兩種不同設備封片模塊的應用體會

林齊立 陳永欽 施棟梁 鄭宇輝 楊映紅 福建醫科大學附屬協和醫院病理科 （福建 福州 350001）

內容提要：目的：比較兩種不同設備封片模塊，對其單獨運行的應用價值進行評估。方法：隨機抽取福建醫科大學附屬協和醫院病理科常規石蠟HE切片2000片，分別觀察Roche ⅤENTANA H-E 600全自動染色封片一體機及Leica H&E Staining System Spectra WS二者封片模塊的封片效果及產生的故障。結果：Roche ⅤENTANA H-E 600全自動染色封片一體機及Leica H&E Staining System Spectra WS二者均可單獨運行封片模塊，封片效果穩定，成片率高，設備故障率低。結論：Roche ⅤENTANA H-E 600全自動染色封片一體機：封片效果穩定、即用型耗材成本高但耗材質量穩定，對組織切片保護好。Leica H&E Staining System Spectra WS：封片效果穩定、即用型耗材成本較低且耗材質量穩定，對組織切片保護較差。

在病理組織切片過程中，封蓋蓋玻片是病理技術工作的一項重要工作，其特點為簡單易操作但工作耗時較長，傳統手工封片的方法不僅耗費的大量的人力資源還難以達到臨床技術操作規范的要求。人工操作由于人員的技術水平參差不齊，對膠量控制及氣泡控制均不理想。目前傳統手工封片仍不可避免地接觸到二甲苯等毒害物質，對人體健康造成不利影響。近年來自動化設備已大量應用到臨床病理科日常工作中，自動化封片設備主要優勢在于效率較高以及能最大程度保護操作者，但其對載玻片（樣本）的保護和設備穩定性還需進一步研究。在尋求自動化設備代替人工封片工作的過程中，本文比較了兩種不同設備的封片模塊，取得一些心得體會。

1.材料與方法

1.1 一般材料

隨機抽取2020年12月～2021年6月福建醫科大學附屬協和醫院病理科由Roche ⅤENTANA H-E 600全自動染色封片一體機及Leica H&E Staining System Spectra WS完成的常規石蠟HE切片各1000片。

儀器設備：Roche ⅤENTANA H-E 600全自動染色封片一體機（簡稱：H-E 600），Leica H&E Staining System Spectra WS（簡稱Leica Spectra WS）其中封片模塊為Leica Spectra CV。

主要耗材：ⅤENTANA H-E 600 Coverslip Activator（Roche公司，生產批號：H36438），ⅤENTANA H-E 600 Glass Coverslips（Roche公司，生產批號：220349），Spectra CⅤ X1（Leica公司，生產批號：022322），Spectra Cover Glass（Leica公司，生產批號：4910054316）。

1.2 方法

Roche ⅤENTANA H-E 600程序設置如下：填寫程序名稱為Coversliping，取消勾選Drying，選定Hematoxylin=1，選定Differentiation=0，選定Eosin=1，勾選Coverslip。切片經HE染色后需將載玻片噴漆面（須與組織面一致）朝上裝載在特制的20片進樣盤進行上機，運行上述設置的封片程序Coversliping。

Leica H&E Staining System Spectra WS為聯機系統，單機Leica Spectra CⅤ可獨立運行，無須單獨設置程序。切片經HE染色后需將組織面朝切片架箭頭方向裝載，從Leica Spectra CⅤ進樣倉上機，單獨運行Leica Spectra CⅤ模塊。根據《臨床病理技術操作規范》進行評分，見表1。

表1.病理常規石蠟包埋HE染色切片質量標準及評分表

2.結果

2.1 封片效果

H-E 600的封片模塊，大批量標本無或少量溢膠，出片干凈，顯微鏡下無或極少氣泡，無細小氣泡，封片效果穩定（見表2），根據《臨床病理技術操作規范》評分每片平均為9.676分。Leica Spectra WS封片模塊（Leica Spectra CⅤ），大批量標本無或少量溢膠，出片干凈，顯微鏡下無或極少氣泡，可見少量細小氣泡，封片效果穩定，根據《臨床病理技術操作規范》評分每片平均為9.1分。見圖1、圖2。

圖1.RocheVENTANAH-E600成片圖示

圖2.LeicaSpectraCV成片圖示

表2.《臨床病理技術操作規范》評分片數（張）

2.2 封片效率

H-E 600的封片模塊為單通道模塊，一次進樣20張切片，至烤片風干完成，成片時間為1380s，封片速率為69s/片。Leica Spectra CⅤ為雙通道模塊，每次每個通道進樣30張切片，至烤片風干完成，成片時間為780s，封片速率為13s/片。

2.3 故障及玻片保護

H-E 600的封片模塊故障率較低，發生故障時設備停止運行，設備還原功能嘗試修復設備時，對機上切片保護好。Leica Spectra CⅤ故障發生率較高，但雙通道獨立運行，當其中一個通道發生故障時另一個通道可繼續運行，僅在嘗試人工修復設備時暫停封片，設備自動還原功能嘗試修復設備時可能破壞機上切片。見圖3、圖4。

