比較6種油茶花、葉和籽的多酚含量及其抗氧化活性

陳佩云　湛曄　周安寧　唐淑芬

摘 要：本文采用超聲輔助有機溶劑提取法提取6種不同品種的油茶花、葉和籽的多酚。結果表明，油茶籽多酚含量高于其他組織，油茶籽多酚含量最高的品種為衡陽紅花大果（36.03±2.19）mg·g-1 DW;油茶花多酚含量最高的品種為衡陽紅花大果（21.36±1.01）mg·g-1 DW。利用ORAC法對各品種油茶花、葉和籽的多酚提取液進行檢測，其中最高為衡陽紅花大果油茶種子ORAC值（851.21±9.45）μmol TE·g-1 DW。油茶花、葉和籽多酚與ORAC值存在較好的線性關系（R2>0.80）。

關鍵詞：油茶;多酚;氧自由基吸收能力

Abstract：In this paper， ultrasonic assisted organic solvent extraction was used to extract polyphenols from six different varieties of Camellia oleifera， including flowers， leaves and seeds. The content of polyphenols in Camellia oleifera seeds was higher than that in other tissues. The highest polyphenol content of Camellia oleifera seeds was （36.03±2.19） mg·g-1 DW; the highest polyphenol content of Camellia oleifera seeds was （21.36±1.01）mg·g-1 DW. The highest ORAC value of Camellia oleifera seeds was （851.21±9.54）μ mol TE·g-1 DW. There was a good linear relationship between ORAC and polyphenols of Camellia oleifera （R2>0.80）.

Key words：Camellia oleifera; Polyphenol; ORAC

中圖分類號：TS229

油茶（Camellia oleifera Abel.）是世界四大木本油料之一，與油棕、油橄欖和椰子并稱為世界四大木本食用油料植物[1]。油茶生長在中國南方亞熱帶地區的高山及丘陵地帶，是中國特有的一種純天然高級油料[2]，主要集中在浙江、江西、河南、湖南、廣西。此外，在越南、泰國、馬來西亞和日本等國也有少量栽培[3]。

目前，我國對油茶的開發利用主要集中在油茶籽、油茶餅粕、茶籽殼等方面[4]，而對花、葉的加工利用較少。油茶籽含油30%以上，供食用及潤發、調藥，可制蠟燭和肥皂，也可作機油的代用品[5];茶籽粕中含有茶皂素、茶籽多糖、茶籽蛋白等，它們都是化工、輕工、食品、飼料工業產品等的原料[6];茶籽殼還可制成糠醛、活性炭等[7];茶樹的灰洗頭可殺死虱子包括蟲卵[8]。油茶花作為油茶樹的生殖器官，集中了油茶中的營養物質，富含蛋白質、氨基酸、還原糖、多糖、多酚、黃酮、花青素和維生素等生物活性成分[9]。油茶葉中富含多酚、黃酮、多糖、三萜皂苷和甾體等物質，其提取液具有降血糖、抗凝血、抗血栓形成等功效[10-11]。而豐富的油茶花、葉資源幾乎只用于焚燒堆肥，遭到了極大的浪費，若能有效利用油茶花、葉中的活性成分，可以提高油茶的經濟價值。油茶花、葉和籽中的主要抗氧化活性物質是多酚等成分，溶液萃取法是目前國內應用最為廣泛的油茶餅粕提取方法之一[12]。而ORAC法是國際上檢測抗氧化活性的權威方法之一[13]。研究油茶花、葉和籽中的天然抗氧化物，對油茶資源的再利用具有深遠意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料和試劑

油茶的花、葉、種子，分別摘自江西、安徽、湖南衡陽3個產地，安徽和江西產地均屬于市售，衡陽油茶葉由湖南大三湘油茶資源有限公司油茶實驗基地提供。

甲醇、丙酮、無水乙醇：分析純，天津試劑公司;熒光素鈉鹽、沒食子酸、ABAP（2，2-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽）、Trolox標準品：Sigma公司;福林酚：分析純，安徽博美生物制劑有限公司;96孔黑色酶標板：康寧公司;碳酸鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀：分析純，廣東省化學試劑工程技術研究開發中心。

1.1.2 儀器

DK-S24電子恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設備有限公司生產;JY92-IIN超聲細胞破碎儀，寧波新芝生物科技股份有限公司生產;2000型可見分光光度計，尤尼可（上海）儀器有限公司生產;FLUOstar酶標儀，美國Omega公司生產。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品處理

