不同類型慢性乙型肝炎患者Th細胞相關因子及血清ADA表達的臨床意義

孫娜

【摘要】 目的：探討不同類型慢性乙型肝炎患者Th細胞相關因子及血清腺苷脫氨酶（adenosine deaminase，ADA）表達的臨床意義。方法：選取荊州市第二人民醫院2019年1月-2021年1月收治的90例乙型肝炎病毒感染相關疾病患者作為試驗組，同期選擇90例健康體檢者作為對照組。比較兩組的Th細胞相關因子、血清ADA表達及乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（hepatitis B virus DNA，HBV-DNA）水平。隨后將試驗組按照疾病不同分為A組（24例，慢性乙型肝炎病毒攜帶者）、B組（46例，慢性乙型肝炎）、C組（20例，慢性乙型肝炎伴肝硬化），再將B組分為B1組（17例，B基因型）、B2組（29例，C基因型），比較組間的上述指標水平，并分析慢性乙型肝炎患者的HBV-DNA與Th細胞相關因子、血清ADA表達的相關性。結果：試驗組的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4、IL-10、ADA表達水平均較對照組高，差異均有統計學意義（P<0.05）。A組、B組、C組IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4、IL-10、ADA表達水平相比，差異均有統計學意義（P<0.05）。A組與B、C組的HBV-DNA水平相比，差異均有統計學意義（P<0.05）;但B組與C組的HBV-DNA水平相比，差異無統計學意義（P>0.05）。B1組的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-10、ADA及HBV-DNA水平均較B2組低，差異均有統計學意義（P<0.05）;IL-4水平較B2組高，差異有統計學意義（P<0.05）。經直線相關性分析，慢性乙型肝炎患者的HBV-DNA與IL-4呈負相關（P<0.05），與IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、ADA均呈正相關（P<0.05）。結論：乙型肝炎病毒感染者存在Th細胞相關因子異常情況;其血清ADA表達水平越高，提示患者的病情越重，臨床需做好相關防治措施。另外，上述指標有利于判斷慢性乙型肝炎患者基因型的不同。

【關鍵詞】 慢性乙型肝炎 腺苷脫氨酶 Th細胞相關因子

Clinical Significance of Th Cell Related Factors and Serum ADA Expression in Patients with Different Types of Chronic Hepatitis B/SUN Na. //Medical Innovation of China， 2022， 19（08）： 046-050

[Abstract] Objective： To explore the clinical significance of Th cell-related factors and serum adenosine deaminase （ADA） expression in patients with different types of chronic hepatitis B. Method： A total of 90 patients with hepatitis B virus infection-related diseases admitted in the Second Hospital of Jingzhou from January 2019 to January 2021 were selected as the experimental group， and 90 healthy subjects were selected as the control group during the same period. Th cell related factors， serum ADA expression and hepatitis B virus DNA （HBV-DNA） levels were compared between the two groups. The experimental group was divided into 3 groups according to different diseases： group A （24 cases， chronic hepatitis B virus carriers）， group B （46 cases， chronic hepatitis B）， and group C （20 cases， chronic hepatitis B with cirrhosis）， group B was divided into group B1 （17 cases， B genotype） and group B2 （29 cases， C genotype）， the levels of the above indicators between the groups were compared， the correlation between HBV-DNA and Th cell related factors， serum ADA expression in patients with chronic hepatitis B were analyzed. Result： The levels of IFN-γ， Th1/Th2， IL-2， IL-4， IL-10 and ADA in the experimental group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression levels of IFN-γ， Th1/Th2， IL-2， IL-4， IL-10 and ADA in group A， B and C were significantly different （P<0.05）. HBV-DNA level in group A was significantly different from those in group B and C （P<0.05）; however， there was no significant difference in HBV-DNA level between group B and group C （P>0.05）. IFN-γ， Th1/Th2， IL-2，

IL-10， ADA expression and HBV-DNA levels in B1 group were lower than those of B2 group， the differences were statistically significant （P<0.05）; IL-4 level was higher than that of B2 group， the difference was statistically significant （P<0.05）. After linear correlation analysis， HBV-DNA and IL-4 of patients with chronic hepatitis B was negatively correlated （P<0.05）， while HBV-DNA were positively correlated with IFN-γ， Th1/Th2， IL-2， and ADA （P<0.05）. Conclusion： Patients with hepatitis B virus infection have abnormalities in Th cell-related factors; the higher the level of serum ADA expression， the more severe the patient’s condition， and relevant prevention and treatment measures need to be taken clinically. In addition， the above indicators are helpful for judging the different genotypes of patients with chronic hepatitis B.

