Rab35、TRIM8在子宮內膜癌中的表達及其與患者臨床病理特征和預后的關系*

李 丹,左學騫△,趙海波,孫洪芳,徐志欽,桑銀洲

河北省滄州市人民醫院:1.婦科;2.病理科,河北滄州 061000

子宮內膜癌(EC)是一種發生于子宮內膜上皮的惡性腫瘤,其發病與年齡增加、代謝綜合征和遺傳等有關。早期EC患者可通過手術、放化療等綜合治療獲得較長的生存時間,而晚期患者往往喪失手術時機,預后較差[1-2]。檢測生物標志物可識別、預測疾病復發進展和死亡風險,為臨床治療提供新的靶點。Rab35是一種小鳥苷三磷酸酶(GTPase),參與膜運輸、細胞極性、脂質穩態、免疫、吞噬和細胞分裂等多種細胞過程[3]。研究表明Rab35在腫瘤細胞的膜轉運、信號轉導、細胞分裂增殖、侵襲、轉移和免疫逃避中發揮關鍵作用[4]。有研究報道,Rab35蛋白在EC的發展及浸潤轉移中起到促進作用[5]。三結構域蛋白8(TRIM8)是三結構域(TRIM)蛋白家族的成員之一,在細胞內運輸、細胞增殖、細胞周期調控和腫瘤發生等方面發揮作用[6-7]。目前已有研究證實TRIM8在乳腺癌組織中的表達低于正常組織,TRIM8低表達與乳腺癌預后較差相關[8],且TRIM8在EC癌組織中表達失調,并參與了EC的發生、發展[9]。本研究檢測EC癌組織中Rab35、TRIM8的表達,分析其與EC患者臨床病理特征以及預后的關系,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月至2020年1月本院收治的180例EC患者為研究對象。納入標準:(1)術后病理確診為EC;(2)術前未接受任何形式的抗腫瘤治療;(3)EC癌組織和癌旁正常子宮內膜組織均經病理學證實,癌旁組織無腫瘤細胞侵犯;(4)年齡18歲以上。排除標準:(1)合并其他惡性腫瘤或其他器官轉移癌;(2)合并嚴重心、腦血管疾病;(3)合并自身免疫性疾病;(4)臨床資料不完整;(5)失訪。180例EC患者中年齡≥65歲124例,<65歲56例;病理類型:腺癌148例,其他32例;FIGO分期:Ⅰ～Ⅱ期106例,ⅢA期74例;分化程度:低分化113例,中高分化67例;肌層浸潤深度:<1/2有74例,≥1/2有106例;有淋巴結轉移63例。本研究經本院醫學倫理委員會審核批準(K2016-694),所有患者或其家屬均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1免疫組化法檢測Rab35、TRIM8表達 取手術切除的癌組織以及癌旁子宮內膜組織(距離癌組織5 cm以上),10%中性福爾馬林溶液(pH 7.2～7.4)固定組織,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,制作4 μm切片。取石蠟切片,微波加熱,3%過氧化氫水溶液處理石蠟切片15 min,去除內源性酶活性和氧化還原劑活性,高溫修復抗原。加入兔抗人Rab35 單克隆抗體(1∶100稀釋,臺灣亞諾法生技股份有限公司)、兔抗人TRIM8單克隆抗體(1∶100稀釋,上海西寶生物科技股份有限公司),4 ℃孵育過夜。次日滴加二抗,3,3-二氨基聯苯胺四鹽酸鹽(DAB)顯色,蘇木素細胞核復染,脫水,中性樹膠封片鏡下觀察。以PBS代替一抗為陰性對照組。讀片由本院病理科2名經驗豐富的醫師完成,結合陽性細胞百分比(0分為≤5%,1分為>5%～25%,2分為>25%～50%,3分為>50%～75%,4分為>75%～100%)和染色強度(無染色0分,淡黃色1分,棕黃色2分,棕褐色3分)評價Rab35、TRIM8表達,2個評分相乘積分0～7分為表達陰性,8～12分為表達陽性。

1.2.2隨訪 Ⅰ期EC患者接受腹腔鏡下筋膜外全子宮雙側附件切除術,Ⅱ期、Ⅲ期EC患者接受子宮廣泛切除加盆腔淋巴結清掃以及雙側附件切除術,Ⅱ期、Ⅲ期EC患者術后接受輔助放化療。術后定期門診復查和電話隨訪,共隨訪3年,隨訪截止至2023年1月。統計隨訪期間患者總生存情況,總生存時間定義為確診至死亡或隨訪截止時間。

1.3統計學處理 采用SPSS25.0軟件進行數據分析。計數資料以例數、百分率表示,組間比較采用χ2檢驗。采用多因素Logistic回歸分析影響EC患者預后的因素;采用Kaplan-Meier生存曲線分析EC患者生存情況,比較采用Log-Rankχ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1EC癌組織和癌旁組織中Rab35、TRIM8表達比較 EC癌組織Rab35表達陽性率高于癌旁組織(P<0.05),TRIM8表達陽性率低于癌旁組織(P<0.05),見表1。

表1 EC癌組織和癌旁組織中Rab35、TRIM8表達比較[n(%)]

2.2不同臨床病理特征EC組織中Rab35、TRIM8表達比較 FIGO分期ⅢA期、低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移的EC患者癌組織Rab35表達陽性率高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、肌層浸潤深度<1/2、無淋巴結轉移的EC患者(P<0.05);FIGO分期ⅢA期、低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移的EC患者癌組織TRIM8表達陽性率低于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、肌層浸潤深度<1/2、無淋巴結轉移的EC患者(P<0.05);不同年齡、病理類型EC患者癌組織的Rab35、TRIM8表達陽性率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3不同預后的EC患者臨床資料比較 所有患者均進行了3年隨訪,隨訪期間死亡58例,存活122例,總生存率67.78%。結果顯示死亡組FIGO分期ⅢA期、低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移、Rab35表達陽性、TRIM8表達陰性的比例高于存活組(P<0.05),見表3。

