生兒窒息等。多項研究顯示,胎盤缺血缺氧、血管內皮細胞損傷與子癇前期的發生發展密切相關[3-4]。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是維持內皮細胞完整的重要因子,可增加血管內皮細胞通透性,促進內皮細胞增殖、遷移,其中VEGF-165是最先發現的VEGF因子,是該家族中最典型的代表,可直接誘導血管內皮生長[5]。串珠素(Perlecan)是一種硫酸乙酰肝素糖蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPG)的核心蛋白,廣泛表達于細胞膜、細胞基質,具有維持負電荷屏障、調節血管生成等多項作用,已有研究顯示其與子癇前期的發生有關[6],但其是否影響患者妊娠結局尚缺乏明確報道。本研究通過檢測子癇前期患者外周血中Perlecan、VEGF-165表達,探討二者間關系,旨在為臨床防治提供指導,促進妊娠結局改善。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年6月至2022年5月在海南醫學院第二附屬醫院診治的126例子癇前期患者,其中66例輕度子癇前期患者作為輕度組,60例重度子癇前期患者作為重度組,并選取同期年齡、孕周相匹配的126例產檢正常者為正常組。納入標準:① 輕度組、重度組符合《妊娠期高血壓疾病診治指南(2020)》[7]中相關診斷標準,正常組產檢血壓正常,未出現蛋白尿;② 3組均計劃在我院分娩;③ 均知情本研究方案并自愿簽署同意書。排除標準:① 合并慢性高血壓、糖尿病;② 合并其他妊娠期并發癥;③ 甲狀腺功能亢進或甲狀腺功能減退癥;④ 出血性疾病;⑤ 合并感染性疾病。輕度組年齡25～45歲,平均(37.12±3.44)歲;孕周21～28周,平均(24.61±1.79)周。重度組年齡26～45歲,平均(37.60±3.61)歲;孕周20～28周,平均(24.86±1.52)周。正常組年齡24～43歲,平均(37.48±3.50)歲;孕周20～28周,平均(24.55±1.61)周。3組基礎資料比較,差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

3組入組時均抽取外周靜脈血3 mL,室溫下靜置30 min,離心10 min,分離取上層血清,保存于-80℃低溫冰箱中待測。血清Perlecan、VEGF-165采用美國賽默飛世爾生產的MK3全自動酶標儀進行檢測,試劑盒由儀器配套提供。

1.3 觀察指標

① 比較3組血清Perlecan、VEGF-165水平。② 分析子癇前期患者Perlecan與VEGF-165相關性。③ 比較3組不良妊娠結局發生率。④ 比較不同妊娠結局的子癇前期患者資料。⑤ 分析Perlecan、VEGF-165與子癇前期不良妊娠結局發生的獨立關系。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 3組血清Perlecan、VEGF-165水平比較

126例子癇前期患者血清Perlecan、VEGF-165水平分別為(8.31±1.79)nmol/L、(35.31±6.04)ng/L。3組血清Perlecan、VEGF-165水平比較,差異有統計學意義(P<0.05),且輕度組低于正常組,重度組低于輕度組及正常組(P<0.05)。詳見下頁表1。

表1 3組血清Perlecan、VEGF-165水平比較

2.2 子癇前期患者Perlecan與VEGF-165相關性分析

子癇前期患者Perlecan與VEGF-165呈正相關(r=0.620,95%CI:0.499-0.717,P<0.001),詳見圖1。

圖1 子癇前期患者Perlecan與VEGF-165相關性

2.3 3組不良妊娠結局發生率比較

3組產后出血發生率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。3組胎膜早破、低出生體重、胎兒窘迫、新生兒窒息及不良妊娠結局總發生率比較,差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 3組不良妊娠結局發生率比較[n(%)]

2.4 不同妊娠結局的子癇前期患者資料比較

126例子癇前期患者發生不良妊娠結局43例,發生率為34.13%(43/126)。發生不良妊娠結局的子癇前期患者年齡、孕周、孕產史、子癇或子癇前期病史、受孕方式、吸煙史、飲酒史、妊娠期貧血與良好妊娠結局患者比較,差異無統計學意義(P>0.05)。發生不良妊娠結局的子癇前期患者孕前BMI、高血壓家族史占比、SBP、DBP、UA、Cr高于良好妊娠結局的子癇前期患者,ALB、血清Perlecan及VEGF-165水平低于良好妊娠結局的子癇前期患者,差異有統計學意義(P<0.05)。詳見下頁表3。

表3 不同妊娠結局的子癇前期患者資料比較

2.5 分析Perlecan、VEGF-165與子癇前期不良妊娠結局發生的獨立關系

以子癇前期患者是否出現不良妊娠結局為因變量,以Perlecan、VEGF-165四分位組為自變量,以Q1分位組為對照,經Logsitic回歸模型分析發現,調整混雜因素后Perlecan、VEGF-165仍是子癇前期患者不良妊娠結局的獨立相關因素(P<0.05)。詳見下頁表4。

