譚寅鳳
(吉林市人民醫院,吉林 吉林 130021)
致瀉性大腸桿菌(DEC)是引起腹瀉的主要致病菌,根據其侵襲性及毒性,臨床將其分為5類,分別為:致病性大腸桿菌(EPEC)、產毒性大腸桿菌(ETEC)、侵襲性大腸桿菌(EIEC)、出血性大腸桿菌(EHEC)和聚集性大腸桿菌(EAEC)。隨著診療技術的不斷提高,將分子診斷技術與傳統的分離方法相結合,能提高致瀉性大腸桿菌引起食物中毒的病原菌檢出率[1],有利于臨床對癥采取治療措施,提高疾病治愈率,促使患者早日康復。下面對500份糞便樣本實施致瀉性大腸桿菌檢測,采用熒光PCR法聯合傳統分離方法,分析致瀉性大腸桿菌陽性率及各相關病原菌檢出率,具體研究內容如下。
1.1 標本來源 2018年6月-10月選取我省幾個具有代表性監測醫院送檢的的500份糞便樣本,均為腹瀉患者。
1.2 試劑與儀器 培養基:GN增菌液;試劑盒:熒光診斷試劑盒購自上海之江生物科技有限公司;儀器:熒光PCR儀,型號為Rotor-gene 6000(Corbett)。
檢測方法:采集的糞便采用GN增菌液,共收集1 mL增菌液,以13000 r/min進行離心處理,時間為2 min,去盡上清,混合入100 μL DNA提取液,置入沸水10 min,以13000 r/min進行離心處理,時間為5 min,取上清,以此作為RT-PCR反應的模板DNA。熒光PCR的反應體系及擴增程度嚴格按照說明書流程實施操作,其程度為,置入37oC環境中2 min,置入94oC環境中2 min,置入93oC環境中15 s轉換成60oC環境中60 s,共循環40次。
2.1 500 份糞便樣本病原菌檢出情況 500份糞便樣本,致瀉性大腸桿菌檢出95份,檢出率為19.00%,各種病原菌檢出率EPEC最高,為8.20%,其次為EAEC,7.00%,EIEC為2.40%,ETEC為1.40%,無EIEC500份糞便樣本,致瀉性大腸桿菌檢出95份,檢出率為19.00%,各種病原菌檢出率EPEC最高,為8.20%,其次為EAEC,7.00%,EIEC為2.40%,ETEC為1.40%,無EIEC。
表1 病原菌檢出分布時間
2.2 病原菌檢出分布時間 致瀉性大腸桿菌6月份檢出率最高,為39.10%,其次為7月份,占16.58%,EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份檢出率最高,可見6月是疾病的高發期,詳見表1。
致瀉性大腸桿菌與普通致病大腸桿菌形態及生化特征無明顯卻別,因此容易出現混淆的情況,只能從血清學角度進區分。食品標準GB 4789公布,致瀉性大腸桿菌銀從血清凝聚方面入手,將國際上常見種類加以分類,確定血清型后實施毒力試驗,但該種檢測方式耗時長且浪費人力物力,病原菌陽性檢出率也不高,不利于病原檢測工作的開展。隨著分子生物技術的發展,其運用到各種疾病的檢測中,熒光PCR法在臨床使用范圍廣泛,將其與傳統分離方法相結合,能快速獲得診斷結果,且靈敏性極高,能提高操作人員工作效率,使其勞動強度降低,簡單省時,具有極高的臨床使用價值[2]。通過本次研究結果可知500份糞便樣本,致瀉性大腸桿菌檢出95份,檢出率為19.00%,各種病原菌檢出率EPEC最高,為8.20%,其次為EAEC,7.00%;致瀉性大腸桿菌6月份檢出率最高,為39.10%,其次為7月份,占16.58%,EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份檢出率最高,可見6月是疾病的高發期,滿足腹瀉病的流行病學特點。
綜上所述,采用熒光PCR法聯合傳統分離方法檢測致瀉性大腸桿菌準確率高,其次,EAEC及EPEC是致瀉性大腸桿菌的主要病原菌。