子宮頸錐切標本三組切緣染色取材模式的應用研究

殷偉杰，宋珍珍，沈彩糯，李紹剛，李賽飛，陸海維

宮頸病變是最常見的婦科疾病之一，采用子宮頸錐切術治療宮頸鱗狀上皮內病變（squamous intraepithelial lesion，SIL）或早期宮頸癌同時具有微創性診斷和治療的作用[1]。有研究報道SIL 病變宮頸錐切切緣陽性患者術后病變殘留率可達23.3%[2]，高級別SIL及以上病變者發現有病變殘留或復發者可達38.8%[3]，故陽性切緣是患者宮頸病灶復發的獨立危險因素[4]。因此，正確識別錐切標本切緣對于診斷的準確性及手術治療效果的評價十分重要。本研究為了尋找一種準確可靠的方法來呈現三組切緣（內側切緣、外側切緣及基底切緣）的完整性，以提高宮頸切緣的精準判讀，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性收集2021 年1—6 月寧波市奉化區人民醫院宮頸錐切術標本28 例（對照組），2021 年7 月至2023 年6 月宮頸錐切術標本106 例（實驗組），所有標本自“12 點”處切開。本研究同期對寧波大市10 家醫療單位進行宮頸錐切標本病理檢查與診斷調查，通過本院主導問卷調查的形式收集各醫院宮頸錐切術標本前處理、取材及HE 切片情況，每家單位回顧性分析5 例宮頸錐切術標本，共計50 例，HE 切片604 張。本研究經寧波市奉化區人民醫院醫學倫理委員會審核通過。

1.2 方法

1.2.1 對照組標本處理 新鮮宮頸錐切標本固定前未行切開展平處理，按浙江省醫療機構管理與診療技術規范[5-6]進行宮頸錐切標本的巨檢規范取材，沿12 點縱向剖開宮頸管依次取材。

1.2.2 對照組切緣完整性評估 三組切緣的完整性評估標準：通過采用HE切片與組織蠟塊外形、大小比對，結合顯微鏡下觀察，如形態大小類似或切片邊緣見灼傷痕跡則判讀為完整，否則判讀為不完整。

1.2.3 實驗組標本處理（1）沿12點切開新鮮宮頸錐切標本，采用展平胃黏膜內鏡黏膜下剝離術（endoscopic submucosal dissection，ESD）[7]標本的方式進行前處理后，用標本針將標本固定在塑料板上，放入專用標本盒，見封三彩圖2，用10%中性甲醛固定24h。（2）取材前標本用流水沖洗15min以上，吸水紙仔細去除標本上的血液及黏液，清晰暴露出黏膜表面后用毛筆在三組切緣均勻涂抹染色液，見封三彩圖3，待染色液稍干燥后按規范取材。（3）切完后將組織復原，采用高像素手機拍照，然后將切取組織塊放入標本盒，按照順序沿同一方向放平擺好，再次照像，方便組織包埋時辨認，見封三彩圖4。（4）常規包埋制片：按切緣染色標記選擇蠟塊包埋方向，需要注意包埋時包埋面一致，按照組織在包埋盒內的位置排列；HE 制片時貼片方向與蠟塊方向一致。

1.2.4 實驗組切緣完整性評估 染色后在顯微鏡下仔細觀察，確認切片三組切緣周緣均出現染色痕跡判讀為完整，見封三彩圖5 ～6，未出現染色痕跡則判讀為不完整。如切緣未顯示色標，繼續深切，完整展現切緣，亦判讀完整切緣。

1.3 統計方法 采用SPSS 22.0 統計軟件進行分析，計數資料采用2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

寧波大市10 家醫療單位宮頸錐切標本病理檢查與診斷調查結果顯示三組切緣完整性率為76.2%，取材前宮頸錐切標本切緣染色率為5%，92%的評估者認為錐切標本的三組切緣完整性不足會對診斷產生影響。對照組宮頸錐切術標本28 例，共計HE 切片338 張，按三組切緣完整性評估標準評估，三組切緣完整213 張，完整率為63.02%。實驗組宮頸錐切術標本106 例，102 例為整塊切除標本，4 例有補切。82 例標本按12 點分點順時針取材；16 例宮頸肥大，按序取材13 ～16 塊組織；8 例宮頸組織較小，難以12 點分點取材，按序取材8 ～10 塊組織。4 例有補切組織聯系婦科醫生辨認位置后按主體標本取材方式取材，取材數量3 ～5 塊組織，共計HE切片1 302張，按切緣完整性的評估方法顯微鏡下觀察，每張切片的內側、外側切緣及基底切緣因有染色色標而易被識別，三組切緣完整1 209 張，完整率為92.86%，較之前取材無染色標記標本三組切緣的完整性明顯提高（＜0.05），見表1。

表1 子宮頸錐切標本切片切緣染色前后對照表 例（%）

3 討論

本研究同期對寧波大市10 家醫療單位進行宮頸錐切標本病理檢查與診斷調查，90%的醫療單位采用浙江省醫療機構管理與診療技術規范對子宮錐切標本進行日常的取材工作，該取材方式存在局限性，因宮頸標本富于纖維及肌組織，會導致切除后標本常常呈“C”形，外口較大，內口狹小，為取材和測量帶來不便。調查顯示，取材后三組切緣的完整率僅76.2%，不能有效評估手術切緣情況。

錐切標本切緣的完整性是準確評價切緣的基礎，且切緣陽性對于不同類型的標本意義也不相同，這就需要病理醫師把每個病變與切緣的距離準確體現在報告中，從而更加體現完整切緣的重要性。然而在實際工作中，經常會遇到標本切片不全，分析其原因，主要有以下四點：（1）組織較硬，邊緣不平整，包埋時沒有做到平整包埋。（2）沒有切緣色標標記，無法判斷切緣是否完整。（3）宮頸錐切標本為“C”型，分點取材，造成外口組織厚，內口組織較簿，甚至部分內口組織缺損。（4）切片過程中部分切片切緣未顯示色標，繼續深切，仍無色標顯示，可能粗修過度，導致人為切片不全。通過對本院數據分析顯示，切緣的不完整性主要原因為取材前標本未展平及無色標標記，導致部分標本切片不全，造成假陽性或假陰性切緣，實驗組采用標本展平前處理及三組切緣染色的取材模式，確保每片組織能縱向均勻連續切取全層，并含有從宮頸內口至外口的全部黏膜，切緣的色標能更好體現標本切緣真實性，為臨床提供有力證據。

有研究報道顯示一種新的宮頸錐切取材方法，有標本類似ESD 的前處理流程，但缺乏手術切緣的色標標記，難于保證手術有效切緣的判斷及包埋方向的確定[8]。ESD 切除術后標本的前處理及切緣的染色使閱片者能準確辨認不同的切緣，鑒于此實踐發現，對宮頸錐切標本采用三組切緣染色和類似ESD 的標本前處理，在對標本切緣的有效性和完整性評估上也能獲得同樣的效果。本院病理科2021年7 月起與婦科醫師合作獲取平整合格的標本后，采用三組切緣染色的取材模式，使三組切緣的完整性有效提升，并嘗試在宮頸錐切標本中也采用大體標本攝影技術，將切開的標本恢復原來的形狀擺好并拍照，最大限度復原標本的細節，便于對標本的三組切緣進行精準評估，有助于后期對照研究。

利益沖突 所有作者聲明無利益沖突