胃癌患者血清c-Myc和PD-L1水平與臨床病理特征及預后的相關性

于晶晶, 張麗柯, 余沛沛

南陽市第一人民醫院 1檢驗科, 2腫瘤實驗室(河南南陽 473000)

胃癌是一種常見的惡性腫瘤,多數患者確診時已處于中晚期,治療的方向多為靶向治療和放療[1]。研究表明中國每年胃癌發病率和病死率在我國同期惡性腫瘤中分別排第2位和第3位[2]。c-Myc是myc家族的磷酸蛋白,可調節細胞增殖、生長、分化、代謝和凋亡,并且在多種腫瘤中呈現高水平表達[3]。程序性死亡配體1(programmed death ligand 1,PD-L1)屬于免疫球蛋白超家族中的分子之一,PD-L1免疫療法是通過阻斷PD-L1信號通路恢復人體自身免疫系統達到治療多種腫瘤的目的,已經證實在胃癌、肺癌、惡性黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤中治療效果較好[4-5]。因此,本研究通過酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測血清c-Myc和PD-L1的水平,分析二者表達與患者臨床病理特征和預后的相關性,旨在為胃癌的有效診治和評估預后提供可靠的參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院自2018年8月至2019年4月收治的96例胃癌患者作為研究對象。其中,男50例,女46例;年齡40～77歲,平均(56.50±7.16)歲。

納入標準:(1)患者腫瘤為單發病變;(2)首次手術治療的患者;(3)具有完整的病史資料;(4)患者手術前均沒有進行新輔助化療及放療;(5)患者進行D2胃癌根治手術;(6)確診為胃癌患者。

排除標準:(1)患者與其他胃部良性腫瘤合并;(2)患者為多發病變;(3)患者不是第一次手術治療;(4)患者手術前進行新輔助化療及放療;(5)患者合并其他惡性腫瘤;(6)有精神障礙患者;(7)合并免疫缺陷疾病患者;(8)合并其他類型重癥疾病患者,如膿毒血癥、急性心腦血管病。

另納入健康體檢者96例為對照組,其中,男48例,女48例;年齡40～77歲,平均(56.71±8.44)歲。兩組的性別、年齡之間差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究經患者及家屬簽署知情同意書,且經本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 酶聯免疫吸附測定法(ELISA)試劑盒(批號:FNab00431)購買于武漢華美生物工程有限公司,PD-L1試劑盒(批號:FNab06281)購買于武漢菲恩生物科技有限公司;酶標儀(型號:SpectraMax i3x)購買于美谷分子儀器(上海)有限公司。

1.2.2 樣品采集 收集所有患者入院后次日清晨空腹外周靜脈血3～4 mL,室溫靜置30 min,5 000 r/min離心8 min,留取上清液,分裝于無菌EP管中,于-20℃冰箱中保存,待檢。

1.2.3 ELISA法檢測血清c-Myc、PD-L1水平 嚴格按照c-Myc、PD-L1ELISA試劑盒說明書配制一系列濃度的標準品溶液,采用酶標儀測定不同濃度標準品在450 nm處的吸光度值,繪制c-Myc、PD-L1的標準品回歸曲線。于-20℃冰箱中取適量血清樣本,解凍,測定各樣本在450 nm處的吸光度值,依據標準回歸曲線計算血清c-Myc、PD-L1水平。

1.2.4 隨訪 所有患者均于手術后進行系統隨訪,隨訪時間為3年,以患者入院檢查方式或者微信、電話隨訪,最晚截止時間為2022年4月。記錄患者術后生存狀態,計算總生存率。隨訪期間無失訪病例。

2 結果

2.1 血清c-Myc和PD-L1表達水平比較 與對照組相比,觀察組患者血清c-Myc、PD-L1水平顯著升高(P<0.05)。見表1。

表1 血清c-Myc和PD-L1表達水平比較

2.2 胃癌患者血清c-Myc和PD-L1表達的相關性 經Spearman相關分析顯示,胃癌患者血清c-Myc和PD-L1表達呈正相關(r=0.431,P<0.05)。見表2。

表2 胃癌組織中c-Myc和PD-L1表達的相關性 例

2.3 血清c-Myc和PD-L1表達情況與臨床病理特征的關系 c-Myc的表達與患者年齡、性別、腫瘤部位無關(P>0.05),與TNM分期、腫瘤直徑、淋巴結轉移、浸潤深度和分化程度有關(P<0.05);PD-L1的表達與患者年齡、性別、腫瘤部位無關(P>0.05),與TNM分期、腫瘤直徑、淋巴結轉移、浸潤深度和分化程度有關(P<0.05)。見表3。

表3 血清c-Myc和PD-L1表達情況與臨床病理特征的關系 例(%)

