2012～2021年四川成都某醫院臨床患者血型意外抗體篩查結果與疾病類型分析

楊俊龍，張 利，肖 潔，黎 歡，楊 鑫，彭 濤（.西安國際醫學中心醫院輸血科，西安 7000；.西部戰區總醫院輸血科，成都 6008；.四川省婦幼保健院/成都醫學院附屬婦女兒童醫院輸血科，成都 60045）

血型意外抗體是指ABO 血型中抗-A,抗-B之外的血型抗體，又稱不規則抗體[1]，因輸血、妊娠、器官移植或血液制品免疫刺激產生，是導致輸血不良反應、胎兒新生兒溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)、血型鑒定和配血困難、紅細胞輸注無效的主要因素，我國漢族人群陽性率為0.38%～2.38%[2]。為降低意外抗體陽性率，減少輸血不良反應發生，預防紅細胞輸注無效，需對輸(備)血患者進行意外抗體篩查，實施精準輸血方案[3]，但人口老齡化加速導致輸血患者增多，血液資源供不應求，而既往精準輸血方案多關注Rh抗原匹配輸血，較少研究其他血型系統抗體，以及意外抗體與患者疾病特征的關系。本文對近十年醫院血型意外抗體陽性率、抗體特異性、患者年齡、性別、疾病譜進行分析，旨在為優化精準輸血方案、降低意外抗體陽性率、保障患者輸血安全提供參考。

1 材料和方法

1.1 研究對象 通過輸血科采供血管理軟件(CDJQZY2020.05.27，西安長城金智軟件)收集2012年1月～2021年12月西部戰區總醫院申請輸(備)血患者基本信息(疾病診斷、年齡、性別、輸血史、妊娠史)、血型意外抗體篩查及鑒定數據進行分析，共315 456 例患者申請輸(備)血，男性174 463 例(占55.31%)，女性140 993 例(占44.69%)，年齡0～99（46.27±15.21）歲。在病案信息管理系統(V2.0.5，成都信通網易醫療軟件)用國際疾病分類標準(ICD-10)對疾病診斷分類整理，研究經醫院倫理委員會批準經患者或家屬知情同意。

1.2 儀器與試劑 Erytra 全自動血型及配血儀、WADianna 離心機、WADianna 孵育器、人ABO 血型和Rh(D)血型檢測卡、抗人球蛋白卡(西班牙Grifols)；Autoviue 全自動血型及配血儀(美國強生)；低速離心機(安徽中佳KDC-40)；血清學離心機(日本久保田KA-2200)；抗體篩查Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ號細胞(上海血液，美國強生，西班牙Grifols)；抗體鑒定譜細胞(上海血液、荷蘭Sanquin)；ABO 標準細胞，抗-A，抗-B，抗-D，抗-C，抗-c，抗-E，抗-e，抗-M，抗-N，抗-S，抗-s，抗-P1 單克隆抗體試劑(上海血液)；抗-Lea，抗-Leb，抗-Dia，抗-Jka，抗-Jkb，抗-Fya，抗-Fyb，抗-Lua，抗-Lub，抗-Kpa，抗-Kpb單克隆抗體試劑,質控品(荷蘭Sanquin)；所有試劑均經批檢合格且有效期內使用。

1.3 方法

1.3.1 免疫血液試驗方法：用EDTA-K2抗凝管留取4ml 全血標本進行血型鑒定、意外抗體篩查和鑒定，實驗方法包括生理鹽水試驗(normal saline,NS)、凝聚胺試驗(manual polybrene test,MPT)、微柱凝膠試驗(microcolumn gel test,MGT)、直接抗人球蛋白試驗(direct antiglobulin test,DAT)和間接抗人球蛋白試驗(indirect antiglobulin test,IAT)。

1.3.2 意外抗體篩查與鑒定：用抗人球蛋白凝膠卡及抗體篩查Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ號細胞按全自動血型及配血儀標準操作規程進行意外抗體篩查，任意一孔凝集強度≥1+判為陽性，結果均無凝集無溶血判為陰性。意外抗體篩查陽性標本在血型參比室用譜細胞與患者血漿通過多種方法檢測，由反應格局判定意外抗體特異性，檢出同種抗體特異性后需同時確認患者紅細胞相應抗原陰性[4]。

1.3.3 自身抗體鑒定：將患者血清與自身紅細胞進行NS，IAT 或MGT 反應，以凝集強度≥1+判為陽性，結果無凝集無溶血判為陰性，操作方法見輸血技術操作規程[5]。

1.4 統計學分析 在Excel 錄入意外抗體篩查陽性患者信息及抗體鑒定結果，用Excel 對患者年齡分布制作統計圖，用SPSS19.0 軟件對數據統計分析，組間計數資料用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者意外抗體檢出情況 見表1?；颊咭馔饪贵w篩查陽性率0.55%(1 736/315 456)，女性高于男性(0.69% vs 0.44%，χ2=90.107，P＜0.05），有輸血史或(和)妊娠史患者抗篩陽性占比高于無輸血史或(和)妊娠史患者(75.69% vs 22.81%，χ2=971.098，P＜0.05）。40～80 歲抗篩陽性患者占72.93%(1 266/1 736)，20～80 歲不同年齡段女性均多于男性，見圖1。