圖3.H-E600封片故障

圖4.LeicaSpectraCV故障

3.討論

封片技術是病理切片制片的最終環節，也是《臨床病理技術操作規范》要求的質量控制的重要項目。根據《臨床病理技術操作規范》，HE染色切片質量中對封片技術的評分為0～10分[1]。2018年葉恩如等[2]報道了H-E 600與與Leica XL全自動染色機的染色質量差異，但未對二者封片功能進行詳細介紹。傳統手工封片由于人工操作的不確定性導致封片效果較差，溢膠及氣泡均較多，并且耗時較長。長期接觸二甲苯對呼吸、中樞神經及心血管系統造成危害[3]。大多病理科尤其是技術室有不同程度的二甲苯污染，由自動化設備替代手工封片已是大勢所趨[4]。市面上越來越多的自動化封片設備其封片效果、封片效率及其設備穩定性（指設備的故障與修復和維護難度）是臨床工作中最需要關注的參數，主流的自動化封片設備有以H-E 600封片系統為代表的激活劑蓋片法、Leica Spectra CⅤ為代表的模擬手工蓋片法及日本櫻花Tissue-Tek?Film?封片系統為代表的膠帶封片法。由于缺乏日本櫻花Tissue-Tek?Film?封片系統的設備支持，因此實驗僅進行了H-E 600封片系統和Leica Spectra CⅤ的比較。

冉志遠等[5]對日本櫻花全自動染色封片一體機的封片系統（Tissue-Tek?Film?）進行了詳盡的描述，其封片方式與本文兩臺設備均有差異。本文介紹的兩臺設備均在本實驗室有大量實驗數據基礎上進行分析：①從成本上H-E 600的配套試劑價格較高，對耗材質量要求高，其配套的蓋玻片耗材在保存條件欠缺時易發生重片導致封片失敗。②從上機方式上H-E 600對上機操作要求更為嚴格，操作較為復雜。③設備的維護與保養，H-E 600在每次關機時運行自動保養功能對封片模塊無須特別操作。Leica Spectra CⅤ在休眠后重新使用時需進行“快速灌注”以清潔出膠管道，在更換速干膠時需進行“延長灌注”以排空氣泡，需定期更換作為出膠針清洗劑的二甲苯試劑。H-E 600蓋玻片裝載量為7單位，每個單位為170片，總計1190片，當裝載量少于5單位時需添加蓋玻片方可進行進樣操作。Leica Spectra CⅤ的蓋玻片裝載量為單通道300片，雙通道則為600片，當任意一通道蓋玻片低于警戒值時需更換蓋玻片。④H-E 600的封片模塊使用的封片試劑為樣本保存液Coverslip Activator，為無苯的專用試劑（主要含檸檬烯成分），對操作者保護較好。Leica Spectra CⅤ的封片試劑為高清透明樹膠，其中還需用到二甲苯來保養設備，這就大大增加了操作者受有毒試劑侵害的風險。⑤從實驗數據表明，H-E 600的封片模塊與Leica Spectra CⅤ封片效果均較好，在組織不平整產生的大氣泡方面二者均得到一致的結果，Leica Spectra CⅤ出現的細小氣泡與封片劑濃度，噴膠壓力及出膠槍口徑有關，環境溫濕度對其有一定影響[6,7]。

封片效率H-E 600的封片模塊低于Leica Spectra CⅤ。故障率上H-E 600發生故障次數略少于Leica Spectra CⅤ，但Leica Spectra CⅤ較高的故障率也與其處理速度快有關，此外兩個通道發生的故障均計算為一次故障，平均每通道故障率則與H-E 600的封片模塊是接近的。鑒于設備對組織切片的保護作用，對于一些珍貴切片如會診切片、室間質評切片、帶標簽的免疫組織化學染色切片在H-E 600染色封片一體機的封片模塊上可以得到更為穩定的封片效果。H-E 600的封片模塊由于嚴格的上機操作對大批量的工作標本單獨使用封片功能產生了限制，對未染色的標本使用其染色封片一體化功能更有意義。而Leica Spectra CⅤ更適合處理大批量的無標簽或標簽粘貼整齊的切片，其封片效果及安全性均可得到保障，在處理帶標簽的切片上極易發生故障，應該盡量避免。在H-E 600封片模塊的使用中注意到，其封片時使用的樣本保存液Coverslip Activator其主要成分為檸檬烯，對保存條件要求較高，在高溫高濕狀態下易發生變質，因此使用H-E 600封片模塊對切片保存條件產生的影響還需進一步的實驗加以研究。

綜上所述，Roche ⅤENTANA H-E 600與Leica Spectra WS二者的封片功能均適用于臨床病理科工作中大批量HE標本的染色封片工作。Roche ⅤENTANA H-E 600在封片質量上更有優勢，特別適用于會診切片、室間質評切片、帶標簽的免疫組織化學染色切片等珍貴組織切片。無標簽或標簽粘貼整齊的切片應用在Leica Spectra CⅤ上同樣能得到良好的封片效果和封片效率且經濟效益較好。