2.4 血清c-Myc和PD-L1表達情況與胃癌患者3年生存率的關系 c-Myc低表達患者3年累積生存率為88.89%(32/36),高于高表達患者的3年累積生存率76.67%(46/60),差異有統計學意義(P<0.05);PD-L1低表達患者3年累積生存率為86.67%(26/30),高于高表達患者的3年累積生存率78.79%(52/66),差異有統計學意義(P<0.05)。見圖1、2。

圖1 血清c-Myc表達與胃癌患者3年累積生存率的關系

圖2 血清PD-L1表達與胃癌患者3年累積生存率的關系

2.5 COX回歸分析影響胃癌患者預后的危險因素 因變量以胃癌患者3年內是否去世,以c-Myc和PD-L1、TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度、腫瘤直徑和分化程度為自變量進行單因素Cox回歸分析,結果顯示,c-Myc、PD-L1、腫瘤直徑、TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移和分化程度均是影響胃癌患者預后的因素(P<0.05)。多因素Cox回歸分析結果顯示,c-Myc、PD-L1、TNM分期是影響胃癌患者預后的危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 COX回歸分析胃癌患者預后的影響因素

3 討論

目前,胃癌的發生與發展機制仍然還不明確,有研究表明胃癌的發生是原癌基因、抑癌基因和錯配修復基因多種基因綜合作用的結果[6]。而多數學者認為,可能與飲食生活因素、地域環境、慢性胃炎、胃息肉、幽門螺桿菌感染等癌前病變,基因與遺傳等多種因素有關。

胃癌的治療主要有手術治療、化療、放療等,并且效果較好,但胃癌患者生存質量和生存期的延長效果并不理想。

c-Myc的表達受多種機制調控,c-Myc蛋白表達的增加對腫瘤起有利作用[7-8]。本研究中胃癌患者c-Myc的表達升高,進一步驗證前人理論,提示高水平c-Myc促進胃癌的進程。

c-Myc髙度表達于具有增殖活性的成年組織和胚胎組織上,如胃腸上皮組織和皮膚表皮組織中。Kozma等[9]和Yang等[10]通過研究發現c-Myc的表達水平越高,腫瘤發生轉移的可能性越大。c-Myc促進腫瘤生長的主要機制包括促進血管生成、細胞不可控的生長、分化及基因組的不穩定等多種因素[11-12]。Onckia等[13]通過研究還發現c-Myc在原發腫瘤部位明顯要低于轉移部位的表達水平。本研究結果表明,血清c-Myc高表達與TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度、腫瘤直徑和分化程度有關,提示c-Myc高表達可能與胃癌細胞的遷移與侵襲密切相關,與上述研究結果一致。進一步研究發現,胃癌血清中c-Myc低表達患者3年的累積生存率均顯著高于高表達患者的3年累積生存率,且是胃癌患者不良預后的獨立危險因素。表明c-Myc的高表達與胃癌患者的不良預后有關。類似的,Han等[14]也發現胃癌患者預后效果不好則血清c-Myc表達水平較高。

近年來PD-L1的表達及臨床意義的研究比較少。PD-L1是腫瘤免疫逃逸機制中的關鍵分子,在抗腫瘤免疫功能中發揮著關鍵作用。PD-L1在腫瘤的免疫反應中起著負性調節作用,在多種惡性腫瘤中均存在異常表達。PD-L1是表達于巨噬細胞、淋巴細胞等炎癥細胞中的程序性死亡受體1的結合配體,可以對淋巴細胞的功能進行抑制,從而發揮免疫調控作用[15]。既往國內外研究表明,PD-L1是腫瘤免疫逃逸的重要靶點[16-17]。有研究[18]指出,PD-L1在胃癌組織中呈明顯高表達。這與本研究中胃癌患者PD-L1的表達升高的結果一致。進一步研究發現,c-Myc與PD-L1表達呈正相關,表明二者相互作用,促進胃癌進展。此外PD-L1表達與TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度、腫瘤直徑和分化程度有關,提示PD-L1參與胃癌的發生、發展。大量研究也證明,PD-L1是胃癌患者預后的獨立標志物,其在不良預后中表達較高[19-20]。本研究中胃癌患者血清中PD-L1是不良預后的獨立危險因素,與上述研究結果一致,表明PD-L1的高表達與胃癌患者的不良預后關系密切。本研究僅探索胃癌患者血清中c-Myc和PD-L1的表達水平以及與預后的相關性,其具體機制還需進一步研究。

綜上所述,胃癌患者血清c-Myc和PD-L1表達增加,與胃癌患者臨床病理特征有關,對患者的預后評估存在一定的參考價值。進一步研究將擴大研究樣本量,為胃癌的有效診治提供參考依據。

利益相關聲明:所有作者聲明無利益沖突。

作者貢獻說明:于晶晶:實驗操作,論文撰寫,數據整理,統計分析;張麗柯:研究指導,論文修改;余沛沛:數據整理,統計分析。