圖1 意外抗體篩查陽性患者性別和年齡分布

表1 315 456 例患者意外抗體陽性情況

2.2 患者疾病特征 見表2。意外抗體陽性患者以消化系統疾病、血液及造血器官疾病和涉及免疫機制的某些疾病、腫瘤、泌尿生殖系統疾病、循環系統疾病、肌肉骨骼系統和結締組織疾病為主，占80.41%(1 396/1 736)。

表2 1 736 例意外抗體陽性患者疾病特征

2.3 患者意外抗體分布 見表3。1 736 例抗篩陽性患者未做抗體鑒定145 例(8.1%)，抗體鑒定1 595 例(91.9%)，意外抗體以Rh 血型系統(41.57%)、Lewis 血型系統(11.22%)、MNS 血型系統(6.9%)為主，抗體特異性以抗 E(32.41%)、抗-Lea(10.47%)、抗-M(6.08%)為主，其他抗體(35.8%)以未檢出特異性抗體為主。

表3 1 595 例患者意外抗體分布

3 討論

患者意外抗體與輸入相應抗原的紅細胞發生抗原抗體反應是導致輸血不良反應、HDFN，血型鑒定和配血困難、紅細胞輸注無效的主要原因，加強意外抗體篩查與鑒定，實施多抗原匹配的精準輸血對減少意外抗體發生、保障患者輸血安全至關重要?；颊咭馔饪贵w篩查陽性率0.55%，與文獻報道相近[2,5]，女性抗篩陽性率高于男性，與女性患者輸血次數增加和妊娠免疫刺激有關[5]，說明有輸血史或(和)妊娠史的患者更易產生意外抗體?？购Y陽性患者年齡以40～80 歲為主，20～80 歲不同年齡段女性均多于男性，可能與人口老齡化導致老年疾病輸血患者增多有關[6]。因此，對女性、有妊娠史或輸血史、40～80 歲的易產生意外抗體患者，需引起足夠重視。

意外抗體陽性患者疾病以消化系統疾病最多，其次為血液及造血器官疾病和涉及免疫機制的某些疾病、腫瘤、泌尿生殖系統疾病、循環系統疾病、肌肉骨骼系統和結締組織疾病，前6 位系統疾病累計占80.41%，主要原因與醫院科室特色有關。消化內科和普通外科為醫院重點學科，消化道出血、胃炎、胰腺炎、胃和十二指腸潰瘍等疾病治療需多次輸血甚至大量輸血，肝硬化、急/慢性肝衰竭、肝性腦病等患者發生貧血、出血、腹腔積液、黃疸，不僅需要輸注紅細胞，還需血漿置換糾正凝血功能、降低膽紅素[7]，意外抗體占比最高。各種貧血、白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤及骨髓移植患者需多次輸注紅細胞和單采血小板治療，腫瘤患者放化療后需輸血治療，如肺癌、胃癌、食管癌、肝癌、結直腸癌、乳腺癌、宮頸癌等，圍術期大量失血患者需輸血糾正貧血，如腎臟疾病、心臟外科手術、骨科大手術等[8]，均因輸血免疫刺激易產生意外抗體。因此，降低意外抗體陽性率，實施多抗原匹配精準輸血方案應首選上述疾病患者。呼吸系統疾病、神經系統疾病等其他疾病患者因輸血概率低或學科規模小，用血量較少，意外抗體陽性占比較低。既往意外抗體陽性分析和精準輸血方案研究關注減少抗原抗體免疫反應[9]，本文意外抗體陽性患者疾病特征分析對于優先選擇哪類疾病實施精準輸血方案有重要參考價值。