[Key words] Chronic hepatitis B ADA Th cell related factors

First-author’s address： The Second Hospital of Jingzhou， Hubei Province， Jingzhou 434000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.08.011

乙型肝炎具有反復發作、病情復雜、治愈難度大等特點，在國內其病毒總感染率約達60%[1]，長期感染下會反復作用患者的肝臟病灶部位，導致其肝細胞凋亡、肝臟持續纖維化增生，從而引起肝硬化，目前是一種嚴重威脅人類健康的傳染性疾病，引起臨床廣泛關注。乙型肝炎病毒的發病機制可從機體、病毒兩方面進行研究，前者主要探索機體的病毒清除機制，后者則包括基因表達及相關影響因素，文獻[2]研究認為，探討不同基因型乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（hepatitis B virus DNA，HBV-DNA）能夠深入了解乙肝的發病機制，進而確保臨床治療的精準性。近年來基礎免疫性研究的熱點之一即為Th細胞的功能性分化，文獻[3]研究顯示，Th1/Th2平衡失調與病毒、細菌等感染的發生存在明顯聯系。另外，文獻[4]研究表示血清腺苷脫氨酶（adenosine deaminase，ADA）是一種可反映肝損傷的肝細胞胞漿酶，與機體細胞免疫活性存在相關性，但現階段有關于上述兩種指標對于不同基因型慢性乙型肝炎患者的臨床意義研究較少，故筆者做如下闡述。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取荊州市第二人民醫院2019年1月-2021年1月收治的90例乙型肝炎病毒感染相關疾病患者作為試驗組，同期選擇90例健康體檢者作為對照組。試驗組納入標準：年齡>18歲;臨床資料完整;無甲亢類合并癥或糖尿病者。排除標準：血清免疫學證實存在TTV病毒感染、巨細胞病毒及EB病毒者;合并酒精性肝炎、藥物性肝損害者;合并酒精性肝炎、藥物性肝損害者;嚴重免疫功能紊亂性疾病者。對照組納入標準：年齡>18歲;1年內未進行過抗病毒治療或應用過免疫調節劑。排除標準：依從性差。研究對象均已完成知情同意書的簽署流程，且本研究由倫理委員會審核通過。

1.2 方法 收集180例納入對象性別、年齡、飲酒史、吸煙史等基線資料。ADA檢測：于研究對象晨起空腹時取3 mL靜脈血，做好血清分離、冰箱冷存等工作，采用全自動生化分析儀（生產廠家：克勒格瓦尼分析儀器有限公司，型號：OLYMPUS AU640）及相應試劑盒（由上海研生生化試劑有限公司提供）完成檢測。HBV-DNA檢測：于無菌離心管注入2 mL空腹血清標本，離心步驟完成，隨后在另一無菌離心管中轉入200 μL血清樣本，期間需融入等量DNA濃縮液行有效混合，再做好離心、靜置分層處理，留取沉淀后再納入提取液，得到混合液樣本后加入反應板（聚合酶鏈式反應）中，采用基因擴增儀（生產廠家：Applied Biosystem公司，型號：AB7500）及相應試劑（由廣州達健生物科技有限公司提供）完成檢測。Th細胞相關因子檢測：空腹靜脈血采集、離心及血清分離等步驟完成，由第一軍醫大學基礎部生物醫學診斷研究中心提供HBV基因分型微板，并采用購自上海貝西科技發展有限公司提供的定量酶免疫試劑盒完成γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、白細胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白細胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、白細胞介素-10（interleukin-10，IL-10）水平的檢測。

1.3 觀察指標 比較試驗組和對照組的Th細胞相關因子、血清ADA表達及HBV-DNA水平。隨后按照疾病不同將試驗組分組：24例慢性乙型肝炎病毒攜帶者設為A組，46例慢性乙型肝炎（包括17例B基因型與29例C基因型）設為B組，20例慢性乙型肝炎伴肝硬化設為C組，再將B組分為B1組（B基因型）、B2組（C基因型），比較組間的上述指標水平，并分析慢性乙型肝炎患者的HBV-DNA與Th細胞相關因子、血清ADA表達的相關性。

1.4 統計學處理 由SPSS 20.0軟件處理，計量資料采用t檢驗，重復測量資料以F檢驗，組間兩兩對比采用SNK檢驗，用（x±s）表現;計數資料采用字2檢驗，以率（%）表現;直線相關分析法（Pearson）用于變量間相關性的分析。α=0.05為檢驗水準，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 兩組一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 兩組Th細胞相關因子、血清ADA表達比較 試驗組的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4、IL-10、ADA表達水平均較對照組高，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 試驗組間Th細胞相關因子、血清ADA表達及HBV-DNA比較 三組的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4、IL-10、ADA表達水平相比，差異均有統計學意義（P<0.05）。試驗組的HBV-DAN為（4.33±0.45）log10 IU/mL。A組與B、C組的HBV-DNA水平相比，差異均有統計學意義（P<0.05）;但B與C組的HBV-DNA水平相比，差異無統計學意義（P>0.05）。見表3。

