口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液中CYFRA21-1水平與口腔上皮癌變進程的相關性研究

武寶峰 李 宏 孫吏聰

口腔鱗狀細胞癌是發生于口腔黏膜上皮的惡性腫瘤,早期口腔鱗癌多表現為潰瘍增生,后期逐漸增大變成菜花樣腫物或者火山口樣腫物,形成浸潤塊,后期可以轉移,常見有淋巴結轉移和肺轉移[1]。早期口腔鱗癌經過及時治療,治愈率較高,如果出現進展至后期發生轉移,則只能通過放化療輔助治療提高生存質量,治愈率極低[2]。有研究認為口腔黏膜微核細胞計數能夠反應口腔上皮癌變時的染色體損傷情況,而CYFRA21-1則是廣泛應用于各類癌癥診斷的標志物[3-4]。本研究目的為探清兩者與口腔上皮癌變進程的關系,為早期口腔鱗癌較前病變的診斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

對2019年5月至2021年5月期間我院收治的口腔疾病患者102例進行回歸性分析,包括舌白斑57例(白斑組),口腔鱗狀細胞癌45例(鱗癌組),另選同期檢查口腔黏膜正常人員44例(正常組),鱗狀細胞癌根據TNM分期分為早期(Ⅰ、Ⅱ期)組19例和中晚期(Ⅲ、Ⅳ期)組25例。納入標準:①入組患者經檢查均符合舌白斑或口腔鱗狀細胞癌的相關診斷標準[5-6];②年齡25～72歲;③無其他惡性腫瘤患者;④此前無放化療治療史。排除標準:①白色角化病、扁平苔蘚患者;②孕婦患者。正常組人員均為無吸煙史及放化療史,未服用過免疫抑制劑,經體檢無口腔類及其他疾病的完全健康者。白斑組患者男性34例,女性23例,年齡26～72(46.17±7.22)歲;鱗癌組男性29例,女性16例,年齡25～72(46.09±8.03)歲;正常組男性26例,女性18例,年齡27～71(47.16±7.37)歲,三組一般資料對比無統計學意義(P<0.05)。

1.2 方法

1.2.1 口腔黏膜微核細胞計數 使用消毒漱口液對患者口腔進行清理后取刮片刮取各組人員口腔上皮黏膜并固定、染色、制片待檢測。 在400倍顯微鏡(型號:BD-SW50,廠家: 廣東博視達光學儀器有限公司)下觀察涂片并計數,單個涂片計數 500 個細胞,記錄帶有微核的細胞數,并換算出微核細胞百分比數(%)。

1.2.2 血清、唾液CYFRA21-1檢測 采集所有入組人員體檢或住院時空腹上臂靜脈血3 ml,置于無菌抗凝管內,靜置10分鐘,3000轉/分鐘進行30分鐘離心操作,收集血清標本冷凍保存;入組人員于清晨使用消毒漱口液清理口腔后,收集唾液樣本3 ml于試管低溫環境下保存待檢測;采用用酶聯免疫吸附法(ELISA)對血清及唾液中的CYFRA21-1水平進行檢測,試劑盒購自上?？瓢┥锟萍加邢薰?操作步驟參照試劑盒說明書進行。

1.3 觀察指標

①三組人員的口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對比;②鱗癌分組中兩組患者的口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對比;③鱗癌患者病理特征的單因素分析;④鱗癌患者病理特征的多因素分析;⑤口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對早期鱗癌和癌前病變的診斷價值。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 三組人員的口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對比

三組的口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1表達水平為:鱗癌組>白斑組>正常組,三組對比差異具有統計學意義(P<0.05);組間兩兩對比差異具有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 三組人員的口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對比

2.2 鱗癌分組中兩組患者的口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對比

鱗癌患者中晚期組的口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1表達水平均高于早期組,兩組對比差異具有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 鱗癌分組口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對比

2.3 鱗癌患者病理特征的單因素分析及多因素分析

根據單因素及多因素分析顯示,分化程度、淋巴結轉移情況、口腔黏膜微核細胞計數、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1均為口腔鱗狀細胞癌的癌癥進程獨立危險因素(P<0.05)。見表3、表4。