表3 不同預后EC患者臨床資料比較[n(%)]

2.4多因素Logistic回歸分析影響EC患者預后的因素 以EC患者預后(存活=0,死亡=1)為因變量,以FIGO分期、分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移、Rab35、TRIM8為自變量(賦值見表4),進行多因素Logistic回歸分析,回歸采用逐步后退法(α進=0.05,α出=0.10)。結果顯示:FIGO分期ⅢA期、有淋巴結轉移、Rab35表達陽性是EC患者死亡的危險因素(P<0.05),TRIM8表達陽性是EC患者死亡的保護因素(P<0.05)。參見表4。

表4 影響HSCC患者預后的多因素Logistic回歸分析

2.5不同Rab35、TRIM8表達EC患者生存分析 Rab35表達陽性EC患者累積生存率低于Rab35表達陰性患者(Log-Rankχ2=11.523,P<0.001);TRIM8表達陽性EC患者累積生存率高于TRIM8表達陰性EC患者(Log-Rankχ2=9.683,P<0.001)。見圖1。

圖1 不同Rab35、TRIM8表達EC患者Kaplan-Meier生存曲線

3 討 論

EC是嚴重威脅女性健康的上皮組織惡性腫瘤之一,盡管手術、輔助放療和化療提高了早期EC患者的總生存率,但晚期轉移患者預后較差。近年來發現生物標志物與EC的發生、發展和預后相關,在EC診斷和預后預測中具有一定價值[9-10]。

細胞依靠細胞膜運輸來維持細胞結構、細胞形狀和細胞極性,以及器官的結構和功能[11-12]。癌細胞可改變膜運輸,促進上皮-間質轉化和侵襲性表型,導致包括EC在內的癌癥進展[13]。Rab蛋白是進化上保守的GTP結合蛋白,在所有真核細胞中調節細胞膜內運輸,控制在癌癥中過度表達的血小板衍生生長因子受體(PDGFR)、血管內皮生長因子受體(VEGFR)和整合素等生長因子受體的內吞運輸和再循環,增加癌細胞增殖的潛力[14-15]。Rab35屬于Rab蛋白家族成員,是一種致癌性GTPase,參與細胞膜內運輸、細胞動力學,在惡性腫瘤中Rab35致癌體細胞突變,通過磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)依賴機制調節PDGFR運輸導致細胞轉化[3],在癌癥侵襲、轉移和免疫逃避中發揮作用[16]。既往研究顯示Rab35在胃癌組織中激活和募集,并促進胃癌細胞的遷移和侵襲[17];Rab35在EC癌組織和細胞系中表達失調,與EC病情進展有關[5]。本研究發現EC癌組織中Rab35表達陽性率高于癌旁組織,Rab35表達陽性與EC低分化、FIGO分期ⅢA期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移有關,是EC患者死亡的危險因素,提示Rab35可能在EC發病過程中發揮致癌基因作用。Rab35參與EC的機制尚不明確,研究顯示PI3K/Akt信號通路激活促使細胞周期由S期向G2期轉化,導致EC細胞增殖[18-19],Rab35蛋白可消除抑制Akt磷酸化和PI3K信號通路的活性蛋白,能激活PI3K/Akt信號通路誘導正常細胞發生癌變,并促使癌細胞增殖、侵襲和遷移[3]。因此推測Rab35可能通過調控PI3K/Akt信號通路參與EC的發生和發展。

TRIM8基因位于10q24.3染色體上,參與胚胎發育、細胞分化、炎癥、先天免疫等調控,與自身免疫性疾病、心血管疾病、惡性腫瘤等有關[20]。TRIM8在多種惡性腫瘤中表達下調,其表達缺失與癌癥進展有關,比如,TRIM8在乳腺癌中下調,與雌激素受體α水平呈負相關,TRIM8表達缺失顯著增強乳腺癌細胞的增殖和遷移[21]。TRIM8在腎透明細胞癌和結直腸癌中表達下調,上調TRIM8可恢復p53腫瘤抑制作用,導致癌細胞增殖減少或阻滯[22]?；謴蚑RIM8表達可顯著降低膠質母細胞瘤細胞的克隆潛能,TRIM8的轉錄抑制與膠質瘤患者的不良預后有關[23]。既往研究發現TRIM8表達與EC患者預后相關[9]。本研究也發現EC癌組織中TRIM8表達陽性率顯著低于癌旁組織,TRIM8表達陽性率與EC惡性臨床病理特征以及生存率有關,TRIM8可能在EC中發揮抑癌基因作用。p53信號通路激活可抑制EC上皮-間質轉化,癌細胞侵襲和遷移[24]。p53突變在EC中發揮致癌基因作用,與EC晚FIGO病理分期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移有關[25]。TRIM8作為一種p53調節劑,可穩定p53,通過鈍化N-MYC活性恢復p53腫瘤抑制功能,促使癌細胞凋亡[22],TRIM8表達上調可能增強p53活性,誘導癌細胞凋亡[26]。因此推測TRIM8表達陽性可能增強p53腫瘤抑制作用,抑制EC進展,改善患者預后。

綜上所述,EC組織中Rab35表達陽性率上調,TRIM8表達陽性率下調,Rab35表達陽性率增加、TRIM8表達陽性率降低與EC低分化、FIGO分期ⅢA期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移以及低生存率有關。Rab35、TRIM8有望成為EC的潛在標志物和治療靶點,對EC預后分析有著積極的意義。