水稻和土壤中噻蟲胺、啶蟲脒殘留量高效液相色譜分析

樊龍飛　李明　李榮玉　等

摘要：建立了一種用高效液相色譜同時測定噻蟲胺、啶蟲脒在水稻和土壤中殘留量的分析方法。用乙腈提取樣品，經弗羅里硅土柱凈化后，采用SunFireTM C18色譜柱和Waters 2487 紫外檢測器，以甲醇-水（體積比2 ∶3）為流動相，流速為1 mL/min，進樣量5 μL，柱溫30 ℃，在254 nm波長下測定。結果表明，噻蟲胺和啶蟲脒在0.05～10.00 mg/L 范圍內的回歸方程分別為y=6 624.7x+1 018.6、y=7 942.0x+2 351.2，相關系數分別為0.998 6、0.99 94；水稻中噻蟲胺和啶蟲脒的平均回收率分別為81.2%～90.4%、90.9%～100.1%，相對標準偏差分別為198%～3.62%、1.87%～3.63%；土壤中噻蟲胺和啶蟲脒的平均回收率分別為81.7%～86.1%、95.9%～99.0%，相對標準偏差分別為1.77%～3.20%、2.44%～3.62%。該方法簡單、快速、靈敏，準確度和精密度良好，適用于常規分析檢測。

關鍵詞：水稻；土壤；噻蟲胺；啶蟲脒；HPLC

中圖分類號： X592；O657.7+2文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2015）01-0287-02

收稿日期：2014-08-24

基金項目：公益性行業（農業）科研專項（編號：201203038）。

作者簡介：樊龍飛（1989—），男，山東濟寧人，碩士研究生，從事環境化學與毒理研究。E-mail：609406315@qq.com。

通信作者：李明，博士，教授，主要從事環境化學與毒理研究。E-mail：lm21959@163.com。噻蟲胺（clothianidin）、啶蟲脒（acetamiprid）均屬新型煙堿類殺蟲劑，具有低毒、靶標獨特、應用方法多樣等特點[1-2]，被廣泛用于防治水稻、蔬菜等作物的害蟲。稻飛虱是我國水稻生產上的主要害蟲，也是貴州省水稻生產上的首要害蟲。目前啶蟲脒、噻蟲胺已成為防治稻飛虱的主要藥劑，在農業生產中被廣泛使用[3-4]。由于施用單一農藥品種的防治效果一般，且容易使稻飛虱產生抗藥性，現已逐漸采用農藥混配的方式來提高藥效，以及預防抗藥性的產生，這使得多種農藥的混合施用成為防治稻飛虱的新選擇。檢測水稻和土壤中農藥殘留量是了解稻米質量和農藥環境安全性的重要方法。目前關于噻蟲胺、啶蟲脒的單殘留檢測方法已有報道，包括高效液相色譜法、氣相色譜法等[5-12]，但同時分析噻蟲胺、啶蟲脒殘留的方法未見報道。本研究采用高效液相色譜法同時對噻蟲胺、啶蟲脒在水稻、土壤中的殘留進行測定，建立了準確、靈敏的殘留檢測方法，旨在為制定其最大殘留限量提供理論依據。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

儀器：Waters 600E 高效液相色譜儀， 配備Waters 2487 紫外檢測器，色譜柱SunFireTMC18 （5 μm，150 mm×4.6 mm）；AL104 電子分析天平；SHZ-82 恒溫振蕩器；HIS10260D 超聲波清洗器；RE-52A 型旋轉蒸發儀；DFT-250 手提式高速中藥粉碎機；JLGJ4.5 礱谷機。試劑：噻蟲胺原藥（99.9%）；啶蟲脒原藥（99%）；娃哈哈純凈水（用前過0.45 μm 水系濾膜）；甲醇（色譜純）；甲醇、二氯甲烷、丙酮、氯化鈉等，均為分析純。

1.2分析方法

1.2.1樣品采集在水稻生育期，用5 點采樣法采集土壤（0～15 cm 表層土）及水稻植株各約1 kg。稻谷谷粒用小型出糙機脫殼，使谷殼和糙米分開，用粉碎機將谷殼和糙米分別粉碎成米糠和糙米粉，然后混勻。先用剪刀剪碎稻稈，然后用粉碎機粉碎并混勻。土壤經自然風干后用粉碎機粉碎，過40 目篩，混勻后縮分保留0.2 kg，于-20 ℃低溫保存備用。

1.2.2樣品提取和凈化稱取糙米、谷殼、稻稈樣品各5 g，土壤樣品10 g，分別加入250 mL具塞三角瓶中，再加入 50 mL 乙腈。浸泡0.5 h后，振蕩提取2.5 h，抽濾。濾液過無水硫酸鈉除水，用旋轉蒸發儀（水浴溫度35 ℃）濃縮至1 mL，用氮氣吹干。土壤樣品用甲醇定容至5 mL，過0.45 μm有機濾膜，待高效液相色譜測定；水稻樣品用2 mL正己烷、丙酮混合溶液（體積比為1 ∶1）溶解，待凈化。