表3 單因素分析

表4 鱗癌患者病理特征的多因素分析

2.4 口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對早期鱗癌和癌前病變的診斷價值

口腔黏膜微核細胞計數、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1單項檢測的敏感度分別為84.0%、72.0%、64.0%,特異度分別為78.9%、68.4%、73.7%;聯合檢測的敏感度和特異度分別為88.0%、84.2%,聯合檢測的敏感度和特異度最高,對早期鱗癌和癌前病變的診斷效能最好,見表5、圖1。

圖1 ROC曲線圖

表5 口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1對早期鱗癌和癌前病變的診斷價值

3 討論

據有關數據統計,國內口腔癌患者數目占頭頸部腫瘤的5%～20%,是僅次于鼻咽癌的頭頸部第二大惡性腫瘤[7-8]。多數口腔癌患者由白斑、紅斑、扁平苔蘚等口腔黏膜癌前病變的長期進展所致,探索能夠幫助預測診斷早期口腔癌和癌前病變的方法對于提高預后情況有著重要意義[9]。微核細胞是真核類生物細胞中的一種異常結構,是由染色體斷裂的小片段形成,正在分裂的細胞中出現微核,是染色體結構變異的結果[10]?？谇话┘鞍┣安∽兓颊叩目谇火つぜ毎诎┳冞^程中的分裂和增值會受到破壞并且損傷到染色體,造成微核細胞數量的增加,因此微核細胞計數與口腔黏膜細胞的癌變可能存在一定聯系,可以作為其診斷預測的研究方向[11]。CYFRA21-1則是常作為上皮細胞源性的腫瘤標志物,在正常人的血清中較低,當CYFRA21-1的表達出現異常升高則提示可能出現惡性腫瘤病變的情況,尤其在肺鱗癌中的陽性率較高,因此,也是肺部鱗狀細胞癌首選腫瘤標志物[12]。其它還有宮頸癌、乳腺癌、膀胱癌也可能會出現CYFRA21-1偏高情況,而一些少數良性疾病也會出現指標輕度升高變化,如呼吸道炎癥、消化道潰瘍等,但是并不能明確證明是惡性病變,通常需要結合其它指標給予判斷[13]。

本研究對口腔癌、癌前病變患者、正常人員的口腔黏膜微核細胞計數以及血清、唾液中CYFRA21-1的含量進行對比,結果顯示口腔癌患者的微核細胞計數以及血清、唾液中CYFRA21-1都要顯著高于癌前病變患者以及正常人員體內的表達,同時不同分期的鱗癌患者的對比結果也顯示中后期患者的微核細胞計數以及血清、唾液CYFRA21-1顯著高于早期患者,提示微核細胞計數以及血清、唾液CYFRA21-1均與口腔黏膜的癌變進程密切相關。國內對于微核細胞與口腔癌的研究鮮有報道,2000年周睿等[14]對口腔黏膜癌前病變脫落的微核細胞計數進行了研究,結果顯示患有白斑等口腔癌前病變疾病患者的微核細胞計數顯著高于正常人,與本次研究結果相一致。細胞角蛋白是組成細胞的重要成分,癌癥患者體內的腫瘤細胞內蛋白酶會將細胞角蛋白分解為CYFRA21-1并進入血液循環系統[15]。本次研究發現不論是口腔疾病患者還是正常人,唾液中的CYFRA21-1都要遠高于其血液中的含量而唾液CYFRA21-1的檢測效能卻低于血清CYFRA21-1檢測,推測可能是因為樣本數據較少的緣故。根據單因素及多因素統計分析得,分化程度、淋巴結轉移情況、口腔黏膜微核細胞計數、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1均為口腔鱗狀細胞癌癌癥進程的獨立危險因素,聯合檢測對早期鱗癌和癌前病變的敏感度和特異度高于口腔黏膜微核細胞計數、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1單項檢測,提示三項聯合檢測的預測效能更高。

綜上,口腔黏膜微核細胞計數及血清、唾液CYFRA21-1與鱗癌等口腔疾病的進程存在密切聯系,可以幫助預測診斷早期口腔鱗癌及癌前病變。