銀杏葉多糖抗氧化性的研究

李煒嫻 任艷婷 張亞楠 李欣鑫 喬佳欣 尹靈潔 馮彩平

摘 要：為了解銀杏葉多糖對發酵乳品質及其抗氧化活性的影響，采用水提法從銀杏葉中提取多糖，研究不同銀杏葉多糖溶液濃度（0%、0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、025%）對1，1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH）和羥基自由基（·OH）清除的能力。結果表明：銀杏葉多糖溶液在濃度為3.0mg/mL對DPPH的清除率為58.8%，在濃度為2.5mg/mL對·OH的清除率為61.3%，說明銀杏葉多糖有較好的抗氧化性，可進行加工開發利用。

關鍵詞：銀杏葉;多糖;抗氧化活性

中圖分類號 R284文獻標識碼 A文章編號 1007-7731（2021）09-0027-03

Abstract： In order to study the effect of Ginkgo biloba polysaccharide on the quality of fermented milk and its antioxidant activity， the polysaccharide was extracted by water extraction and alcohol precipitation， The scavenging ability of 1， 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical （DPPH） and hydroxyl radical （·OH） at 0%， 0.05%， 0.10%， 0.15%， 0.20% and 025% concentration of Ginkgo biloba polysaccharide solution was studied.The results showed that the scavenging rate of DPPH free radical was 58.8% at the concentration of 3.0mg/mL， and the scavenging rate of OH- free radical was 61.3% at the concentration of 2.5mg/mL， which indicated that Ginkgo biloba polysaccharides had good antioxidant activity， which could provide a basis for the development and utilization of Ginkgo biloba leaves.

Key words： Ginkgo biloba; Polysaccharide; Antioxidant activity.

銀杏（Ginkgo Biloba L.），是一種裸子植物，具有很高的藥物食用價值。在生物演化史上被稱為“活化石”，喜歡生長在沙壤土中。銀杏葉多糖的主要活性化學成分為黃酮類、萜內脂、聚戊烯醇、有機酸、花青素和多糖類化合物，具有較好的藥學功能，能幫助人們活血和止疼，還有降脂的功能[1]。銀杏葉多糖（GBEP）主要成分是萜內酯、黃酮類等具有活性功能的化學成分，其對自由基有清除作用，具有延緩衰老、擴張腦血管、改善毛細血管促進血液循環等作用。最新的研究表明，GBEP對人急性早幼粒白血病細胞增殖也有抑制作用，抑制癌細胞的增殖[2]。GBEP具有廣闊的發展前景，因此，筆者對銀杏多糖進行了深入研究，分析其抗氧化性[3]。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑 銀杏葉：購自學校校醫室;DPPH、葡萄糖、苯酚、濃硫酸、無水乙醇均來自天津航科科技公司，試驗用水均為蒸餾水。

1.2 儀器與設備 BSA124S電子分析天平：賽多利斯科技有限公司;HS電熱鼓風干燥箱：蘇州達瑞電熱有限公司;UV-670紫外-可見分光光度計：上海美譜達儀器有限公司;SGZ離心機：長沙東旺實驗儀器有限公司

1.3 方法

1.3.1 銀杏葉多糖的提取 將清洗過的新鮮銀杏葉風干、粉碎，準確稱取1g的樣品置于燒杯中，將裝有樣品的燒杯放入60℃恒溫鍋，向燒杯中加入30g水攪拌溶解。將溶解后的粗體液在放入高速離心機中，8000r/min下離心25min，重復3次，合并3次上清液。將上清液加入乙醇，沉淀即為多糖，裝入真空盤中，用真空干燥進行濃縮。

1.3.2 銀杏葉多糖含量的測定 銀杏葉多糖的含量的測定可以利用苯酚-硫酸法。取1.0mL銀杏葉多糖溶液，加蒸餾水定容至2mL，再加入1mL的苯酚，混勻后，快速向其中加入5mL的濃硫酸，立即搖勻，放置30min后在490nm處測定其吸光度[3]。

1.3.3 銀杏葉多糖抗氧化性的測定

1.3.3.1 ·OH清除能力 將提前配好的95%乙醇放入比色管中，在一定濃度的1mL樣品溶液放入比色管測定，其吸光度為A1。蒸餾水1mL放入另一種空白管中作為對照，其吸光度為A0。分別加入硫酸亞鐵溶液和H2O2溶液各5mL，放入漩渦混合器旋渦3min，再加入已經配好的3mmol/L水楊酸溶液定容至刻度，立刻放入預熱好的37℃的恒溫水中反應15min后，分別在510nm下的波長下，記錄各自的吸光度值，將各值代入公式計算，分別平行做三次實驗。按如下公式計算清除率[4]：