2.4 B組間Th細胞相關因子、血清ADA表達及HBV-DNA比較 B1組的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-10、ADA表達及HBV-DNA水平均較B2組低，差異均有統計學意義（P<0.05）;其IL-4水平較B2組高，差異有統計學意義（P<0.05）。見表4。

2.5 相關性分析 經直線相關性分析，慢性乙型肝炎患者的HBV-DNA與IL-4呈負相關（P<0.05），與IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、ADA均呈正相關（P<0.05），與IL-10無相關性（P>0.05），見表5。

3 討論

乙型肝炎易復發，且病程長，目前全球約有4億乙型肝炎病毒感染者，其中亞太地區占75%[5]，臨床通常認為該病的主要發病機制及病理損傷為免疫系統功能紊亂。Penna等[6]學者發現Th1細胞應答在急性自限性乙型肝炎患者中占據主導地位，其誘導分化可反映肝組織病理損傷與病毒清除情況;而Th2細胞的誘導分化則可對Th1細胞分化進行一定抑制，避免其應答過度所致的病理損傷，且能夠促使乙型肝炎病毒感染的慢性化。雖文獻[7]報道Th細胞分化在慢性乙肝患者體內的作用，但針對該病不同基因型患者免疫系統功能狀態評價的相關調查較少。除此之外，ADA也與人體細胞免疫系統存在關聯，ADA是一種可反映患者肝纖維化、肝細胞損害的核酸代謝酶[8]，肝細胞內的ADA可在肝細胞受損時迅速進入血液，進而造成ADA（血清中）活性上升，但鮮有研究分析該指標在慢性乙型肝炎不同基因型患者中的作用。

臨床上，抗原遞呈細胞（特異性）遞呈抗原后會對T細胞前體進行相應誘導[9-10]，逐漸分化為兩種亞型，包括Th0A、Th0B兩種，前者可分泌IL-2、IL-4，后者則能夠分泌IFN-γ、IL-2及IL-4[11-12]。由此也看出IL-4在Th0細胞發展中起到關鍵調控作用。而IFN-γ、IL-2等指標在控制Th細胞亞群平衡過程中起到輔助效果[13]，Th1細胞可通過上述指標水平的上升（旁分泌及自分泌）而增殖[14]，導致Th0細胞逐漸向Th1細胞的方向分化。另外，維持正常免疫功能的重要因素之一即為Th1/Th2應答間的平衡[15]，Th1細胞的誘導分化與肝組織病理損傷、病毒清除均有關;而其細胞因子的產生也會相應增強機體的細胞免疫功能[16-17]，提高巨噬細胞、自然殺傷細胞及細胞毒性T淋巴細胞的活性，會導致肝組織的炎癥損傷更為嚴重[18]。本次研究中，A、B、C三組的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4水平相比，差異均有統計學意義（P<0.05），提示上述指標可有效區分不同的乙型肝炎病毒感染相關疾病;而在B1組、B2組的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4水平比較，差異均有統計學意義（P<0.05），則提示上述指標還能夠區別不同基因型的慢性乙型肝炎患者，也可說明C型患者體內的Th1細胞優勢應答，其肝臟損傷更難控制，整體預后狀況不佳。

文獻[19]研究發現ADA不但可在肝膽疾病鑒別診斷中發揮作用，還能夠作用于核糖核酸1。核糖核酸1可于肝細胞癌細胞系中對乙型肝炎病毒的基因復制行有效刺激，通過刺激核糖核酸結合區與編輯區的方式可促進HBV-DNA的復制[20];另外也可通過提高miRNA-122（肝細胞）水平的方式對HBV病毒感染產生一定預防作用[21]。本次研究也發現ADA與HBV-DNA呈正相關，基于此可知其能夠用于反映慢性乙型肝炎的病情狀況。

綜上所述，慢性乙型肝炎病毒攜帶者、慢性乙型肝炎、慢性乙型肝炎伴肝硬化三種疾病患者可采用Th細胞相關因子及血清ADA表達進行區分，依靠上述指標還可分析乙型肝炎病毒的發病機制及病情狀況，了解其基因分型，盡早做好相關防治工作，值得臨床借鑒。本次研究仍存在納入病例少、隨訪時間短等不足之處，還需進一步相關研究，盡可能保障患者的臨床安全。

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（收稿日期：2021-09-07） （本文編輯：張爽）