水稻樣品凈化。先依次將少許脫脂棉、2 cm厚無水硫酸鈉、5 g弗羅里硅土、0.2 g活性炭的混合吸附劑以及2 cm厚無水硫酸鈉加入30 cm×1.2 cm的玻璃層析柱，然后用5 mL正己烷、丙酮的混合溶液（體積比9 ∶1）和5 mL正己烷、丙酮的混合溶液（體積比1 ∶1）依次預淋洗層析柱，待溶劑液面到達吸附層（無水硫酸鈉）表面時加入樣品，再用10 mL正己烷、丙酮的混合溶液（體積比1 ∶1）淋洗，收集洗脫液，用旋轉蒸發儀（水浴溫度35 ℃）濃縮至1 mL，用氮氣吹干，用甲醇定容至5 mL，過0.45 μm有機濾膜，待高效液相色譜測定。

1.2.3檢測條件色譜柱：SunFireTMC18，5 μm，150 mm×4.6 mm（I.D.）；檢測器：Waters 2487 紫外檢測器；流動相：甲醇-水（體積比2 ∶3），使用前過0.45 μm微孔濾膜；流速 1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長254 nm；進樣量5 μL；保留時間：噻蟲胺約為11.1 min，啶蟲脒約為13.0 min；外標法定量。

2結果與分析

2.1標準曲線的繪制

分別稱取噻蟲胺原藥、啶蟲脒原藥0.01 g（精確至0.000 1 g）于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用。將噻蟲胺和啶蟲脒的標準品用甲醇分別稀釋至0.05、05、1、5、10 mg/L，待儀器穩定后，分別進同樣體積的標準樣品，有關色譜見圖1。以色譜峰面積為縱坐標、進樣濃度為橫坐標作圖，得到噻蟲胺和啶蟲脒的標準曲線（圖2），其回歸方程分別為y=6 624.7x+1 018.6、y=7 942.0x+2 351.2，相關系數分別為0.998 6、0.999 4，表明噻蟲胺、啶蟲脒在0.05～10 mg/L范圍內的儀器響應值與濃度呈良好的線性關系。endprint

2.2添加回收率

稱取土壤樣品10 g，糙米、谷殼、稻稈樣品各5 g，分別添加濃度為0.1、0.5、1.0 mg/L的噻蟲胺與啶蟲脒標準液，按上述分析方法提取和凈化并檢測。由表1可見，糙米中噻蟲胺和啶蟲脒的平均回收率分別為88.8%～90.4%、96.1%～100.1%，相對標準偏差分別為2.77%～3.00%、1.87%～340%；谷殼中噻蟲胺和啶蟲脒平均回收率分別為85.1%～87.4%、96.2%～97.2%，相對標準偏差分別為2.85%～3.62%、1.95%～2.62%；稻稈中噻蟲胺和啶蟲脒的平均回收率分別為81.2%～84.3%、90.9%～99.1%，相對標準偏差分別為1.98%～2.27%、1.99%～3.63%；土壤中噻蟲胺和啶蟲脒的平均回收率分別為81.7%～86.1%、95.9%～990%，相對標準偏差分別為1.77%～3.20%、2.44%～362%，均符合農藥殘留量分析的技術要求[13]。

3結論與討論

本研究建立了同時測定噻蟲胺、啶蟲脒在水稻及土壤中殘留量的高效液相色譜分析法。用紫外分光光度計得到噻蟲胺、啶蟲脒在不同波長下的吸光度，在254 nm 波長處二者的吸光度較大；色譜柱采用C18柱；用甲醇和水配成不同比例的流動相，經過對比多種分離情況，確定了當流動相為甲醇-水（體積比2 ∶3）時， 能將噻蟲胺和啶蟲脒的色譜峰有效分離，

表1水稻植株和土壤中噻蟲胺、啶蟲脒的添加回收率及精密度試驗結果

樣品添加濃度

（mg/L）平均回收率

（%）標準偏差

（%）相對標準偏差

（%）噻蟲胺啶蟲脒噻蟲胺啶蟲脒噻蟲胺啶蟲脒糙米谷殼稻稈土壤0.10.51.00.10.51.00.10.51.00.10.51.088.890.489.985.186.887.481.284.384.283.886.181.796.198.2100.196.297.296.890.991.499.197.495.999.02.672.562.493.082.652.491.841.761.672.692.061.453.263.101.872.522.06 1.893.302.351.983.522.692.423.002.842.773.623.052.852.272.091.983.202.391.773.403.16 1.872.622.121.953.632.571.993.622.802.44

且峰面積較大。在所確定的提取、凈化及檢測條件下得到的結果表明，水稻中噻蟲胺、啶蟲脒的平均回收率分別為812%～90.4%、90.9%～100.1%，相對標準偏差分別為198%～3.62%、1.87%～3.63%；土壤中噻蟲胺和啶蟲脒的平均回收率分別為81.7%～86.1%、95.9%～99.0%，相對標準偏差分別為1.77%～3.20%、2.44%～3.62%。該方法操作簡單、快速、靈敏度高，且具有較高的準確度和精密度，適用于同時測定水稻及土壤中的噻蟲胺和啶蟲脒殘留量。

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