式中：A0—以蒸餾水代替待測液所得的吸光度;A1—樣品液與H2O2反應后測得的吸光度;A2—水代替H2O2溶液測得的吸光度。

1.3.3.2 清除DPPH能力 DPPH自由基具有單電子，在可見光520nm處有很強的吸收光譜，其顏色是典型的紫色。在DPPH溶液中把銀杏葉多糖清除劑加入，當其把里面的自由基清除掉以后，會使先前的溶液由紫色向黃色或無色變化，吸收值也會相應減小，銀杏葉多糖清除劑能使單電子配對，在520nm用分光光度計進行測量定時，吸光度值也相應減少，溶液褪色。這種變化使其接受電子數量成定量關系，因此可以用這種方法測定。檢測不同濃度的銀杏葉多糖對DPPH的清除能力，以相同濃度VC溶液作陽性對照，計算DPPH的清除率[5-6]。

取1mL0.1mmoL/L的DPPH乙醇溶液于比色管中，分別加入2mL不同比例濃度的多糖樣品液（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/mL），搖勻，暗處靜置30min后于520nm條件下測其吸光度。以VC做陽性對照組，計算DPPH的清除率。DPPH清除率的計算公式如下[7-8]：

式中：A0—蒸餾水與DPPH混合后的吸光度;A1—樣品液與DPPH溶液混合后的吸光度;A2—樣品液與蒸餾水混合后的吸光度。

2 結果與分析

2.1 銀杏葉多糖的含量 如圖1所示，求得線性回歸方程即為葡萄糖的標準曲線，曲線方程為Y=1.3137X+0.2795，（R2=0.9824）。經檢測銀杏葉多糖的含量為5.52%。實驗結果較李化強、吳菲菲等人測得的銀杏葉粗多糖的結果稍大[3]，原因可能是利用水提醇沉法提取的銀杏葉多糖中含有少量蛋白質、脂肪等物質。

2.2 銀杏葉多糖的抗氧化性

2.2.1 對DPPH的清除作用 由圖2可知銀杏葉多糖溶液的濃度差影響著DPPH的清除能力。銀杏葉多糖溶液濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/mL時，對DPPH的清除率分別為23.4%、28.2%、30.8%、42.7%、52.9%、58.6%。當銀杏葉的多糖濃度大于1.5mg/mL時，對DPPH的清除率顯著升高。說明當銀杏葉多糖的濃度增大時，對DPPH的清除能力也增強。相同溶液濃度下，以VC溶液作為陽性對照，對DPPH的清除率為82.9%、87.4%、88.2%、90.8%、92.6%、95.4%。說明陽性對照VC對DPPH也具有較好的清除作用。

2.2.2 對·OH的清除作用 羥自由基系活性氧一種，是人體內目前所知活性強，壽命短的自由基?？墒辜毎け黄茐?，血清抗蛋白酶失去活性，損傷基因導致細胞變異的出現和蓄積，從而導致疾病的發生，嚴重者會對基因造成破壞，導致機體發生系統紊亂。加入自由基清除劑后其破壞明顯降低，以Vc做陽性對照，研究制備的不同濃度的銀杏葉多糖溶液對·OH的清除作用，結果如圖3所示。

由圖3可知，銀杏葉多糖溶液在0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/mL時，對·OH的清除率分別為17.7%、39.0%、48.8%、51.9%、61.3%、59.5%。當銀杏葉多糖濃度在2.5mg/mL時，其清除率為61.3%，而當銀杏葉多糖濃度在3.0mg/mL時，清除率卻有所下降，為59.5%。原因可能是使用紫外分光光度計檢測時造成了誤差。陽性對照VC在濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/mL時，·OH的清除率分別為72.9%、77.8%、82.8%、87.4%、89.7%、95.3%?？梢钥闯鲫栃詫φ誚C具有很好的抗氧化性。

3 結論與討論

利用水提醇沉的方法提取銀杏葉中的多糖，研究不同濃度銀杏葉多糖的抗氧化性。結果表明，銀杏葉多糖濃度在0～3mg/mL內，當濃度增加時，對DPPH的清除能力在逐漸增大，·OH的清除率也在逐漸增高，表明銀杏葉多糖具有良好的抗氧化活性，但銀杏葉多糖對DPPH的清除率明顯低于VC，這與許春雨的研究結果一致[5]。

參考文獻

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[3]楊俊游.銀杏葉多糖提取、純化及其含量的測定[J]海南醫學院學報，2013，19（6）：735-737.

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[8]馮書珍，盧宇鳳，劉南英，徐暢，謝廣燕，馮學珍.海藻多糖的單糖組成對體外抗氧化活性的影響[J].天然產物研究與開發，2019，31（01）：116-121+169.

（責編：王慧晴）