本研究中91.88%意外抗體陽性患者做了抗體鑒定，Rh 系統、Lewis 系統、MNS 系統是檢出意外抗體前三位血型系統，抗-E,抗-Lea,抗-M 是檢出前三位的意外抗體。Rh 系統主要抗原(DCcEe)的免疫原性依次為D＞E＞C＞c＞e[10]，中國人D 抗原陰性僅占0.3%，采用RhD 抗原常規檢測和同型輸血，抗-D 檢出較少，而C，c，E，e 抗原未納入輸血前常規檢測，導致抗-E，抗-C，抗-e，抗-c，抗-Ce和抗-cE 等Rh 系統抗體相關輸血反應和HDFN 報道較多[11]，RhE 抗原陰性患者約占55%～60%，未同型輸血時RhE 陰性患者易受RhE 陽性紅細胞刺激，因此抗-E(占32.41%)遠高于其他抗體[11]。Lewis 系統抗原包括Lea+b-,Lea-b+,Lea+b+,Lea-b-和抗-Lea檢出率93.3%，抗-Leb檢出率5%，抗體多為IgM 型，37℃及IAT 反應凝集強度會弱于22℃以下NS 反應，使用多種方法(NS 法、MPT 法、MGT 法、IAT 法)在不同溫度(37 ℃,22 ℃,4 ℃)檢測可提高抗體檢出率[12]。MNS 系統抗-M 檢出率(88.2%)最高，抗-S(8.2%),抗-Mur(2.7%)，抗-N(0.9%)，多為IgM 型冷抗體，22℃以下常引起ABO 血型正反不一致、配血不合，少部分是IgG型抗體可導致HDFN[13]。以往精準輸血方案只關注ABO 和Rh 血型系統[9]，本研究Lewis 和MNS 抗體比例較高(分別為11.22%，6.9%)，提示臨床制定精準輸血方案時應考慮納入Lewis 和MNS 抗原，至少包含Lea和M 抗原。Kidd，Duffy，Diego，Lutheran 和Kell 抗體雖然占比較少，主要原因與這些血型系統在中國人的抗原頻率、部分低效價抗體的“劑量效應”(與雙劑量抗原純合子譜細胞凝集強度增加，與單劑量雜合子細胞凝集強度減弱或不凝集)、試驗方法和譜細胞的抗原種類有關。Kidd 系統抗體以抗-Jka和抗-Jkb為主,為IgG 型抗體，抗體效價低、凝集強度弱、存在劑量效應，易導致遲發性溶血性輸血反應[14]，使用酶(無花果酶、木瓜酶、菠蘿酶等)處理紅細胞，增強IAT 凝集強度，可提高抗體檢出率[15]。Duffy 系統抗-Fyb占比(84.2%)高于抗-Fya(15.8%)，是由中國漢族人Fya抗原頻率(約99.7%)和Fyb 抗原頻率(約9.2%)不同導致，國產譜細胞大多是Fy(a+b-)或Fy(a+b+),很難找到Fyb純合子Fy(a-b+)細胞而漏檢抗-Fyb，歐洲高加索人群Fyb抗原頻率可達83%[10,16]，使用國產和進口至少2 種譜細胞檢測可提高Duffy 抗體檢出率[17]。Diego 系統抗原(Dia,Dib,Wra,Wrb)在歐洲白種人、非洲人及澳洲土著人中非常罕見，進口抗篩細胞和譜細胞不包含Dia，Wra抗原，而在東亞人群中頻率較高(Dia抗原頻率約5%，蒙古人種中約9.8%)[18]，建議應至少選1 種包含Dia,Dib和Wra抗原的譜細胞進行抗體鑒定，避免漏檢Diego 系統抗體。此外，混合抗體以抗-E 或抗-cE 聯合其他系統抗體為主，增加患者配血相合難度，提示臨床多抗原匹配的精準輸血案的重要性[3,9]。

其他抗體以未檢出特異性抗體為主，其次為自身抗體、冷抗體、類抗體和藥物抗體，主要是系統性紅斑狼瘡、免疫性腎炎和自身免疫性溶血性貧血等疾病患者。未檢出特異性抗體主要由抗原抗體反應凝集強度較低、對照細胞譜無特異性、自身抗體干擾、不同檢測人員操作差異、不同檢測方法等影響產生。自身抗體包括溫自身抗體和冷自身抗體，溫自身抗體多為IgG 型抗體，37℃能與所有紅細胞反應而干擾意外抗體檢測，可將患者DAT 陽性紅細胞放散成DAT 陰性吸收血清中自身抗體后再檢測[12]，冷凝集綜合征患者血液含有高效價抗-I 或抗 HI，為IgM 型抗體，采用37℃孵育、4℃吸收冷抗體或巰基試劑(如DTT,2-Me 試劑)裂解紅細胞上IgM 抗體后，再檢測可消除冷抗體干擾[19]。檢出藥物抗體應盡快反饋給臨床醫生，發生藥物性溶血反應要及時停藥，可采用激素治療[20]。

綜上，患者血型意外抗體篩查陽性情況分析對臨床輸血安全有重要意義，輸血科應針對長期輸血患者(如消化系統疾病、血液及造血器官疾病和涉及免疫機制的某些疾病、腫瘤等)、女性、有妊娠史或輸血史患者進行多抗原(RhCcDEe,Lea,M)匹配的精準輸血，降低意外抗體發生率，提高臨床安全、有效、合理輸血。由于本研究是單中心回顧性研究，時間跨度較大，意外抗體鑒定影響因素較多(如譜細胞的抗原種類、實驗檢測方法、檢測人員操作技術等)，主要對意外抗體陽性率、意外抗體陽性患者的年齡分布、疾病分類及抗體特異性進行分析，未對抗體篩查陰性患者的年齡和疾病特征進行分析，且未檢出抗體特異性占比偏高，后續計劃進行多中心的意外抗體研究，從不同年齡段、不同疾病種類分析意外抗體陽性率，降低未檢出特異性抗體占比，實施多抗原匹配的精準輸血方案，減少意外抗體產生，保障患者輸血安全。