將經人工挑選的無病蟲害的不同品種油茶花、葉和種子除去多余枝條后，沖洗3次，于50℃干燥箱中烘至恒重，制粉，過60目篩。

1.2.2 標準曲線繪制

配制0.1 mg·mL-1的沒食子酸標準母液，分別吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL和0.5 mL母液于6個10 mL容量瓶中，加入1 mL福林酚顯色劑和2 mL15%的碳酸鈉溶液，定容;室溫下反應2 h后測A760，繪制標準曲線[13]。

1.2.3 總多酚含量的測定

移取0.5 mL稀釋后的多酚提取液于10 mL容量瓶中，記錄稀釋因子，加入1 mL福林酚顯色劑和2 mL的15%碳酸鈉溶液，定容，室溫下反應2 h，測A760，據標準曲線計算沒食子酸含量[14]。

1.2.4 油茶花、葉和種子多酚的提取

以70%乙醇作為溶劑，5 g樣品，料液比1∶15，60 ℃超聲萃取0.5 h，重復3次合并濾液，定容待測。

1.2.5 ORAC值測定

移取20 μL樣品、空白、Trolox標準物質溶液，將40 μL PBS加入一個微型板孔中，在酶標儀內37 ℃下孵育10 min;各孔加入200 μL熒光素溶液37 ℃下孵育20 min;加入 20 μL ABAP溶液（除了加入40 μL?PBS的孔）啟動反應后迅速測量。酶標儀的測定條件為：激發波長485 nm，發射波長535 nm，每周期前振蕩時間8 s、振蕩寬度4 mm，測試周期35個[15-17]。

1.2.6 沒食子酸的當量標準曲線

配制0.1mg·mL-1沒食子酸標準母液，稀釋制成2、4、6、8 μg·mL-1和10 μg·mL-1的沒食子酸標準溶液。用方法1.2.5檢測，制成標準曲線。

2 結果與分析

2.1 油茶多酚粗提物的總酚含量測定

根據實驗方法1.2.2，測得標準曲線公式為y=1.144 5x

-0.169 7，R2=0.997 4。由標準曲線方程和1.2.3得出各樣品總酚含量結果如表1所示，其中衡陽紅花大果油茶籽多酚含量最高（36.03±2.19）mg·g-1 DW。油茶的3種不同器官組織花、葉和籽的多酚含量依次是油茶籽>油茶花>油茶葉;油茶花中，紅花品種的多酚含量明顯高于白花品種。衡陽地區采集的樣品的總酚含量比安徽和江西地區高，可能是運輸過程造成的成分損失。有研究表明，油茶品種的多酚含量與生長海拔成正比，且紅花大果品種是油茶中的優良品種，富含各類天然功能成分[18]。

2.2 油茶多酚粗提物的抗氧化活性分析

2.2.1 油茶多酚粗提物的ORAC值分析

氧自由基吸收能力（Oxygen radical absorbance capacity，ORAC）又被稱為抗氧化能力指數，是近年來國際上普遍使用的測定抗氧化能力新標準，ORAC值與其抗氧化能力成正相關[17]。

Trolox標準曲線和熒光衰減圖，如圖1、圖2所示。Trolox的濃度與net AUC呈很好的線性關系。所有樣品的穩定性試驗的變異系數為都符合美國農業部許可的ORAC分析結果誤差的變異系數≤15%要求。ORAC值的單位為μmol Trolox當量/g樣品。

由圖3所示，測得的結果在（34.24±1.33）～（851.21±9.45）μmol TE·g-1，樣品總酚含量與ORAC值的相關系數R2>0.80，具有較強的線性關系，說明多酚是油茶的主要抗氧化活性成分，但依然存在少量其他抗氧化活性物質。其中油茶葉多酚與ORAC值之間線性關系最強（R2=0.87），其次是油茶籽（R2=0.86）、油茶花（R2=0.80）。

2.2.2 油茶多酚粗提物樣品的抗氧化活性的評價

通過Trolox標準曲線和1.2.6，可以得到一條沒食子酸與Trolox當量曲線y=43.648x+12.95，R2=0.9932。圖4為各樣品多酚含量與當量的對比圖，衡陽產的白花小果油茶籽和紅花大果油茶籽多酚濃度比沒食子酸標準品的當量濃度較高，說明樣品的抗氧化活性比沒食子酸標準品的抗氧化活性更強，分別高4.45%和1.07%。以乙醇為溶劑提取油茶花、葉和籽多酚的同時，茶皂素、茶多糖以及蛋白等物質也同樣析出，導致樣品的當量濃度高于沒食子酸標準品的濃度。其他多數樣品均比沒食子酸標準品當量濃度相近，濃度相差1.06%～48.36%，這是因為油茶花、葉和籽多酚提取物中不僅含有沒食子酸，還有兒茶素、槲皮素等，而不同的多酚物質其抗氧化活性能力不同。