表4 Perlecan、VEGF-165與子癇前期不良妊娠結局發生的獨立關系

3 討論

目前關于子癇前期的發病及進展因素尚未完全明確,且缺乏特效防治方案,對于病情嚴重者甚至需終止妊娠。目前已有關于子癇前期患者不良妊娠結局的影響因素分析[8-9],但個體化差異明顯。本研究發現,子癇前期患者不良妊娠結局發生率高于正常組,尤其是重度子癇前期患者,其不良妊娠結局總發生率高達45%,嚴重危害母嬰健康。因此,能否通過檢測客觀生化指標判斷患者不良妊娠結局風險仍是臨床研究的重要方向之一。

血管內皮損傷在子癇前期發病、病情進展中的作用已逐漸得到臨床重視[10-11]。VEGF與其受體結合后不僅能維持血壓正常,同時是保持血管代謝平衡的關鍵。已有多項研究指出,子癇前期患者血清VEGF及胎盤組織中VEGF蛋白均降低,主要考慮與其促血管生成因子和抗血管生成因子失衡有關,從而影響胎盤血管發育,胎盤滋養細胞增殖、分化受到抑制,造成胎盤缺血缺氧[12-13]。VEGF-165作為最活躍、特異性結合位點最多的VEGF,可大量、持久誘導血管新生,有研究證實VEGF-165在腦卒中、糖尿病腎病等發生中具有重要作用[14-15],但VEGF-165在子癇前期患者外周血中的表達情況相關研究較少。本研究檢測結果顯示,輕度組血清VEGF-165水平低于正常組,重度組低于輕度組及正常組,這可能與子癇前期患者胎盤絨毛浸潤能力下降、新生血管速度降低有關,且病情越重,其血管內皮功能損傷越明顯,胎盤功能更差。由此推測,臨床上可通過檢測外周血VEGF-165表達情況判斷患者妊娠結局。

Perlecan是基底膜上最先被識別的HSPG,可被體內唯一一種HSPG降解酶Hpa降解后釋放多種活性因子,參與子癇前期胎盤缺血缺氧性損傷及腎損傷[16-17]。郭紅霞等[18-19]學者占比研究結果顯示,Perlecan不僅可通過轉導Ras/Raf-1/MEK/ERK信號通路影響子癇前期小鼠腎小球血管生成,還能通過抑制PI3K/AKT/mTOR信號通路來促進血管內皮細胞過度自噬參與血管生成過程。

Perlecan在子癇前期診斷中的價值亦在王實等[20]研究中證實,當孕血清Perlecan低于9.46 nmol/L時存在子癇前期發病風險,且重度子癇前期患者血清Perlecan水平更低。本研究中血清Perlecan水平在正常孕婦、輕度子癇前期、重度子癇前期孕婦中依次降低,與上述結果具有一致性。經相關性分析發現,子癇前期患者Perlecan與VEGF-165呈正相關。VEGF-165可在基底膜蛋白多糖硫酸乙酰肝素鏈的參與下特異性結合VEGF-165受體,且膜蛋白聚糖-1在低氧誘導血管生長部位等血管生長因子較豐富的區域可延長血管生長因子半衰期,以確保硫酸乙酰肝素鏈與血管生長因子最大化結合,同時VEGF-165也可通過血管生長因子受體-2誘導基底膜蛋白多糖合成,新合成的基底膜蛋白多糖亦能進一步提高內皮細胞上生長因子與受體結合。因此可判斷Perlecan在子癇前期患者病情進展中的作用與調節VEGF-165有關。

子癇前期患者妊娠結局受多種因素影響,本研究通過對比發現,孕前BMI、高血壓家族史、SBP、DBP、UA、Cr、ALB、血清Perlecan及VEGF-165水平在不同妊娠結局的子癇前期患者中均顯示出差異,但調整混雜因素后,Perlecan、VEGF-165仍與子癇前期患者不良妊娠結局獨立相關。Perlecan、VEGF-165表達降低越明顯意味著患者血管內皮細胞增殖減少,血管調節功能降低,患者更易出現血壓升高、血液黏稠度增加等血液流變學問題,胎盤缺氧缺血性損傷越嚴重,胎盤功能狀態變差,嚴重影響胎兒發育。但臨床是否可通過藥物干預增加乙酰肝素酶的消耗,降低Perlecan蛋白的降解,從而緩解子癇前期患者血管內皮損傷,改善患者妊娠結局,這將作為后期研究的方向之一,進一步為子癇前期的治療提供新思路。

綜上所述,Perlecan在子癇前期患者外周血中呈低表達,患者發生不良妊娠結局的機制可能與Perlecan靶向調控VEGF-165影響胎盤新生血管生成有關。