3 結論

本研究主要對6個品種的油茶花、葉和籽的多酚含量及抗氧化活性進行了分析對比。其中油茶籽多酚含量>油茶花>油茶葉;油茶花中紅花多酚含量高于白花;油茶籽多酚含量最高的品種為衡陽紅花大果（36.03±2.19）mg·g-1DW;油茶花多酚含量最高的品種為衡陽紅花大果（21.36±1.01）mg·g-1DW;油茶葉多酚含量最高品種為衡陽白花小果（4.62±0.28）mg·g-1

DW。樣品的抗氧化活性與沒食子酸標準品相近在1.06%～48.36%，甚至衡陽產白花小果油茶籽和紅花大果油茶籽抗氧化活性更強，分別高4.45%和1.07%。沒食子酸丙酯是常用的食用油抗氧化劑，而相同濃度油茶花、葉和籽的抗氧化活性與沒食子酸相近甚至較高，說明其在天然油脂抗氧化劑的開發利用上具有很高的研究價值。

參考文獻：

[1]姚小華，王開良，羅細芳，等.我國油茶產業化現狀及發展思路[J].林業科技開發，2005（1）：3-6.

[2]石 浩，何小娥，丁仁惠，等.油茶餅粕多糖對酪氨酸酶活性抑制作用分析[J].食品工業，2019，40（10）：213-217.

[3]李桂珍，谷 瑤，楊 漓，等.不同油茶品種果殼及餅粕中活性成分的測定[J].廣西林業科學，2019，48（3）：348-352.

[4]王宗成，龍燕萍，彭延波，等.響應面優化油茶葉黃酮提取工藝及抑菌活性研究[J].中國油脂，2017，42（4）：123-126，130.

[5]李志鋼，馬 力，陳永忠，等.我國油茶籽的綜合利用現狀概述[J].綠色科技，2018（6）：191-194.

[6]謝 鳳，鐘海雁.油茶多酚的提取及功能研究進展[J].經濟林研究，2015，33（2）：158-162.

[7]劉 金，張立釗，陳力力，等.油茶籽殼的活性成分及提取方法研究進展[J].食品工業，2018，39（9）：273-276.

[8]毛濃勤，毛加乾.油茶的綜合利用[J].現代農村科技，2013（9）：70.

[9]李辛雷，李紀元，范正琪，等.4種山茶花營成分及有害元素含量分析[J].林業科學研究，2010，23（2）：298-301.

[10]曹清明，鐘海雁，鄔靖宇，等.液相制備油茶葉提取物組分及其結構鑒定[J].經濟林研究，2015（3）：68-74.

[11]陳躍龍，馮寶民，唐 玲，等.油茶葉的化學成分[J].沈陽藥科大學學報，2010（4）：292-294.

[12]姜守剛，蔣建勤，王建營，等.茶多酚的提取分離和分析鑒定研究[J].藥學進展，2005，29（2）：72-77.

[13]嚴 歡，韓 飛，李慕春.ORAC法對薰衣草非精油組分的抗氧化活性研究[J].食品科技，2018，43（12）：277-280.

[14]高 群，張 智，楊可心，等.超聲波-酶法提取油茶多酚的工藝研究[J].中國林副特產，2019（5）：16-20.

[15]王 會.表征抗氧化劑活性的ORAC法[J].河南化工，2019，36（9）：12-16.

[16]Julia W，Christina C，Maximilian S，et al. Technological influence on sensory stability and antioxidant activity of beers measured by ORAC and FRAP[J].Journal of the science of food and agriculture，2019，99（14）：6628-6637.

[17]Liu Y H，Lee T L，Han C H ，et al. Anti-glycation，anti-hemolysis，and ORAC activities of demethylcurcumin and tetrahydroxycurcumin in vitro and reductions of oxidative stress in d -galactose-induced BALB/c mice in vivo[J]. Botanical Studies，2019，60（1）.

[18]楊 柳.油茶花的營養功能研究及產品開發[D].廣州：華南農業大學，2016.